显微镜的操作

1、显微镜操作概述 广州微域光学仪器有限公司研发部广州微域光学仪器有限公司研发部 第一节：相差显微镜 原理：原理： 一般由于被检物体（如不染色的细胞）所能产生的相差太 小，肉眼很难分辨，只有在变相差为振幅差（明暗差）之后才 能被区分。相差显微镜就是利用直射光与衍射光（阿贝原理认 为，任何物体的像均是由直射光与衍射光干涉而形成）的相位 改变而实现两种的干涉，形成对比度可以被人眼所分辨的图像。 结构特点：结构特点： 相差物镜、具有环状光阑的转盘聚光器、调中望远镜等 使用方法使用方法 : 相差装置为多功能系列显微镜中的附属装置与普通显微镜配合使用。 (1) 相差装置的调换安装卸下普通显微镜使用的聚光器，

2、将环状光阑装 在聚光器支架上，把绿色滤光片放在上面，它可吸收红色和蓝色光，使 波长范围小的单色光线进行照明，并有吸热作用，能使相差观察获得良 好的效果。再从转换器上旋下普通物镜，换上相差物镜。 (2)调焦 打开光源，旋转集光器转盘，将“o”对准标示孔，使普通聚光器 部分进入光路。先使用低倍相差物镜，按普通显微镜操作方法进行对光 和调焦。 旋转环状光阑，使光阑的直径和孔宽与所使用的相差物镜相适 应，如相差物镜为40 x时，应用x40标示孔的光阑。 (3)合轴调整 拔出目镜，插入合轴望远镜，一边从望远镜内观察，并用 左手固定其外筒；一边用右手转动望远镜内筒使其下降，当对准焦点就 能看到环状光阑的亮

3、环和相板的黑环，此时可将望远镜固定住。再升降 集光器并调节其下的螺旋使亮环的大小与黑环一致，然后左右前后调节 环状光阑聚光器上的调节钮，使两环完全重合，如亮环比黑环小而位于 内侧时，应降低集光器使亮环放大；反之，则应升高聚光器，使亮环缩 小。如若升到最高限度仍不能完全重合，则可能是载玻片过厚之故，应 更换。合轴调整完毕，抽出望远镜，换回目镜，按常规进行观察。 注意：注意：在更换不同倍率的相差物镜时，要使用相匹配的环状光阑和重新 合轴调节。使用油镜时，集光器上透镜表面与载玻片之间要同时加上香 柏泊。 （4）观察 在相差显微镜下观察活细胞，可清楚地分辨细胞的形态， 细胞核、核仁以及胞质中存在的颗粒

4、状结构。 相差显微镜 相差显微镜照明原理 第二节 偏光显微镜 原理原理 偏光显微镜必须具备以下附件：起偏镜，检偏镜， 补偿器或相位片，专用无应力物镜，旋转载物台。 将普通光改变为偏振光进行镜检的方法，以鉴别某 一物质是单折射（各向同行）或双折射性（各向异 性）。双折射性是晶体的基本特性。因此，偏光显 微镜被广泛地应用在矿物、化学等领域，在生物学 和医学中也有应用。 结构特点：结构特点： a.光源：最好采用单色光，因为光的速度，折射率，和干涉现象 由于波长的不同而有差异。一般镜检可使用普通光。 b.目镜：要带有十字线的目镜。 c.聚光镜：为了取得平行偏光，应使用能推出上透镜的摇出式聚 光镜。 d

5、.伯特兰透镜：聚光镜光路中的辅助部件，这是把物体所有造成 的初级相放大为次级相的辅助透镜。它可保证用目镜来观察在 物镜后焦平面中形成的干涉图样。 偏光镜要求：偏光镜要求： a.载物台的中心与光轴同轴。 b.起偏镜和检偏镜应处于正交位置。 c.制片不宜过薄。 偏光显微镜 第三节 倒置显微镜 原理：原理： 倒置显微镜的组成与普通显微镜相同,不同 的是光源在载物台上,物镜在载物台下,与其它 显微镜的结构位置相反,故称倒置显微镜. 结构特点：结构特点： 1、长工作距离聚光器，其上一般带有滤光片，孔径光阑。 2、物镜有较长的工作距离。 3、纪录装置：摄影镜筒，缩时电影，生命活动过程 实验步骤：实验步骤：

6、 1、熟悉安装各部件 2、调中 3、放置标本，调焦，观察，纪录 倒置显微镜 第四节 暗视野显微镜 原理：原理： 暗视野显微镜是利用丁达尔现象设计的。它的结构特点主要是 使用了暗视野聚光器，使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标 本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而 整个视野是黑暗的。在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光 图像，并非物体的本身，所以只能看到物体的存在和运动，不能 辨清物体的细微结构。但被检物体为非均质时，并大于12波长， 则各级衍射光线同时进入物镜，在某种程度上可观察物体的构造。 一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨 0.004um以上的微粒的存

7、在和运动，这是普通显微镜(最大的分辨 力为0.2um)所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和细胞内 微粒的运动等。 使用方法：使用方法： a. 把暗视野聚光器装在显微镜的聚光器支架上. b.选用强的光源，但又要防止直射光线进入物镜，所以一般用显微 镜灯照明。 c.在聚光器和标本片之间要加一滴香柏油，目的是不使照明光线于 聚光镜上面进行全反射，达不到被检物体，而得不到暗视野照明. d.升降集光器，将集光镜的焦点对准被检物体，即以圆锥光束的顶 点照射被检物。如果聚光器能水平移动并附有中心调节装置，则 应首先进行中心调节，使聚光器的光轴与显微镜的光轴严格位于 一直线上. e.选用与聚光器相应的物镜

8、，调节焦距(操作方法与普通显微镜相 同)，找到所需观察的物像。 观察：观察： 观察暗视野显微镜下的活细胞。在黑暗的背景里，可见细胞、细 胞核和细胞器的衍射光图像。 暗视野显微镜 暗视野照明方式 落射式明暗视场正置金相显微镜 第五节 荧光显微镜 原理：原理： 落射光激发的荧光法是近代显微镜检术中新发展出来的一 种强有力的反差增强法。它将激发荧光用的光源改在物镜的上 方，光由物镜上方经反光镜射入物镜去激发样品，从样品上被 激发的荧光经物镜成像并穿透反光镜而由目镜观察。 使用方法：使用方法： 1、打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。 2、透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激发滤 片，在物镜的后面装上相应的阻断滤片。落射式荧光显微镜需在 光路的插槽中插入所要求的激发滤片双色束分离器阻断滤片 的插块。 3、用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光 源中心，使其位于整个照明光斑的中央。 4、放置标本片，调焦后即可观察。 使用中应注意：末装滤光片