实验九大肠杆菌课件

1、实验九大肠杆菌实验九大肠杆菌实验九大肠杆菌实验九大肠杆菌实验九大肠杆菌大肠杆菌：大肠杆菌：是引起家畜、家禽大肠杆菌病的病原。是引起家畜、家禽大肠杆菌病的病原。可导致家畜、家禽死亡；大肠杆菌是条件致病菌。可导致家畜、家禽死亡；大肠杆菌是条件致病菌。实验九大肠杆菌实验九大肠杆菌实验九大肠杆菌实验九大肠杆菌实验目的实验目的：1、学习、学习大肠杆菌大肠杆菌与沙门氏菌与沙门氏菌常规微生物学诊断方法常规微生物学诊断方法。2、了解、了解大肠杆菌大肠杆菌与沙门氏菌的形态与与沙门氏菌的形态与染色特性染色特性。3、熟悉、熟悉大肠杆菌大肠杆菌与沙门氏菌的主要与沙门氏菌的主要培养特性培养特性。实验九大肠杆菌 大肠杆菌

2、与沙门氏菌的常规大肠杆菌与沙门氏菌的常规 实验室诊断可按阶段划分实验室诊断可按阶段划分实验九大肠杆菌阶段划分（阶段划分（1 4阶段）阶段）第一阶段：增菌、直接分离培养第一阶段：增菌、直接分离培养第二阶段：纯培养、识别菌落、三糖铁接种。第二阶段：纯培养、识别菌落、三糖铁接种。第三阶段：生化鉴定第三阶段：生化鉴定（IMViC、H2S、硝酸盐还原、运动力、五种糖）、硝酸盐还原、运动力、五种糖）第四阶段：血清学鉴定。第四阶段：血清学鉴定。实验九大肠杆菌病病 料料增菌（亚硒酸盐汤等）增菌（亚硒酸盐汤等）37、18-24h直直 接接 划划 线线 分分 离（麦离（麦 康康 凯凯 、 SS 琼琼 脂和脂和EM

3、B培养基）培养基）37、18-24h选可疑菌落，移植到以下培养基选可疑菌落，移植到以下培养基营养琼脂斜面营养琼脂斜面三糖铁琼脂三糖铁琼脂37、18-24h纯种检验、革兰氏染色镜检纯种检验、革兰氏染色镜检生化反应生化反应血清学鉴定血清学鉴定沙门氏菌、大肠杆菌的一般诊断程序图沙门氏菌、大肠杆菌的一般诊断程序图实验九大肠杆菌内脏、淋巴结内脏、淋巴结小家畜、家禽或胎儿小家畜、家禽或胎儿液态材料液态材料病毒材料病毒材料50%甘油磷酸盐缓冲液甘油磷酸盐缓冲液实验九大肠杆菌【动物尸体剖解的注意事项】n怀疑死于炭疽的动物严禁尸体剖解。怀疑死于炭疽的动物严禁尸体剖解。n有针对性的采集病料。有针对性的采集病料。n

4、作好个人的防护和环境消毒工作。作好个人的防护和环境消毒工作。n盛装病料的容器要求无菌。盛装病料的容器要求无菌。n无菌操作。无菌操作。n病料必须注明名称。病料必须注明名称。n必须低温保存必须低温保存, ,及早送检。及早送检。n动物尸体必须妥善处理动物尸体必须妥善处理( (深埋、焚烧深埋、焚烧) )。实验九大肠杆菌成分和作用成分和作用：1 1、基础培养基：、基础培养基：提供氮源和碳源提供氮源和碳源2 2、胆盐、枸橼酸钠、煌绿：、胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌的生可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。长，而对肠道致病菌抑制作用弱。3 3、乳糖，中性红、乳糖，中性红（pH6.8

5、-8.0pH6.8-8.0，红红橙黄橙黄） ：致病菌：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质菌落淡黄菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色红色 实验九大肠杆菌实验九大肠杆菌实验九大肠杆菌解剖病死鸭解剖病死鸭本次实验操作步骤：本次实验操作步骤：心脏、肝脏等脏器的分离接种心脏、肝脏等脏器的分离接种（SS平板、三糖铁琼脂）平板、三糖铁琼脂）组织触片（血片、肝片等）组织触片（血片、肝片等） 、吉姆萨染色、镜检、吉姆萨染色、镜检37、18-24h观察、记录结果观察、记录结果出具实验报告出具实验报告实验九大肠杆菌姬姆萨染色方法：

6、姬姆萨染色方法：1 1、触片、干燥。用甲醇固定、触片、干燥。用甲醇固定3-53-5分钟。分钟。2 2、将固定的触片浸于盛有稀释液的染色缸中、将固定的触片浸于盛有稀释液的染色缸中（姬姆萨原液（姬姆萨原液1010滴加于滴加于1010毫升中性或弱碱性蒸馏水中即可）毫升中性或弱碱性蒸馏水中即可），染色，染色30-6030-60分钟，或过夜。分钟，或过夜。3 3、水洗、干燥。、水洗、干燥。4 4、镜检：细菌呈蓝黑色，组织、细胞等呈其他色。、镜检：细菌呈蓝黑色，组织、细胞等呈其他色。实验九大肠杆菌实验九大肠杆菌动物尸体剖解顺序观观 察察 体体 表表 皮肤消毒皮肤消毒 切开颈腹部皮肤切开颈腹部皮肤 剥剥 皮皮 观观 察皮下病察皮下病 变变 开开