药典沉降菌检测操作规程精编版.doc

1、题目：洁净区（室）沉降菌监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015 年月日修订日期：年月日审核：日期：2015 年月日生效日期： 2016 年月日批准：日期：2015 年月日发放份数：版次：第 1 版分发部门： 质量部、中心化验室1. 目的：阐述洁净室空气中沉降菌检测操作规程，保证药品质量，防止生产环境对产品的污染。2. 范围：适用于本公司洁净区 ( 室) 的沉降菌的监测。3. 责任：沉降菌检测员。4. 内容：4.1 基本概念：4.1.1 菌落 : 细菌培养后 , 由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落, 简称 CFU.通常用个数表示。4.1.2 沉降菌： 用 GB/T1629

2、2-2010 提及的方法收集空气中的活性微生物粒子，通过专门的培养基在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。4.1.3 沉降菌菌落数 : 规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个 / 皿表示。4.2 测试原理 : 本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。4.3 测试方法：4.3.1 使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅 : 使用时应严格按照操作规程进行。恒温培养箱 : 必须定期对培养箱的温度计进行检定。培养皿 : 一般采

3、用 90mm15mm硼硅酸玻璃培养皿。使用前将培养皿置于121湿热灭菌 20min。培养基 : 胰酪大豆胨琼脂培养基。1将培养基加热熔化，冷却至约45在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约 15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入 32恒温培养箱中培养 72 小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用， 制备好的培养基平皿应在 2-8 的坏境中存放。4.3.2 测试时间 :对单向流，如 A 级净化房间内及层流工作台， 测试应在净化空调系统正常运行不少于 10 分钟后开始。对非单向流，如 B 级、 C级、 D 级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30 分钟开始。4.3.

4、3 采样点数目及其布置 :最少采样点数目 : 沉降菌的最少采样点数可按表1 确定。在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见表2表 1 最少采样点数目洁净度等级2面积（ m）A、B级C 级D级102-32210- 2042220- 40822 40- 1001642100- 20040103注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，指的是房间面积。表 2 最少培养皿数洁净度等级所需 90mm培养皿数（以沉降4h 计）A14B2C2D2采样点的布置 :除受洁净区的设备限制外，取样点应在整个洁净区均匀布置。2在日常监控时， 那些与产品相邻近的区域， 以及可能与产品

5、直接接触的空气及设备附近应考虑增加取样点和取样次数 ( 与产品非接触区相比，这些区域应视为关键区 ): 人员活动频繁或人员较集中的区域也应视为关键区，需加强监控。取样点一股布置在趾离地面0.8-1.0m 之间或操作平台的高度。取样时，取样没备会对气流产生干扰， 取样时应避免可能对气流组织的干扰。尽量避免在回风口附近取样( 距离 lm 以上 ) ，且测试人员应在取样口的下风侧，并尽量少走动。4.3.4 测试步骤：4.3.4.1采样方法 :用无菌容器 ( 如不锈钢储槽 ) 将预先培养的培养皿 ( 无菌平皿 ) 带至待测区，将培养皿取出，放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时

6、，再将培养皿盖上， 盖后倒置。 检测时记下培养皿打开的起始时间和结束时间。4.3.4.2培养：全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。32培养，时间为72小时。每批培养基应有对照试验， 检查培养基本身是否污染， 可每批选定三个培养皿做对照培养。4.3.4.3菌落计数 :用肉眼直接计数，然后用5-10 倍放大镜检查，是否有遗漏。若培养皿上有2 个或 2 个以上菌落重叠，可分辨时仍以2 个或 2 个以上计数。4.3.5 注意事项：测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。采取一切措施防止人为对样本的污染。对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。由于细菌种类繁多， 差别甚大，计数时一

7、般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。测试状态 :3沉降菌测试前， 被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求， 静压差必须控制在规定值内。沉降菌测试前，被测试洁净区己经过消毒。测试状态有静态和动态两种， 在空调系统验流时、 长期停产恢复生产前、 设施设备大修复产前进行静态测试，在日常监测时进行动态监测。测试人员 : 测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。静态测试时，室内测试人员不得多于 2 个人。结果计算 :用计数方法得出各个培养皿的菌落数。平均菌落数的汁算见下式:计算公式： MiM=n式中 M为平均菌落数（ CFU）Mi 表示 1， 2， 3， n 号平皿菌落数； n 表示平皿总数。6标准：洁净度级别沉降菌平均菌落数（ CFU/皿）以4h 计A1B5C50D1007. 结果评定 :用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。若某洁净区的菌落数超过评定标准， 则必须对此区域先行消毒， 然后重新测试两次，测试结果必须合格。8. 偏差纠正一旦发现空气微生物监测结