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文档简介

1、会计学1 聚合酶链式反应聚合酶链式反应 第1页/共28页 第2页/共28页 第3页/共28页 第4页/共28页 第5页/共28页 Sample 1. denaturatation 2. Primer annealing 3. Primer extension Region to be copied 第6页/共28页 PCR技术原理 类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列 两端互补的寡核苷酸引物。 模板DNA变性：加热至94左右，双链DNA解离成单链； 模板DNA与引物的退火(复性)：55左右，引物与模板 DNA单链的互补序列配对结合； 引物的延伸：在Taq DNA聚合酶作用下，以d

2、NTP为原料 ，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理， 合成一条新的双链； 重复循环变性-退火-延伸三过程，使DNA扩增量呈指 数上升。 第7页/共28页 n PCR的基本反应步骤 变性 95C 延伸 72C 退火 Tm-5C 第8页/共28页 12345 22 55 72 94 时间（min） 温度 （） PCR的基本原理 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复13步 2530轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 DNA变性 形成2条单链 子链延伸 DNA加倍 第9页/共28页 12345 22 55 72 94 时间（min） 温度 （）

3、 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复13步 2530轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 子链延伸 DNA加倍 DNA变性 形成2条单链 模板DNA 95 第10页/共28页 9550 引物1 引物2 DNA引物 第11页/共28页 50 引物1 引物2 DNA引物 72 Taq酶 Taq酶 第12页/共28页 72 第1轮结束 95 第2轮开始 第13页/共28页 955072 Taq Taq Taq Taq 第14页/共28页 72 第2轮结束 第15页/共28页 模板DNA 第1轮扩增 第2轮扩增 第3轮扩增 第4轮扩增第5轮扩增第6轮

4、扩增 第16页/共28页 第17页/共28页 No. ofNo. Amplicon CyclesCopies of Target 12 24 38 416 532 664 201,048,576 30 1,073,741,8 24 1 cycle = 2 Amplicon 2 cycle = 4 Amplicon 3 cycle = 8 Amplicon 4 cycle = 16 Amplicon 5 cycle = 32 Amplicon 6 cycle = 64 Amplicon 7 cycle = 128 Amplicon 第18页/共28页 PCR仪 第19页/共28页 Home 第20页/共28页 第21页/共28页 第22页/共28页 n n其他 第23页/共28页 、 子鉴定以及人的性别鉴定中 PC

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