钙磷镁和微量元素检验

1、第十二章钙、磷、镁和微量元素检验第一节概 述一、钙、磷代谢及调节（一）含量与分布钙是体内含量最多的无机盐，占体重的 1.5%2%,总量约7001400g,其 次是磷，占体重 0.8%1.2%，总量约400800g。99%以上的钙和86%以上的磷是以羟磷灰石形式沉积于骨、牙。（二）吸收与排泄吸收：在pH较低的小肠上段，钙的吸收率随年龄的增长而降低，每增加 10 岁减少5%10%,婴儿吸收率可达50%以上，儿童40%，成人20%左右，故老 人易发生骨质疏松症。磷的吸收率约70%，低磷时可达90%。排泄：主要通过肠道和肾脏。钙：80%肠道20%肾脏磷：30%肠道70%肾脏（三）血钙与血磷血液中钙几乎

2、全部存在于血浆，正常血清钙 2.252.75mmol/L (911mg/dl)r 离子钙 50%卜可扩散钙HCO3 柠檬酸钙碳酸氢钙I结合钙 50% 25-OH D3 1, 25- （0H） 2 D325-羟化1-羟化酶促进肠道对钙、磷的吸收；促进肾小管对钙、磷的重吸收；协同 PTH促进 骨重建。2. 甲状旁腺素（PTH） 甲状旁腺主细胞分泌的84肽。促进溶骨作用，促进 间充质细胞转化成破骨细胞，抑制破骨细胞转化为成骨细胞；促进肾小管对钙的 重吸收，抑制磷的重吸收。3. 降钙素（CT） 甲状腺滤泡旁细胞分泌的32肽，与PTH拮抗。促进成骨 作用，抑制间充质细胞转化为破骨细胞， 促进破骨细胞转化

3、为成骨细胞；抑制肾 小管对钙、磷的重吸收。二、镁代谢和生理功能（一）镁代谢1. 镁的含量与分布 占体重的0.03%,正常成人镁的总量2028g,其中60% 存在于骨骼，20%30%存在于骨骼肌，其余10%存在于其它组织中。体液中细 胞内液镁的含量占总量的39%，而细胞外液仅占1%。2. 血镁 血浆镁的浓度约0.671.23mmol/L，存在形式主要有三种：离子镁 55%血镁”碳酸氢镁、柠檬酸镁、磷酸镁等15%蛋白结合镁 30%发挥生理作用的是离子镁。3. 吸收与排泄 食物镁含量丰富，人体每天需要量 300350mg，镁的吸收 主要在小肠，吸收率只有30%40%,吸收率与肠腔中镁的含量成反比。体

4、内镁的排泄主要通过肾脏（二）镁的生理功能1作为酶的辅助因子 体内约300种酶的辅助因子是Mg2+2. 维持神经肌肉的应激性Mg2+能降低神经肌肉的应激性。三、微量元素与疾病（一）体内化学元素组成和分类人体约含有50多种元素厂主要元素 含量0.1g/kg 体重 C、H、0、N、S、P、Ca、K、Na、Cl、Mg 等人体元素（必需的 Fe、Cu、Zn、Mn、Co、 Ni、Se I、F 等 14 种l 微量元素含量v 0.1g/kg体重2非必需的Si、As、Rb、B、Al有害的Bi、Hg、Pb、Be等（二）必需微量元素对人体各种生命活动的影响1促进机体的生长发育 铁、铜、锌、锰、钻、碘等，作为酶和激

5、素的重要 组成成分。2对神经系统结构和功能的影响铁、铜、锌、锰、钻、碘等缺乏时可导致神经系统结构和功能的异常，智力低下。3. 对内分泌系统的影响 铜、铁、锌、锰、铬等元素的缺乏或过量可引起内 分泌功能失常。4. 对免疫系统的影响 铁、铜、锌等缺乏时可降低机体的免疫力。5. 对心血管疾病及创伤的影响 适量的锌、锰、铬、硒等元素有利于心血管 的结构和功能。如食物中的锌/镉比与高血压的发生和预后密切相关。多种微量 元素还能影响核酸和蛋白质的生物合成，故有利于创伤的愈合和疾病的恢复。第二节 钙、磷、镁和微量元素测定、钙的测定血钙测定方法很多。厂化学法 滴定法（氧化还原滴定，络合滴定）；比色法（邻甲酚酞

6、络合法，甲基麝香草酚蓝法）物理法 火焰光度法；ISE法；原子吸收分光光度法;同位素稀释质谱法。1. EDTA-Na2 络合滴定法 在碱性溶液中，血清钙与钙红指示剂结合成可溶性 的复合物，使溶液呈淡红色， EDTA-Na 2 对钙有很大的亲和力，能与复合物中的 钙络合，使钙红指示剂重新游离，溶液变蓝色，根据 EDTA-Na 2 滴定用量可计算 出血清钙含量。钙+钙红钙-钙红复合物淡红色钙-钙红复合物 + EDTA-Na2 EDTACa + 钙红 蓝色钙指示剂除钙红外，还有依地铬黑 T (红f蓝)，钙黄绿素(黄f绿)，紫红 酸铵(红f紫)。钙红指示剂终点明显，不受血清镁干扰，血清镁在强碱性条件 下

7、生成Mg (OH) 2指示剂在强碱性条件下不稳定，加指示剂后应立即滴定。操作简便，无需特殊仪器设备， 适合于基层医院， 但终点判断人为误差较大， 溶血、黄疸影响终点判断。2. 邻甲酚酞络合酮法( O-CPC) 邻甲酚酞络合酮是一种金属络合染料，也 是一种酸碱指示剂，在碱性溶液中能与钙和镁螯合，生成紫红色螯合物 (吸收峰 575nm),作钙测定时，加入8-羟基喹啉消除镁的干扰。Mg2+ + 8-羟基喹啉可溶性络合物Ca2+ +邻甲酚酞络合酮紫红色螯合物灵敏度很高，试管、器皿如有微量的钙污染亦会引起误差，最好使用一次性 试管，所有试剂置塑料瓶中保存。3. 甲基麝香草酚蓝法( MTB) 血清钙在碱性

8、溶液中与甲基麝香草酚蓝( MTB )结合，生成一种蓝色络合物，加入 8-羟基喹啉消除镁干扰。 显色稳定，线性范围大，溶血、黄疸无干扰。4. 离子选择电极法( ISE) 此法迅速、简便、灵敏度高、重复性好，并可同 时测定总钙和离子钙， 离子钙测定最好用血清，不用抗凝剂，在急需检测结果时 可用肝素抗凝。【正常参考值】成人总钙2.252.75mmol/L离子钙 1.15 1.42mmol/L二、无机磷测定 目前还不能直接测定人体内 的磷元素，各种方法都是直接地分析两种磷酸 盐阴离子(HPO42_、H2PO4) 常用的方法有磷钼酸法，染料法，酶法。1. 磷钼酸法 以三氯醋酸沉淀蛋白，在无蛋白滤液中加入

9、钼酸铵试剂，与无 机磷结合成磷钼酸，再以硫酸亚铁为还原剂，还原成钼蓝。(NH4) 6Mo7O24 3H2SO4 4H2Of7H2MoO43 (NH4) 2SO412H2M0O4 + H3PO4 12MoO3 H3PC4 + 12H2O12MoO3 H3PO4 +还原剂 钼蓝还原剂有很多种，1-氨基-2-萘酚-4-磺酸，应用历史较久，试剂不太稳定，显 色时间长，灵敏度不高。氯化亚锡，灵敏度较高，颜色强度随显色时间时间而改 变，偏离Beer定律。硫酸亚铁，显色较稳定。2. 孔雀绿直接显色法 血清经浓尿素溶液稀释后，用孔雀绿-钼酸试剂显色, 加入吐温-20使标准液与血清标本显色反应速度接近。灵敏度较

10、高，但影响因素多，重复性差，显色不稳定3酶法糖原磷酸化酶 Gn + H3PO4 Gn-1 + G-1-P葡萄糖磷酸变位酶G-1-P G-6-PG-6-P次黄苷+ 6-磷酸葡萄糖脱氢酶+ NADP+ H3PO4嘌呤核苷磷酸化酶-磷酸葡萄糖酸+ NADPH 次黄嘌呤 + R-1-P黄嘌呤氧化酶次黄嘌呤 + H20 + 02尿酸 + H2O2P0DH2O2 + N-乙基-N- （3-甲基苯基）-N-乙酰乙胺紫红色复合物发色底物555nm三、镁的测定厂化学法 钙镁试剂比色法，达旦黄比色法，甲基麝香草酚蓝比色法。传统方法测定方法 物理法原子吸收分光光度法，（参考方法）同位素稀释中子 活化法（决定性方法）

11、酶法 新进展，将成为新的自动方法。1钙镁试剂（Calmagite）比色法血清镁在碱性条件下与钙镁试剂生成紫红 色络合物，颜色深浅与镁浓度成正比。加入EGTA乙二醇双（B-氨基乙醚）-N， N，Nx，N / -四乙酸，可消除钙的干扰。吸收峰 520nm。显色稳定，操作简便，快速，可手工操作，也可用于自动化分析。2原子吸收分光光度法血清经酸性氯化镧溶液作50倍稀释，直接用原子吸 收分光光度计检测285.2nm的吸光度。操作简便，准确，精密度好，可同时进行钙的测定422.7nm右旋-葡萄糖-6-磷酸+ Mg ADPG6PD右旋-葡萄糖-6-磷酸+ NADP+右旋-葡萄糖内酯-6-磷酸+ NADPH【正常参考值】0.671.23mmol/L四、铁的测定血清铁测定血清铁测定Y血清总铁结合力（TIBC）测定TIBC是指可与血清运铁蛋白结合的铁的最大量。 血清铁和总铁结合力的百分比称为铁饱和度。铁饱和度=总铁结合力X 100%测定方法，亚铁嗪比色法。3+酸性3+运铁蛋白-（Fe ） 2运铁蛋白+ 2 FeFe3+ +