富源野葛根中总黄酮的提取工艺研究及含量测定

1、附件4 楚雄师范学院本科毕业论文（设计）开题报告楚雄师范学院本科毕业论文（设计）开题报告书题 目富源野葛根中总黄酮的提取工艺研究及含量测定 姓 名 学 号 2008 系 (院) 化学与生命科学系 专 业 化 学 指导教师 陈 靖 2011年12月20日论文（设计）题目富源野葛根中总黄酮的提取工艺研究及含量测定选题的动因与根据（说明选择本课题的理论价值、实践意义；综述国内外有关本课题的研究动态及见解）野葛根(Pueraria lobat)为豆科植物野葛的根，主要生长于山坡草丛中或路旁及较阴湿的地方。广泛分布于云南、贵州、广东、广西等地。其根为常用生药，味甘辛、性平，具有降低血管阻力，改善心、脑血

2、液循环，减慢心率；同时还具有降血脂，降血糖，降血醇，降低心肌耗氧量，抗衰老，抗癌，抗疲，解肌退热，发表透疹，生津止渴，升阳止泻的功效1-3。其活性成分主要为葛根素(Puer-arin)、木糖甙、金雀异黄素、大豆苷元( Daidzein) 等黄酮类(Isoflavonoids)成分3-4。该类黄酮成分具有降低心肌耗氧量,增加冠脉脑血管血流量，缓解心绞痛，抗心律失常，祛痰，解热，增强机体免疫力，抗病毒，抗氧化作用，抑制细菌活性，抗癌作用，能够防治骨质疏松、心脏病，改善妇女更年期，缓解高血压型头痛等多种药理作用5-8。近年研究表明，葛根还有增强记忆力的功能9-10。葛根及其提取物已广泛应用于心脑血管

3、疾病、高血压、糖尿病等疾病的防治。此外，食用葛根粉是理想的保健食品，是目前国际市场上的畅销保健品。对野葛根中总黄酮的提取，有传统的水提法、醇回流法和醇浸渍法，以及中药提取新技术如超声提取法、微波辅助提取法、酶法和超临界流体萃取法等 11，由于不同的地理环境下生长的野葛根中总黄酮的含量不同，提取工艺也会有所不同。鉴于葛根的重要药用价值，本课题拟采用富源野葛根为原料，以乙醇为溶剂，采用乙醇回流提取法、紫外分光光度法对野葛根中总黄酮含量进行测定12，并对其工艺提取进行相关研究，以期对云南省富源地区野葛根的开发、采摘和进一步综合利用提供基础性资料。课题的主要内容:1、标准曲线绘制 精密称取葛根素对照品

4、0.0215g，用70%乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中，得到0.215mg/mL的葛根素对照溶液，准确吸取该对照溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL于10mL容量瓶中，用70%乙醇稀释定容,得一系列对照品溶液，以1.0mL70%乙醇定容至10mL作空白对照，于250nm处测定各对照品溶液吸光度A，以浓度为纵坐标，总黄酮质量浓度C(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线。2、总黄酮成分提取精密称定野葛根3份，置于50mL三角瓶中，按文献9采用70%乙醇回流法提取总黄酮，既按照料液比1:10加入70%乙醇，于80恒温水浴锅中，回流提取3h，提取3次后抽滤，减压回收溶剂至少量，转至

5、100mL容量瓶中，70%乙醇定容。3、单因素法提取富源县野葛根中总黄酮成分(1)最佳回流时间筛选实验在已知固定提取温度、料液比和乙醇浓度条件下，筛选最佳回流时间。取富源县野葛根，在已知固定提取温度、料液比和乙醇浓度条件下：提取温度80，料液比为1:10；乙醇浓度70%；分别提取1、3、5、7h，提取筛选出最佳回流时间。(2)最佳乙醇浓度筛选实验在已知提取温度、料液比和回流时间条件下，筛选最佳乙醇浓度。取富源县野葛根，提取温度、料液比和回流时间固定：提取温度80，料液比为1:10，回流时间3h；采用乙醇浓度梯度60%、70%、80%、90%分别提取，筛选出最佳乙醇浓度。(3)最佳提取温度筛选实

6、验在已知料液比、回流时间和乙醇浓度条件下，筛选最佳提取温度。取富源县野葛根，料液比、回流时间和乙醇浓度固定：料液比为1:10，回流时间3h，乙醇浓度70%。在已知回流时间和乙醇浓度条件下，在50、60、70、80 温度分别提取的方法，筛选出最佳提取温度。(4)最佳料液比筛选实验 在已知提取温度、回流时间和乙醇浓度条件下，筛选最佳料液比。取富源县野葛根，提取温度、回流时间和乙醇浓度固定：在物料比为1:5、1:10、1:15、1:20，筛选出最佳料液比。4、样品总黄酮含量测定取上述待测原溶液4mL，置于50mL容量瓶中，加70%乙醇定容至刻度，摇匀。取稀释液1.0 mL，置于10mL容量瓶中，按照

7、标准曲线绘制项下的方法，在250nm下测定其吸光度A，按回归方程计算出样品溶液中的总黄酮含量(mg/mL)，根据稀释倍数及样品质量换算出样品中总黄酮的含量(%)。研究方法:乙醇回流提取法、 单因素法、紫外分光光度法测定野葛根中总黄酮含量法。完成期限和采取的主要措施:本课题完成期限为:2010年12月20日-2011年5月14日。完成期限:2010年11月-2010年12月 查阅相关资料、开题2011年3月-2011年4月 实验2011年4月-2011年5月 撰写毕业论文、修改、定稿2011年5月-2011年6月 提交毕业论文、答辩 主要措施:乙醇回流提取法、紫外分光光度法测定野葛根中总黄酮含量

8、法。主要参考资料：1赖洋林,唐冰.葛根的实验研究与临床应用新进展J.中国中药杂志,1989,14(5):52-55.2苗慧.异黄酮化合物的药理作用J.国外医药药学分册,1989,16(6):355-358.3郭建平,孙其荣,等.葛根药理作用研究进展J.中草药,1995,26(3):163-165. 4顾志平,陈碧珠,等.中药葛根及其同属植物的资源利用评价J.药学学报,1996,31(5):387-393.5陈学林,张银环,等.葛根素治疗冠心病心绞痛的临床评价J.临床心血管杂志,1997,13(3):167.6马琳,何娅.葛根素注射液治疗急性脑梗塞68例J.陕西中医,1999,20(1): 11

9、. 7申竹芳,谢明智.葛根素与阿司匹林复方的降血糖作用J.药学学报,1985, 20(11):863-865.8孙克杰,汤坚.异黄酮化台物在不同氧化体系中的作用研究J.食品科学,2001,22(3):2 2-26.9徐晓虹.葛根素注射液对慢性乙醇中毒小鼠记忆障碍的改善作用J.中国药学杂志,2003,38(1):31-34.10徐晓虹,章子贵.葛根素对D-半P乳糖致衰老小鼠记忆行为和海马突触结构的影响J.药学学报,2002,37(1):1-4.11吴艳芳,王新胜,等.野葛与粉葛总黄酮提取方法的比较J.中国现代中药,2001,13(3):38-39.12白海波,李波,宋子荣.葛根提取工艺研究J.中

10、国实验方剂学杂志,2002, 8(6):14-15.指导教师意见： （签名）： 年 月 日开题报告会纪要时间地点与会人员姓名职务（职称）姓名职务（职称）姓名职务（职称）会议记录摘要：系（院）意见：负责人签名： 公章：年月日 1 实验部分1.1原料、仪器和试剂1.1.1原料1.1.2仪器1.1.3试剂1.2实验方法1.2.1原料处理1.2.2总黄酮的提取1.2.3总黄酮的鉴定方法1.2.4总黄酮含量的测定1.2.4.1芦丁标准溶液的配制1.2.4.2测定波长的选择1.2.4.3标准曲线的绘制1.2.4.4总黄酮含量的测定1.2.5单因素实验1.2.5.1用不同浓度的乙醇进行回流1.2.5.2用不同溶剂量的乙醇进行回流1.2.5.3在不同时间相同浓度相同溶剂量的乙醇的条件下进行回流1.2.5.4在不同温度相同时间相同浓度相同溶剂量的乙醇的条件下进行回流1.2.6正交实验设计2 结果与分析2.1总黄酮含量的测定结果2.1.1标准曲线的