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打靶载体打靶载体(targeting vector)。 如何使外源基因能定点整合于靶基因上呢如何使外源基因能定点整合于靶基因上呢?根据根据DNA同源重同源重 组的原理,导入的外源基因必须和靶基因有一定的同源序列。因此,组的原理,导入的外源基因必须和靶基因有一定的同源序列。因此, 外源基因导入前必须经过精巧的构建,经构建的外源基因称为外源基因导入前必须经过精巧的构建,经构建的外源基因称为打靶打靶 载体载体(targeting vector)。 78 neo 8 9 6789 78 neo 8 96 打靶载打靶载 体体 野生野生ES细细 胞胞 突 变突 变 E S 细胞细胞 通过同源重组将外源基因导入固定位点,从而有目的的突变内源基 因,图中单线表示内含子,框图表示外显子 78 neo 89 6789 78 neo 89 6 打靶载体打靶载体 野生野生ES细胞细胞 突变突变ES细胞细胞 导入外源基因的阳性导入外源基因的阳性ES细胞的筛选细胞的筛选 123Hsv-tkneor G418 GANC Loxp 位点位点 Cre loxploxp 两个两个loxp位点之间的基因被切除位点之间的基因被切除 gene Cre loxp loxpGene Gene promoter promoterloxp loxp Duke University Labo
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