临沂大学创业创新项目申报书金丝桃苷(Hyp)对大鼠心肌缺血后再灌注导致的损伤的保护作用及作用的机制研究

1、大学生创新创业训练计划项目申请书项目编号 项目名称 项目类型 项目主持人 刘阳 联系电所在学院 化学化工学院 学 号 201110830131 专业班级 制药工程1班指导教师 李振 e-mail 申请日期 起止年月 临沂大学 填 写 说 明1、本申请书所列各项内容均须实事求是，认真填写，表达明确严谨，简明扼要2、申请人可以是个人，也可为创新团队，首页只填主持人，均为参加项目的学生。“项目编号”一栏不填。3、本申请书为大十六开本（a4），左侧装订成册。可网上下载、自行复印或加页，但格式、内容、大小均须与原件一致。4、主持人所在学院认真审核, 经初评和答辩，签署意见后，将

2、申请书（一式两份）报送临沂大学大学教务处。项目名称项目类型（）创新训练项目 （）创业训练项目 （）创业实践项目项目实施时间起始时间： 完成时间：所属学科申请人或申请团队姓名学号所在院系/专业联系电话e-mail主持人刘阳201110830131化学化工学院 ，制药工 员指导教师姓名研究方向年龄行政职务/专业技术职务主要成果一、项目实施的目的、意义目的 ：探讨金丝桃苷(hyp)对大鼠心肌缺血后再灌注导致的损伤的保护作用及作用的机制。意义：金丝桃苷由于其突出的生理活性和药理作用，尤其是对心脑缺血损伤的保护作用，近年来国内外学者对其开展了大量工作，逐渐成为研究热点，大量的动

3、物实验验证，金丝桃苷对心肌缺血的动物模型和脑缺血不同大鼠模型都具有一定的保护作用，其有望成为抗心脑缺血损伤很有前景药物之一。二、项目研究内容和拟解决的关键问题进一步探讨金丝桃苷对心肌缺血再灌注损伤的保护作用, 并从对心肌细胞凋亡的影响方面初步阐明金丝桃苷的保护心肌作用机制。1实验前后大鼠心电图t波的变化幅度 2测定血清 cpk 值 3测定心肌中 mda, sod 和 no 含量。 4观察大鼠心肌组织中凋亡细胞的存在和形态三、项目研究与实施的基础条件药品金丝桃苷( hyp)，纯度为 95. 0%, 分子式 c 21 h 20 o 12 , 相对分子质量 464. 3。超氧化物歧化酶 ( sod)

4、 试剂盒；丙二醛( mda) 试剂盒；磷酸肌酸激酶( cpk) 试剂盒,；一氧化氮( no) 试剂盒；t unel 法细胞凋亡检测试剂盒。动物sd大鼠, 体重( 23515) g。仪器四道生理记录仪; 荧光分光光度计;紫外分光光度计; 冷冻离心机; 微型呼吸机; 透射电子显微镜; 倒置显微镜。四、项目实施方案1建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型2 sd大鼠, 随机分组: 假手术组; 模型组; hyp 组。假手术组和模型组给以等剂量的生理盐水。给药前四道生理记录仪监测大鼠的 ecg , 连续给药 3d, 第 3天给药后 30 min,进行手术, 同时记录 ecg 。缺血 30 min后, 恢复心脏灌

5、流, 3. 5 h 后取血和心脏, 对大鼠的心脏剪取大约 4 mm 心肌组织用 3%戊二醛固定;然后随机将心肌分为 2 组, 一组处理后作 sod,mda, no 指标的检测, 另一组 4% 甲醛中固定, 处理, 作 tunel法染色。3记录大鼠结扎前 5 min 和结扎后 1, 10, 20 min以及再灌后 1, 5, 30 min, 3 h 的心电图, 计算t 波抬高和降低的 mv 数, 以其绝对值按 1 mv= 20mm 对 t 波变化的幅度进行比较; 同时对心电图出现的心律失常总发生率包括 vt (心动过速) 、 vf (心室纤维性颤动) 和 t 波改变超过 1 mm 的发生率进行统

6、计。4大鼠的血液离心 2 000 r#min - 1 , 10 min, 取上清液测定血清 cpk 值; 大鼠心脏, 制备心肌匀浆上清液, 然后分别测定心肌中 mda, sod 和 no 含量。对缺血再灌注后的大鼠心肌组织, 戊二醛处理,固定, 1%的锇酸再固定 60 min, 按照电镜样品制备方法进行脱水、渗透、包埋得到超薄电镜切片, 然后通过透射电镜对模型组大鼠心肌组织中凋亡细胞的存在和形态进行观察。采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法处理心肌标本。凋亡的心肌细胞在镜下显示为细胞核呈棕褐色, 在高倍镜下选取 10个视野进行计数, 计算呈阳性反应的细胞数占细胞总数的平均百分比, 进行组间比较。五、学校可以提供的条件实验室，大鼠，药品，仪器等。六、预期成果hyp 可以抑制血清中 cpk 的升高, 提高心肌 sod 的活力, 减少氧自由基和 no 自由基的形成, 降低 mda 的生成量, 从而表现出保护心肌, 减轻缺血/ 再灌注导致的心肌细胞损伤乃至心肌细胞的凋亡七、经费预算经费来源预算经费支出预算科目