霍乱病原菌检测标本的采集方法、运输和保存

1、： （一）标本采集和送检的要求（一）标本采集和送检的要求 标本采集是否规范，能从很大程度上影响标本采集是否规范，能从很大程度上影响 检验工作的质量。标本采集应由受过专门检验工作的质量。标本采集应由受过专门 培训的人员来执行，同时注意生物安全防培训的人员来执行，同时注意生物安全防 护，防止样品污染、交叉污染和自身感染。护，防止样品污染、交叉污染和自身感染。 标本应有唯一编号作为唯一性标识。标本标本应有唯一编号作为唯一性标识。标本 在采集后应立即放入冷藏箱中，注意勿使在采集后应立即放入冷藏箱中，注意勿使 标本局部冷冻，并尽快送往实验室进行分标本局部冷冻，并尽快送往实验室进行分 离培养。离培养。 送

2、检标本时应填写送检标本时应填写“标本送检单标本送检单”（样单见附表（样单见附表 2和和3），写明姓名、住址、联系方式、发病时间、），写明姓名、住址、联系方式、发病时间、 采集时间、临床诊断等，为环境和食品标本等时，采集时间、临床诊断等，为环境和食品标本等时， 也需要记录采集时间、地点、种类等相关信息。也需要记录采集时间、地点、种类等相关信息。 标本管标本管/袋或瓶上标记样品编号。因病人标本含有袋或瓶上标记样品编号。因病人标本含有 病原体，标本装入试管或小瓶时，注意勿污染容病原体，标本装入试管或小瓶时，注意勿污染容 器口外壁，必须妥善包装以防破碎、渗漏等，放器口外壁，必须妥善包装以防破碎、渗漏等

3、，放 在坚固的送检箱内由专人送往检验室，运送过程在坚固的送检箱内由专人送往检验室，运送过程 中注意安全。送检箱每次用后须经消毒处理。中注意安全。送检箱每次用后须经消毒处理。 病人标本应尽可能采集粪便。根据调查需病人标本应尽可能采集粪便。根据调查需 要以及标本的可及性，如下标本也作为检要以及标本的可及性，如下标本也作为检 材：病人呕吐物、尸体肠内容物、粪便污材：病人呕吐物、尸体肠内容物、粪便污 染衣物及相关物体表面如地面、水体、食染衣物及相关物体表面如地面、水体、食 品、水生动物、苍蝇等，但根据实际情况，品、水生动物、苍蝇等，但根据实际情况， 也不限于这些标本。标本转运培养基配方也不限于这些标本

4、。标本转运培养基配方 见附件见附件3“常用的标本保存液和细菌培养常用的标本保存液和细菌培养 基基”。 4 1. 病人粪便 粪便标本的采集应尽可能在发病早期（能 采集到的最早期）。即便病人已使用抗生 素，为尽可能获得霍乱病原学诊断，也需 在能采集的最早期采集标本。用采集粪便 标本（包括水样便）的器材采取新鲜粪便， 避免采便量过少，一般要求水样便采取 1mL3mL，放入无菌带螺旋盖的试管中， 拧紧管盖；成形便采取指甲大小的粪量， 装入灭菌小瓶中，盖好瓶盖。 如病人不能自然排出大便、可使用肛拭或肛门采 便管采集。用棉拭子（用于PCR检测的标本，不 要使用棉拭子而应使用灭菌人造纤维拭子或塑料 棒采集）

5、或肛门采便管先在灭菌生理盐水中蘸湿 后（棉拭子贴管壁挤出多余的液体），由肛门插 入直肠内3cm5cm（幼儿约2cm3cm）处，旋 转360，自肛管内壁表面拭取采集。应注意棉拭 子大小是否适宜、光滑、结实且不易脱落。然后 立即置于冷藏箱内，送往实验室。肛拭子标本如 不能在2h内送达实验室，应插入Cary-Blair运送培 养基运送，注意培养基应埋住粪便拭子，手接触 的部分在管口折断弃去。 粪便标本如果运送时间不超过24h，还 可将其放在碱性蛋白胨水中室温运送。 标本与碱性蛋白胨水的比例为8mL 10mL碱性蛋白胨水可加入1mL3mL 液体便或指甲大小的成形便。过多的 粪便量会降低保存液的pH值。

6、如果没 有合适采便器材以及没有运送培养基 时，可用无菌吸水纸条浸于液体粪便 中，然后将吸水纸条密封于塑料袋中， 放入冷藏箱中运往实验室。 2. 病人呕吐物 用无菌压舌板或棉拭子挑取少量呕吐物作 为检材，放入灭菌塑料管、自封塑料袋或 灭菌带盖瓶中，密封。立即置于冷藏箱内， 送往实验室 . 3. 水体 包括河口水、江河水、沟渠水、池塘水、 湖水、井水、港湾海水、乡镇自来水厂源 水、医院污水排放口、下水道排放口、海 水产品养殖水、海水产品交易市场的出水 口等。需要时也可采集水体的底泥作为检 材。 水样标本的采集方法有多种，各实验室应 根据现场流行病学调查需要及实验室自身 检测条件，如有无过滤器等，作

7、相应的选 择。 (1) 盐水瓶法 (2) Moore纱布集菌法 (3) Spira 纱布集菌法 4. 食品 针对不同的可疑食品，采集整体或部分标 本，带至实验室。注意采集过程中不同食 品及不同部位不能交叉污染。 5. 海水产品 选取活海水产品或涂抹拭子，置于塑料袋 内（拭子标本可按粪便拭子保存运输方法 处置），尽快送往实验室。如在一箱甲鱼 中可采取数只甲鱼的体表作为一个标本送 检，这比只做一只甲鱼体内检查其阳性检 出机会可能更多。霍乱监测时，海水产品 常作为重点采集监测的对象。注意采集过 程中不同食品及不同部位不能交叉污染。 6. 物体表面标本 用灭菌棉拭蘸以碱性蛋白胨水涂擦沾染粪 便的衣物表

8、面、食物操作台、砧板等等相 关物体或怀疑污染物体表面，放入到碱性 蛋白胨水中，密封，常温下运往实验室。 7. 苍蝇标本 在每个采样点以1015只苍蝇作为一份标 本放入自封袋或试管中，密封，置于冷藏 箱中送实验室。 霍乱属于肠道传染病，对实验室操作以及 样品采集等方面的生物安全应按照肠道感 染细菌性疾病的通用生物安全要求。另外， 霍乱在我国属于传染病法规定的甲类报告 管理传染病，在卫生部人间传染的病原 微生物名录（2006年）中，霍乱弧菌流 行株危害程度为第二类，属于高致病性微 生物级别（非流行株危害程度为第三类）， 要求在生物安全II级实验室（BSL-2）操作 病原体。 对于霍乱疫情或疑似霍乱疫情的现场调查 和样本采集过程中，必须注意生物安全防 护，调查采样人员应咨