重组子导入和筛选精美生物医学课件

1、重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入、表达与筛选重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学（1 1）农杆菌转化法）农杆菌转化法基因枪法基因枪法重组子导入和筛选精美生物医学u基因枪法（基因枪法（gene gun）是依赖高速的）是依赖高速的金属微粒将外

2、源基因金属微粒将外源基因导入活细胞的一种转导入活细胞的一种转化技术。化技术。（二）基因枪介法（二）基因枪介法重组子导入和筛选精美生物医学优点优点：（1 1）无宿主限制。可以对任何基因无宿主限制。可以对任何基因型材料进行转化研究；型材料进行转化研究；(2)(2)靶受体几乎包括所靶受体几乎包括所有具有潜在分化能力的组织或细胞。（有具有潜在分化能力的组织或细胞。（3 3）易）易于操作。于操作。缺点：缺点：如转化频率低、结果的重复性差，易如转化频率低、结果的重复性差，易导致基因沉默，实验成本较高等。导致基因沉默，实验成本较高等。（二）基因枪法（二）基因枪法重组子导入和筛选精美生物医学显微注射技术显微注

3、射技术含目的基因含目的基因的表达载体的表达载体动物受精卵动物受精卵含目的基因含目的基因的受精卵的受精卵早期胚胎早期胚胎雌性动物输雌性动物输卵管或子宫卵管或子宫转基因动物转基因动物显微显微注射注射分裂分裂分化分化移移 植植发发育育重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学含有目的基因的重组宿主细胞（如细菌）可以通过含有目的基因的重组宿主细胞（如细菌）可以通过 规模化的基因工程生产目的蛋白（如激素）规模化的基因工程生产目的蛋白（如激素）重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学第一节基因的表达系统与表达策略第一节基因的表达系统与表达策略重组子导入和筛选精美生物医学重组子

4、导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学凡是转入了载体的细胞都获得了这种凡是转入了载体的细胞都获得了这种抗药性，可以在平板上生长菌落。抗药性，可以在平板上生长菌落。重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学外源基因外源基因抗Amp抗Tet抗

5、抗AmpAmp抗抗AmpAmp抗抗TetTet抗抗TetTet重组重组DNADNA空载体空载体不含有载体或不含有载体或重组重组DNADNA重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学LacZLacZ基因基因 - -半乳糖苷酶半乳糖苷酶在在X/galX/gal培养基上呈现兰色培养基上呈现兰色X-gal X(发色底物发色底物)+gal(半乳糖半乳糖) -半乳糖苷酶半乳糖苷酶重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美

6、生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学检测转基因生物的染色体检测转基因生物的染色体DNADNA上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因 提取受体生提取受体生物全部物全部DNA适当限制适当限制酶切割酶切割DNA片段片段用同位素标记的用同位素标记的目的基因片段杂交目的基因片段杂交显显 出出杂交带杂交带（表明目的基因已插入）（表明目的基因已插入）分子杂交技术分子杂交技术重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。重组子导入和筛选精美生物医学重组子导入和筛选精美生物医学 肺腺癌肺腺癌-cat mRNA -cat mRNA 原位杂交法原位杂交法4004