蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法

1、冕白纯他臨嗾後沉淀盐析还能想起那些在吨屛中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？蜘蛛侠，敏捷，良活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼； 绿巨人浩克，力宣,速度，耐力，在我们的想象力中膨胀;还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的庚国队长幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归要锻炼出禺于 自己的实验技能，即便是相同的实验歩骤，每个人做出来的结粟也不尽相同，差别在哪？反 复练习，用心总结出厲于自己的心得，转化为自己的实验“超能力”吧。本文总结了奚白纯 化硫酸枝沉淀详细的实验,原理、步骤，供大家参考。锻炼属于我们自己的实验：超能力之一这次，我们所要分亭的便是一种很常见，但是也很重要的罢

2、白质纯化方法：硫酸狡沉淀 罢白法，一起走进实验室吧。实验原理硫酸铁沉淀法是粗分离页白时常用的纯化和浓缩页白的技术。页白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，岳白质的溶解度 增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的精品结合妥白表面的水分子，破坏番白表面的水化濮，溶解度降低，罢白质在疏 水作用下聚集形成沉淀。每种番白质的溶解度不同，冈此可以用不同浓度的盐溶 液来沉淀不同的罢白质。硫酸铁的溶解度大，解离形成大量的NH4S SC/离子, 会结合大量的水分子，使罢白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使页 白质变性，因此，罢白质粗分离时硫酸铁沉淀法是很重要的一种技术，后续

3、可采 用层析技术进一步纯化罢白，效率更高。硫酸铁沉淀法是常用的分离免疫球页白 的方法。各种不同番白质盐析需要不同浓度的硫酸钱溶液。在实验中建议配置不同梯 度浓度的硫酸铁溶液来确定罢白质沉淀所需的晟佳浓度。（1）参照如下表格配置不同浓度的硫酸铁溶液；例如，在25 C条件下，配置饱和度为10（）%的硫酸铁溶液，称取767弐的硫酸铁 固体，边搅拌边加入到1 L的蒸镭水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节pH 到 7.0 o住 2SV MlMF的戒Jt 佻饰ifaWIBIGSilEIEimi40| 60 | 65 | 70 | 7Sa90 I IOOU lOOOni參浪如加休玩 Me tt MJ a 獸

4、056114H4176沙63W2”)51刃oHO472nn5M0238279319411：Q040S397216820524S28S3754$3265州13417121025033931SO3166IOI137176214302392555307103HI1792XJ5S60M3105W32273146$MTO107wo275zoIS72153231753611519880779079（2）沉淀页白将样品离心，去除沉淀，保留上清液并测量体积；一边搅拌一边换慣的加入硫酸 铁。接着，将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6h,或者4 C,搅拌过夜，使罢白质 充分沉淀。加入硫酸鞍有两种方式，一种是直接加入硫酸鞍

5、网体，在操作上速度缓侵， 不易太快，否则会造成番白变性；另一种方式是加入饱和的硫酸鞍液体，但若需 要较高浓度的硫酸鞍溶液，需要加入较大体积的饱和硫酸鞍溶液，在后续实验操 作中，因页白质上清液和硫酸鞍饱和溶液的体积之和过大，离心机无法离心，闵 此根据需要加入的硫酸铁饱和溶液的体积选择合适的方法。另外，每种罢白质沉淀所需要的硫酸钱溶液的浓度也不同，冈此在每次实验 中应该做好观察记录，积累经验值。分享来自网上的一种简单的方法来估计页白 沉淀所需要的硫酸铁溶液的浓度范围，供大家参考：将罢白质溶液分成5份，每份分别加入硫酸钱至浓度分别为2()%、3()%、4()%、 5()%、60%,离心，弃餐白质沉淀，留取上清，再向上清液中加入硫酸钱，使得 浓度从原先的20%升高到30%, 30%的浓度升到40%, 40%的浓度升为50%., 离心保留沉淀，分析沉淀中是否含有目的罢白，以此确定沉淀冃的页白所需要的 晟佳硫酸铁溶液的浓度。(3)透析除去硫酸铁将页白质溶液离心沉淀，弃上清保留沉淀。加入10-2() ml的PES-叠氮化钠溶液溶解页白质，叠氮化钠不于罢白质反应，但 能防止罢白质变性。罢白沉淀溶解之后，放入透析袋中透析24-48 h,每隔5h更換透析液除去硫酸铁。收集透析液，离心，测定上清