对化学性肝损伤有辅助保护功能的保健品

1、对化学性肝损伤有辅助保护 功能的保健品 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 化学性肝损伤的定义及毒性物质分类 化学毒物损伤肝脏的机理 具有保肝作用的功能食品 对化学性肝损伤有辅助保护 作用检验方法 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 化学性肝损伤的定义及毒性物质分类 定义：是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。 分类：根据毒性的强弱, 这些亲肝毒物可分为三 类： 1. 剧毒类：包括磷、三硝基甲苯、四氯化碳、 氯奈、丙烯醛等。 2.高毒类：砷、汞、锑、苯胺、氯仿、呻化 氢、二甲基甲酰胺等。 3.低毒类：二硝基酚、乙醛、有机磷、丙烯 晴、铅等。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 化学毒

2、物损伤肝脏的机理 1.脂肪变性。四氯化碳、黄磷等可干扰脂蛋白的 合成与转运，形成脂肪肝。 2.脂质过氧化反应，这是中毒性肝损伤的特殊表 现形式，如四氯化碳在体内代谢产生一种氧化能 力很强的中间产物，导致生物膜上的脂质过氧化， 破坏膜的磷脂，改变细胞的结构与功能。 3.胆汁郁积反应，主要与肝细胞膜和微绒毛受损， 引起胆汁酸排泄障碍有关。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 具有保肝作用的功能食品 目前我国已经研制开发的, 经国家食品药品监 督管理局批准的对化学性肝损伤有保护作用的保 健食品共有322种, 最新批准

3、的对化学性肝损伤有 保护作用的保健品是北京世纪合辉医药科技有限 公司开发的合辉牌和泰粉。主要原料葛根提取物、 党参提取物、枳椇子提取物、红景天提取物、葡 萄糖。 标志性成分是葛根素。批准日期 是2012 年9月18 日，批准文号是国食健字G20120362 。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 我国具有保肝作用的功能食品的分类 根据主要功效成分和保健作用, 大致分为以 下四类。 1.由中草药或其提取物研制而成。 如灵芝、大豆、枸杞、茶、黄芪、芦笋、当 归、山楂、银杏、香菇等。这类植物具有活血化 瘀的、清肝解毒、强肝益肝的作用, 从有效成分来 看, 这些保健食品中含有多糖、黄酮类、甙类及萜

4、 类化合物,如大豆皂甙、银杏黄酮类、香菇多糖、 黄芪多糖等, 具有提高免疫能力、抗脂质过氧化、 抗肿瘤、抗衰老等生物功能。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 2.目前公认的具有抗氧化、促进细胞增 殖、提高免疫能力的营养物质 如牛磺酸、硒、维生素E、维生素C 等; 维生素E 和硒都是自由基清除剂,大剂量Vc能 减轻细胞脂肪性病变, 促进肝细胞再生及肝糖元的 合成, 增强肝脏的解毒功能。因此, 对肝炎或肝性 昏迷者, 大剂量V c确有治疗作用。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 3.由一些特殊动物如牡蛎、毛虫甘苦参、 甲鱼、蚂蚁等研制而成。 4.一些特殊生物因子如胎盘因子、多 肽等。

5、谷胱甘肽( GSH) 能与进入体内的有毒 化合物、重金属离子或致癌物质等相结合, 并促其排出体外, 起到中和解毒的作用。 GSH 还可抑制乙醇侵害肝脏产生脂肪肝。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 名称名称功效成分功效成分批准日期批准日期批准文号批准文号 占熺牌克瑞地森胶 囊 银杏叶黄酮 、红 景天苷 2012-02-17国食健字 G20120139 合辉牌和泰粉葛根素2012-09-18国食健字 G20120362 九都圣方牌景天归 芪颗粒 粗多糖 、红景天 苷 2012-03-29国食健字 G20120204 亚和信牌和信茶总皂苷 、茶多酚2012-03-14国食健字 G201201

6、59 瑞养牌源生胶囊多糖 、总黄酮 2012-01-06国食健字 G20120055 五峰慧果牌沙棘油 软胶囊 总黄酮 、维生素E 2012-01-06国食健字 G20120054 林洋牌石斛葛根杜 仲叶胶囊 粗多糖 、葛根素 、 绿原酸 2012-01-13国食健字 G20120100 合辉牌灵芝松花粉粗多糖2012-08-28国食健字 G20120336 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 名称功能成分批准日期批准文号 健安丰牌椇杞丹参 片 粗多糖 、总黄酮 2012-03-07国食健字 G20120154 俊客小子牌苦丁茶 胶囊 苦丁茶总苷2012-05-14国食健字 G201202

7、71 和治牌爱康九亨口 服液 甘草酸2012-06-01国食健字 G20120292 合辉牌葛根西洋参 颗粒（葡萄味） 红景天甙 、葛根 素 2012-01-20国食健字 G20120105 合辉牌灵芝松花粉 片（草莓味） 粗多糖2012-01-20国食健字 G20120109 合辉牌灵芝松花粉 片（葡萄味） 粗多糖2012-01-13国食健字 G20120088 合辉牌灵芝松花粉 片（香橙味） 粗多糖2012-01-13国食健字 G20120089 博众牌清新胶囊葛根素 、总皂苷 、 总黄酮 2012-01-13国食健字 G20120081 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 对化学性肝

8、损伤有辅助保护功能的 保健品 酒前酒后舒肝片 【功效成份及含量】: 粗多 糖 190mg ，栀子甙 461.54mg 【主要原料】枸杞子、栀子、 茯苓、丹参 【适宜人群】有化学性肝损 伤危险者 【不适宜人群】少年儿童 【卫生许可证】GD.FDA健 证字2006第5100S0267号 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 【品名】同仁堂牌警醒片 【主要原料】L-谷氨酰胺、 牛磺酸、维生素C、;-肉碱 酒石酸盐、葡萄糖酸锌、 碳酸镁、维生素B1、葡萄 糖、硬脂酸镁 【标志性成分及含量】每 100g含：牛磺酸20.1g、 维生素C6.86g、L-肉碱 4.58g 【保健功能】对化学性肝 损伤有辅助

9、保护作用 【适宜人群】有化学性肝 损伤危险者 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 产品成分 牛磺酸-保护肝细胞、降低血清转氨酶； L-谷氨酰胺-减少和对抗自由基对肝脏的损害； L-肉碱酒石酸盐(BT)-补充酒精影响肝脏后合成 不足，并修复损伤肝细胞； 维生素B1-预防酒精性脑病； 碳酸镁-能改善酒精引起的精神障碍； 维生素-C抗氧化、参与肉碱生物合成保护肝细 胞； 葡萄糖酸锌-拮抗肝细胞凋亡； 葡萄糖-加快体内酒精的分解速度，避免造成酒 精中毒。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 对化学性肝损伤有辅助保护功能食品评 价试验项目、试验原则及结果判定 1.试验项目 动物实验分为方案一（四

10、氯化碳肝损伤模型） 和方案二（酒精肝损伤模型）两种。 方案一（四氯化碳肝损伤模型） 体重 谷丙转氨酶（ALT） 谷草转氨酶（AST） 肝组织病理学检查 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 方案二（酒精肝损伤模型） 体重 丙二醛（MDA） 还原型谷胱甘肽（GSH） 甘油三酯（TG） 肝组织病理学检查 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 2.试验原则 （1）所列指标均为必做项目。 （2）根据受试样品作用原理的不同，方 案一和方案二任选其一进行动物实验。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 3.结果判定 方案一（四氯化碳肝损伤模型）:病理结果阳 性，谷丙转氨酶和谷草转氨酶二指标中任一项指

11、 标阳性，可判定该受试样品具有对化学性肝损伤 有辅助保护功能作用。 方案二（酒精肝损伤模型）:肝脏MDA、 GSH、TG三项指标结果阳性，可判定该受试样品 对乙醇引起的肝损伤有辅助保护功能， 肝脏 MDA、GSH、TG三指标中任二项指标阳性，且 肝脏病理结果阳性，可判定该受试样品具有对乙 醇引起的肝损伤有辅助保护功能作用。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 对化学性肝损伤有辅助保护作用检验方 法 方案一：四氯化碳肝损伤模型 1.原理 四氯化碳(CCl4)受到肝微粒体酶活化成为三 氯甲烷自由基(CCl3)与蛋白质共价结合导致蛋白 合成障碍、脂质分解代谢紊乱，引起肝细胞内甘 油三酯(TG)蓄

12、积。CCl3也能迅速与O2结合转化为 过氧化三氯甲烷自由基(CCl3O2)导致脂质过氧化， 从而引起细胞膜的变性损伤,致使酶渗漏以及各种 类型的细胞病变，甚至坏死。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 2.实验动物 成年大鼠或小鼠，单一性别，大鼠（180 220克），每组8-12只，小鼠（1822克），每组 10-15只。 3.实验方法和步骤 3.1 剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个空白对照组和一个 模型对照组，以人体推荐量的10倍（小鼠）或5倍 （大鼠）为其中的一个剂量组，另设二个剂量组。 用CCl4（分析纯）造成肝损伤模型，造模方式可 以灌胃或腹腔注射。小鼠CCl4灌

13、胃浓度为1，以 食用植物油稀释，灌胃量5mL/kgBW(折合CCl4的剂 量为80 mg/kgBW)，大鼠CCl4灌胃浓度为23%， 灌胃量5mL/kgBW(折合CCl4的剂量为160240 mg/kgBW)。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 灌胃量5mL/kgBW(折合CCl4的剂量为80 mg/kgBW)， 大鼠CCl4灌胃浓度为23%，灌胃量5mL/kgBW(折 合CCl4的剂量为160240 mg/kgBW).必要时设阳 性对照组和溶剂对照组。受试样品给予时间30天， 必要时可延长至45天. 3.2 给予受试样品的途径 经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试 样品掺入饲料或饮水

14、亦可，并记录每只动物的饲 料摄入量或饮水量。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 3.3实验步骤 每日经口灌胃给予受试样品，空白对照组和模 型对照组给予蒸馏水。将动物每周称重两次，以 调整受试样品剂量。于实验第30天将各组动物隔 夜禁食16小时，模型组及各样品组一次灌胃给予 CCl4，空白对照组给植物油，受试组继续给予受 试样品至实验结束（与CCl4灌胃间隔4小时以上）。 给予CCl4 后，根据实际情况于 24或48小时处死 动物，取血分离血清，测定ALT、AST，并取肝脏 进行病理组织学检测。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 3.4 检测指标 血清谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶

15、 （AST），肝脏病理组织检查 4. 血清谷丙转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（AST） 的测定 4.1 测定方法 可选用全自动生化分析仪或赖氏法（试剂盒） 测定。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 4.2 数据处理和结果判定 采用方差分析，但需按方差分析的程序先进 行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值 F0.05, 结论：各组均数间差异无显著性；F值 F0.05,P0.05,用多个实验组和一个对照组间 均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差 不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或 方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变 量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩 和检验进行统

16、计。 受试样品组的ALT、AST与模型对照组比较，差异 有显著性，可分别判定ALT、AST结果阳性。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 5. 肝脏病理组织学变化、诊断标准和结果判定 5.1 实验材料 取大鼠肝脏左叶用10%福尔马林固定，从肝左 叶中部做横切面取材，常规病理制片（石蜡包埋， H.E染色）。 5.2 镜检 从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化， 用40倍物镜连续观察整个组织切片。可见小叶中 心性肝细胞的退行性病变和少数细胞坏死。主要 病变类型有肝细胞气球样变、脂肪变性、胞浆凝 聚、肝细胞水样变性和细胞坏死等。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 5.3 评分标准： 分别

17、记录每个视野中的各种病变所占视野的 面积，并累计所观察视野的病变总分。 肝细胞气球样变,（细胞肿大,胞浆残留少许） 大致正常0分 气球样变的肝细胞占整个视野的1/41分 气球样变的肝细胞占整个视野的1/22分 气球样变的肝细胞占整个视野的3/43分 气球样变的肝细胞占整个视野4分 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 肝细胞脂肪变性：（肝细胞胞浆内出现界限清晰 脂滴空泡） 大致正常0分 脂肪变性的肝细胞占整个视野的1/41分 脂肪变性的肝细胞占整个视野的1/22分 脂肪变性的肝细胞占整个视野的3/43分 脂肪变性的肝细胞占整个视野4分 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 胞浆凝聚：（胞浆

18、嗜伊红增强） 大致正常0分 胞浆凝聚的肝细胞占整个视野的1/41分 胞浆凝聚肝细胞占整个视野的1/22分 胞浆凝聚的肝细胞占整个视野的3/43分 胞浆凝聚的肝细胞占整个视野4分 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 水样变性： 未见水样变性的肝细胞0分 水样变性的肝细胞占整个视野的1/41分 水样变性的肝细胞占整个视野的1/22分 水样变性的肝细胞占整个视野的3/43分 水样变性的肝细胞占整个视野4分 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 肝细胞坏死：（胞浆嗜伊红变，凝固性坏死） 未见坏死细胞0分 散在个别细胞占整个视野的1/41分 坏死细胞占整个视野的2/42分 坏死细胞占整个视野的3/

19、43分 坏死细胞弥漫性存在占整个视野4分 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 5.4 数据处理和病理结果判定 采用方差分析，但需按方差分析的程序先进 行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值 F0.05, 结论：各组均数间差异无显著性；F值 F0.05,P0.05,用多个实验组和一个对照组间 均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差 不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或 方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变 量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩 和检验进行统计。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 （1）受试样品任何一个剂量组与模型对照组之 间，气球样变、脂肪变性、胞

20、浆凝聚、水样变性 或肝细胞坏死等肝细胞病变中，肝细胞坏死程度 减轻，差异有显著性，而其它病变类型与模型对 照组比较明显减轻或无明显差异，可判断动物实 验病理结果阳性。 （2）受试样品任何一个剂量组与模型对照组之 间，气球样变、脂肪变性、胞浆凝聚、水样变性 这四种肝细胞病变类型加重和减轻同时存在，差 异有显著性，且肝细胞坏死程度减轻，差异有显 著性，则可将其各种病理变化的得分相加，肝细 胞坏死评分2倍计入，以总分进行统计分析，若差 异有显著性，可判断动物实验病理结果阳性。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 6 结果判断 在模型成立的前提下，ALT、AST两项血液生 化指标果为中任何一项和病

21、理结阳性，可判定受 试样品对化学性肝损伤有辅助保护作用。 方案二：酒精肝损伤模型 1.原理 机体大量摄入乙醇后，在乙醇脱氢酶的催化 下大量脱氢氧化，使三羧循环障碍和脂肪酸氧化 减弱而影响脂肪代谢，致使脂肪在肝细胞内沉积。 同时乙醇能激活氧分子，产生氧自由基导致肝细 胞膜的脂质过氧化及体内还原型谷胱甘肽的耗竭。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 2. 实验动物 成年小鼠或大鼠，单一性别，大鼠 （180220克），每组8-12只，小鼠（18 22克），每组10-15只。 3. 实验方法和步骤 3.1 剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个空白对照组 和一个模型对照组，以人体推荐量

22、的10倍 （小鼠）或5倍（大鼠）为其中的一个剂量 组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照 组。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 用无水乙醇（分析纯）造成肝损伤模型，无水乙 醇浓度为50（以蒸馏水稀释），小鼠灌胃量12 14mL/kgBW (折合乙醇的剂量为60007000 mg/kgBW)。受试样品给予时间30天，必要时可延 长至45天。 3.2 给予受试样品的途径 经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试 样品掺入饲料或饮水亦可，并记录每只动物的饲 料摄入量或饮水量。 3.3 检测指标 肝组织中丙二醛（MDA） 还原型谷胱甘肽（GSH） 甘油三酯（TG）的含量。 对化学性肝损伤有辅助保护

23、功能的 保健品 3.4 实验步骤 每日经口灌胃给予受试样品，空白对照组和 模型对照组给予蒸馏水。将动物每周称重两次， 以调整受试样品剂量。给予受试样品结束时将模 型对照组及各样品组一次灌胃给予50%乙醇 12mL/kgBW，空白对照组给蒸馏水，禁食16小时处 死动物，进行各项指标的检测及病理组织学检查。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 4 肝匀浆中过氧化脂质降解产物丙二醛（MDA）测 定方法 4.1 原理 MDA (malondiadehycle) 是细胞膜脂质过氧 化的终产物之一，检测其含量可间接估计脂质过 氧化的程度。MDA与硫代巴比妥酸在酸性条件下共 热，形成粉红色复合物，吸收峰

24、在535nm,具此可 测得MDA的含量 4.2 仪器与试剂 仪器 721分光光度计、微量加样器、恒温水浴锅、 普通离心机、混旋器、具塞离心管、组织匀浆器 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 试剂 0.2M乙酸盐缓冲液 PH3.5 0.2M乙酸溶液 185mL 0.2M乙酸钠溶 15mL 1mmol/L四乙氧基丙烷（贮备液，4保存3个月）， 临用前用水稀释成40nmol/mL 8.1%十二烷基硫酸钠SDS 0.8%硫代巴比妥酸TBA 0.2M磷酸盐缓冲液 PH7.4 0.2M磷酸氢二钠 1920mL 0.2M 磷酸二氢钾 480mL 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 4.3 实验步骤

25、4.3.1 样品制备 组织匀浆样品：取一定量的所需脏器，生理 盐水冲洗、拭干、称重、剪碎，置匀浆器中，加 入0.2M磷酸盐缓冲液，以20000r/min匀浆10s，间 歇30s，反复进行3次，制成5组织匀浆（W/V）， 3000r/min离心510min，取上清液待测。 4.3.2样品测定(见下一页表) 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 试剂试剂空白管空白管样品管样品管标准管标准管 5组织匀浆0.1mL 40nmol/mL四乙氧基丙烷0.1mL 8.1%SDS0.2mL0.2mL0.2mL 0.2M乙酸盐缓冲液1.5mL1.5mL1.5mL 0.8%TBA1.5mL1.5mL1.5mL

26、H2O0.8mL0.7mL0.7mL 混匀，避光沸水浴60min，流水冷却，于532nm比色 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 4.3.3计算 过氧化脂质含量（nmol/mg组织）= 过氧化脂质含量(nmol/100mg蛋白质)= A: 空白管吸光度 B：样品荧吸光度 F：四乙氧基丙烷吸光度 C：四乙氧基丙烷浓度(40nmol/mL) K：稀释倍数 100005. 0 1 40 AF AB KC AF AB 100 1 05. 0 1 40 ）每克组织蛋白（mgAF AB KC AF AB 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 4.3.4 数据处理及结果判定 数据采用方差分析，但需按方

27、差分析的程序 先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值 F0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值 F0.05,P0.05,用多个实验组和一个对照组间 均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差 不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或 方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变 量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩 和检验进行统计。 结果判定 在模型成立的前提下，受试样品组的MDA含量 与模型对照组比较，差异有显著性，判定该指标 结果阳性。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 5 肝匀浆还原型谷胱甘肽（GSH）测定方法 5.1 原理 GSH和5,5-二硫对硝基甲酸（DTNB

28、）反应在 GSH-Px催化下可生成黄色的5-硫代2-硝基甲酸阴 离子，于423nm波长有最大吸收峰，测定该离子浓 度，即可计算GSH的含量。 5.2 试剂 5.2.1 0.9生理盐水 5.2.2 4磺基水杨酸溶液 5.2.3 0.1mol/L PBS溶液(pH=8.0)： Na2HPO4 13.452g KH2PO4 0.722g 加蒸馏水至1000mL。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 5.2.4 0.004DTNB溶液： 称取DTNB 40mg溶于1000mL的0.1mol/L PBS溶 液(pH=8.0)中。 5.2.5 叠氮纳缓冲液 NaN3 16.25 mg EDTA-Na2

29、 7.44 mg Na2HPO4 1.732 g NaH2PO4 1.076 g 加蒸馏水至1000mL，用少量HCl、NaOH调 pH7.0，4保存。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 5.2.6 标准溶液： 称取还原型GSH 15.4mg，加叠氮纳缓冲液至 50mL，终浓度为 1mmol/L，临用前配制。 5.3 方法 5.3.1 样品测定： 取肝脏0.5g加生理盐水5mL充分研磨成细浆 （10%肝匀浆），混匀后取浆液0.5mL加4%磺基水 杨酸0.5mL混匀，室温下3000rpm离心10分钟，取 上清液即为样品。样品测定管中加4.5mLDTNB，空 白管加0.5mL4%磺基水和4.

30、5mLDTNB混匀，室温放 置10 分钟后，412nm处测定吸光度。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 5.3.2 标准曲线 123456 1mmol/L GSH(mL) 00.050.100.150.200.25 生理盐水 (mL) 0.500.450.400.350.300.25 DTNB(mL)4.504.504.504.504.504.50 GSH量 (mol/L) 0100200300400500 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 5.3.3 计算 样品GSH含量 (mol /g肝重) = 对应曲线浓度值 (mol/L) 50g/L 5.4 数据处理和结果判定 数据采用方

31、差分析，但需按方差分析的程序先进行方 差齐性检验，方差齐，计算F值，F值 F0.05,结论：各组 均数间差异无显著性；F值F0.05,P0.05,用多个实验 组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正 态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或 方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后 仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 结果判定 在模型成立的前提下，受试样品组的还原型GSH含量与 模型对照组比较，差异有显著性，判定该指标结果阳性。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 2.6 肝匀浆中甘油三酯（TG）测定方法 2.6.1 测定方法：采用甘油三酯测定

32、试剂盒（甘油磷酸氧 化酶过氧化物酶法）测定10%肝匀浆中的甘油三酯含量。 与血清甘油三酯测定方法相同，以等量10%肝匀浆替代血 清按操作说明书进行操作，测定结果以mmol/g肝重表示。 2.6.2 数据处理和结果判定 数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方 差齐性检验，方差齐，计算F值，F值 F0.05,结论：各组 均数间差异无显著性；F值F0.05,P0.05,用多个实验 组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正 态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或 方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后 仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 对化学

33、性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 在模型成立的前提下，受试样品组的TG与模 型对照组比较，差异有显著性，判定该指标结果 阳性。 7 肝脏病理组织学变化、诊断标准和结果判定 7.1 实验材料：从肝左叶中部做横切面取材，冰 冻切片，苏丹染色，。 7.2 镜检：从肝脏的一端视野开始记录细胞的病 理变化，用40倍物镜连续观察整个组织切片。主 要观察脂滴在肝脏的分布、范围和面积。 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 7.3 评分标准 肝细胞内脂滴散在，稀少。肝细胞内脂滴散在，稀少。0 0分分 含脂滴的肝细胞不超过1/41分 含脂滴的肝细胞不超过1/22分 含脂滴的肝细胞不超过3/43分 肝组织几乎被脂滴代替4分 对化学性肝损伤有辅助保护功能的 保健品 7.4