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文档简介

1、常用免疫组化染色方法 SP 法免疫组化染色1. 原理：链霉素抗生物素蛋白（ SA ）是从链霉素中分 离出的蛋白质，穿透组织的能力比 ABC 、PAP 复合物大，反 应速度快， 它含有四个亚基， 每个亚基都有与生物素 （Biotin ） 连接的部位，且二者间有极强的亲和力， SA 的等电位接近 于 6.5 ，近中性，而卵白素（ Avidin ）为 10，因此， SA 几乎 不与组织中的内源性凝集样物质发生非特异性结合，使用链 霉素抗生物素蛋白 -过氧化物酶放大系统，即可产生低背景、 高放大效果。 S-P 采用生物素标记的第二抗体与链霉素抗生 物素蛋白连接的过氧化物酶及基质素混合液来测定细胞和 组

2、织中的抗原。2. 基本染色方法：（1）石蜡切片脱蜡至水。（2）3%H202室温孵育510分钟，以消除内源性过 氧化物酶的活性。（3）蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟，（如需采用抗原修 复，可在此步后进行 ） 。(4) 510%正常山羊血清(PBS稀释)封闭，室温孵育 10 分钟。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37 C孵育12小时或4C过夜。(5)PBS冲洗，5分钟X 3次。( 6) 滴 加 适 当 比 例 稀 释 的 生 物 素 标 记 二 抗(1%BSA-PBS稀释)，37C孵育1030分钟；或滴加第二代 生物素标记二抗工作液，37 C或室温孵育1030分钟。(7) PBS冲洗，5分钟X 3次。( 8)滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素 (PBS 稀释),37C孵育1030分钟；或第二代辣根酶标记链霉卵 白素工作液，37 C或室温孵育1030分钟。(9) PBS冲洗，5分钟X 3次。( 10)显色剂显色( DAB 或 AEC)。( 11)自来水充分冲洗，复染，封片。(附， 冰冻切片免疫组化染色步骤： 冰冻切片 48um ， 室温放置30分钟后，入4C丙酮固定10分钟，PBS洗，5 分钟X 3次。用3%过氧化氢孵育510分钟，消除内

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