白血病分子诊疗课件

1、2016-3-8 融合基因实验室融合基因实验室 白血病分子诊疗2 融合基因融合基因 基因突变基因突变 基因表达异常基因表达异常 白血病分子诊疗3 1. 融合基因：融合基因： 所谓融合基因，是指将两个或多个基因的编码区首尾所谓融合基因，是指将两个或多个基因的编码区首尾 相连置于同一套调控序列（包括启动子、增相连置于同一套调控序列（包括启动子、增 强子、核强子、核 糖体结合序列、终止子等）控制之下，构成的嵌合基因。糖体结合序列、终止子等）控制之下，构成的嵌合基因。 Chr 9Chr 22 ABL BCRBCR-ABL融合基因融合基因 白血病分子诊疗4 2. 基因突变：基因突变： 错义突变（点突变）

2、错义突变（点突变） 插入突变插入突变 缺失突变缺失突变 移码突变移码突变 白血病分子诊疗5 错义突变（点突变）：错义突变（点突变）： DNA分子中一个碱基对被另一个不同的碱基对取代所引起分子中一个碱基对被另一个不同的碱基对取代所引起 的突变。的突变。 如：如： JAK2V617F JAK2基因基因 mRNA水平（水平（cDNA水平）：第水平）：第1849位点位点G突变为突变为T 蛋白水平：第蛋白水平：第617位氨基酸位点由缬氨酸（位氨基酸位点由缬氨酸（V）突变）突变 为笨丙氨酸（为笨丙氨酸（F） 白血病分子诊疗6 插入突变：插入突变： 较长片段的较长片段的DNA的插入而发生突变，但不改变的插入

3、而发生突变，但不改变 阅读框阅读框 如：如： NOTCH1 H1590-L1592insFGP NOTCH1基因基因 mRNA水平（水平（cDNA水平）：水平）：c.47754776ins(TGGGCC) 蛋白水平：蛋白水平： H1590-L1592insFGP 白血病分子诊疗7 缺失突变：缺失突变： 较长片段的较长片段的DNA的缺失而发生突变的缺失而发生突变 ，但不改变，但不改变 阅读框阅读框 如：如： JAK2 N542-E543del JAK2基因基因 mRNA水平（水平（cDNA水平）：水平）： c.1624-1629 del 6bp 蛋白水平：蛋白水平：N542-E543 缺失缺失N

4、、E氨基酸氨基酸 白血病分子诊疗8 移码突变：移码突变： DNA片段中某一位点插入或丢失一个或几个（非片段中某一位点插入或丢失一个或几个（非3或或3的倍数的倍数 碱基对时，造成插入或丢失位点以后的一系列编码顺序发生碱基对时，造成插入或丢失位点以后的一系列编码顺序发生 错位的一种突变。错位的一种突变。 如：如：CALR L367fs(46) 突变突变 CALR基因基因 mRNA水平（水平（cDNA水平）：水平）： c.1179_1230del 52bp 蛋白水平：第蛋白水平：第367位氨基酸（亮氨酸）位点发生移码，在位氨基酸（亮氨酸）位点发生移码，在 367位点起后的位点起后的46位氨基酸终止。

5、位氨基酸终止。 白血病分子诊疗9 癌基因或抑癌基因表达异常 如： WT1定量 3、基因表达异常、基因表达异常 白血病分子诊疗10 二、白血病基因检测的临床意义二、白血病基因检测的临床意义 1、 辅助诊断 2、 指导治疗 3、 评估预后 4、 微小病变残留检测 白血病分子诊疗11 三、白血病相关基因分类三、白血病相关基因分类 BCR-ABL FLT3-ITD JAK2V617F C-KIT PML-RARa NPM1 RUNX1 AML1-ETO DNMT3A TET2 ASXL1/ASXL2 IDH1/IDH2 SF3B1 SRSF2 U2AF1 Class 1 增增 殖殖 Class 2 分

6、分 化化 Class 3 表观遗传表观遗传 Class 4 剪切因子剪切因子 白血病分子诊疗12 四、白血病相关常见基因四、白血病相关常见基因 AML CML MPN ALL CLL MDS 白血病分子诊疗13 AML 相相 关关 基基 因因 异异 常常 融合基因：融合基因： 1、 PML-RARa: 95% AML-M3 分为三型分为三型 L型、型、S型、型、V 型型 PLZF-RARa NPM1 -RARa 2、 AML1-ETO: 40% AML-M2 (主要为主要为M2b) 3、 CBF-MYH11：90% AML-M4Eo 4、 MLL-AF17 MLL-AF6 AML-M4 /M5

7、 MLL-AF9 白血病分子诊疗14 AML 相相 关关 基基 因因 异异 常常 基因突变：基因突变： FLT3-ITD NPM1（A/B/D型）型） c-Kit IDH1 IDH2 ASXL2 NRAS KRAS P53 DNMT3A 基因定量分析：基因定量分析：WT1 定量定量 FLT3-ITD：AML-M3中发生频率较高中发生频率较高 c-Kit： 50%AML1-ETO阳性阳性AML CBF-MYH11阳性阳性AML ASXL2：AML1-ETO阳性阳性AML 白血病分子诊疗15 CML 相相 关关 基基 因因 异异 常常 BCR-ABL : 95%CML CML特异 marker 亚

8、型： cDNA Protein b3a2、b2a2型 P210 e19a2型 P230 e1a2型 P190 白血病分子诊疗16 MPN 相相 关关 基基 因因 异异 常常 PV、ET、PMF的诊断的诊断 BCR-ABL 排除早期慢粒排除早期慢粒 PV: JAK2V617F JKA2exon12 ET：JAK2V617F MPL CALR PMF: JAK2V617F MPL CALR BCR-ABL JAK2V617F MPL CALR JAK2exon12 白血病分子诊疗17 MDS 相相 关关 基基 因因 异异 常常 WT1 定量定量 DNMT3A TET2 ASXL1 SF3B1 SR

9、SF2 RUNX1 SF3B1：主要见于：主要见于50-70% 环形铁粒幼增多性贫血环形铁粒幼增多性贫血 SRSF2 ：主要见于：主要见于CMML 白血病分子诊疗18 ALL 相相 关关 基基 因因 异异 常常 BCR-ABL: 35%成人成人ALL TEL-AML1: 儿童儿童ALL 预后好预后好 E2A-PBX1：预后不好：预后不好 MLL-AF4 ： 婴幼儿多见婴幼儿多见 NOTCH1 ： 预后好预后好 FBXW7： 预后不好预后不好 PTEN NRAS KRAS B-ALL T-ALL 白血病分子诊疗19 CLL 相相 关关 基基 因因 异异 常常 P53 NOTCH1 NOTCH1： 见于见于B系或系或T系系CLL 在在CLL中为预后不好指标中为预后不好指标 白血病分子诊疗