生物分析纯化技术实习报告

1、 这周我们进行了生物分析纯化技术实习，一周的实习虽然有些短暂，但是我们的收获是丰富的，在这一周里我们进一步将理论联系实际，掌握生物技术产物有效成分提取、分离和检定的基本操作技能，提高了我们分析和解决问题能力。养成了严密的科学态度和良好的工作作风。我们这次实习的要求如下：1遵守实验室制度，维护实验室安全，不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。若发生事故应立即报告指导教师。2实验前作好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天计划，争取准时结束。实验过程应养成及时记录的习惯。凡是观察到的现象和结果及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录，实验完毕后，认真

2、总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（日期、样品名称、纯度、tlc、重量）交给老师。3实验室中保持安静，不许大声喧嚷，不许抽烟、不迟到、不随便离开，实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净，存放在实验柜内，废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽、下水道和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。4公用仪器及药品用完后立即返还原处，破损仪器应填写破损报告单，注明原因。节约用水、用电、药用试剂。严格药品用量。5保持实验室内整洁，学生采取轮流值日，每次实验完毕，负责整理公用仪器，将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电、气和门窗是否关闭。 学习了实习要求与规则之后，我们就正式进入

3、了实验，我们系统的学习了薄层板的制备、活度测定及样品定性分析，并且掌握了薄层板的制备及薄层层析的操作方法和吸附剂活度测定的原理及方法学会了应用薄层层析法检测识中草药化学成分。一、薄层板的制备具体有以下几种方法：1不加粘合剂的薄层涂布法（1）氧化铝薄层（2）纤维素薄层（3）聚酰胺薄层2加粘合剂薄层的涂布法（1）硅胶g薄层 （2）硅胶（h）羧甲基纤维钠（cmc-na）薄层 3特殊薄层的制备二、根据分离工作的特殊需要，可制成以下几种特制薄层。（1）酸、碱薄层和ph缓冲薄层（2）络合薄层三、吸附剂的活度测定1氧化铝活度的测定2硅胶活度的测定四、薄层层析的应用薄层层析法在天然产物化学成分的研究中，主要应

4、用于化学成分的预试、化学成分的鉴定及探索柱层分离的条件。用薄层层析进行中草药化学成分检识，可依据各类成分性质及熟知的条件有针对性地进行。由于在薄层上展开后，可将一些杂质分离，选择性高，可使预试结果更为可靠，不仅可通过显色获知成分类型，而且可初步了解主要成分的数目及其极性大小。具体进行的试验项目有：薄层层析法对蛋白质水解液的氨基酸种类分析目的:掌握硅胶g薄层层析的基本技术,了解薄层层析的一般原理以及层析技术的优点， 原理:薄层层析是将固相支持物(也叫吸附剂)均匀铺在玻璃板上使之成为薄层,将待分析的样品点到薄层板的一端,然后将点样端浸入适宜的扩剂中,在密闭的层析缸中展层。 由于各种氨基酸的理化性质

5、(分子极性、分子大小和形状、分子亲和力等)的不同，使其在吸附剂表面的吸附能力各异。当展开剂在薄层板的毛细管中移动时，点在薄板上样品的组分就不同程度地随着展开剂的移动而移动，使不同的氨基酸得以分离。薄层层析法操作简便、快速、灵敏、分离效果好、显色容易，被广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂类、类、生物碱等多种物质的分离和鉴定。 仪器:硅胶g薄层板、毛细管、层析缸、电吹风、喷雾器、烘箱 试剂:1、 硅胶g2、 粘合剂：0.5%的柠檬酸与1%的羧甲基纤维素钠混合，煮沸至无气泡，冷却静止分层后用。3、 蛋白质水解液（或混合氨基酸）2、扩展剂：正丁醇:冰乙酸:水=4:1:23、显色剂： 0.1%水合茚三酮

6、正丁醇溶液 实验步骤:（一） 薄层板的制备1、调浆 称取硅胶14克，加粘合剂25毫升，置于研钵中充分研磨成均匀的膏状。2、涂布 取洁净的干燥玻璃板（2020）2块置于涂布器上均匀涂层。3、干燥 将玻璃板水平放置，室温下自然凉干。4、活化 凉干的薄层板置于烘箱内，至105活化30分钟，切断电源，待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。（二）点样活化后的硅胶板室温冷却后，在距底边2cm水平线上均匀确定3个点。用毛细管分别吸取氨基酸溶液，轻轻接触薄层表面，每次加样后原点扩散直径不超过3mm，干后再点一次。（三）展层在层析缸中加入扩展剂1cm厚，加盖平衡0.5小时。将薄层板点样端浸入扩展剂，扩展剂液面应低于

7、点样线。盖好层析缸盖，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线，用热风吹干。（四）显色用喷雾器均匀喷上显色剂，在85下烘干，即可显出各层析斑点。 结果计算:小心量出原点至溶剂前沿，以及各斑点中心的距离，计算出它们的值。根据值，鉴定出混合样品中氨基酸的种类，并绘出层析图谱。 原点至斑点中心的距离 。 原点至展开剂前沿的距离 标准样数据：氨基酸原点至斑点前沿的距离（cm）原点至展开剂中心的距离（cm）值亮氨酸137.50.5769缬氨酸12.550.4000赖氨酸12.51.20.0960谷氨酸12.220.1639甲硫氨酸12.250.4098混合样数

8、据：混合组原点至斑点前沿的距离（cm）原点至展开剂中心的距离（cm）第一组13861.2第二组13.35.85.72.7第三组13.3待添加的隐藏文字内容28.25.83.1对比鉴定：混合组混合物1混合物2混合物3第一组亮氨酸甲硫氨酸亮氨酸第二组甲硫氨酸缬氨酸缬氨酸第三组赖氨酸谷氨酸谷氨酸 羊蹄根活性成分提取工艺优化羊蹄为多年生草本，高60-100cm。根粗大，断面黄色。茎直立，通常不分枝。单叶互生，具柄；叶片长圆形至长圆状披针形，基生叶较大，长16-22cm，宽4-9cm，先端急尖，基部圆形至微心形，边缘微状波皱褶。总状花序顶生，每节花簇略下垂；花两性，花被片6，淡绿色，外轮3片展开，内轮3

9、片成果被；果被广卵形，有明显的网纹，背面各具一卵形疣状突起，其表面有细网纹，边缘具不整齐的微齿；雄蕊6，成3对；子房具棱，1室，1胚珠，花柱3，柱头细裂。瘦果宽卵形，色，光亮。花期4月，果期5月。一、实验目的采用层析法分离羊蹄根的化学成分，并通过理化性质与光谱数据，鉴定所得化合物的种类。通过单因素试验或者正交试验确定最佳提取的方法，使工艺优化。二、实验原理羊蹄根中的不同成分的理化性质不同，使其在吸附剂表面的吸附能力各异。当展开剂在薄层板的毛细管中移动时，点在薄板上样品的组分就不同程度地随着展开剂的移动而移动，使不同的成分得以分离。三、仪器电热鼓风干燥箱、分析天平、定量毛细管、电吹风、喷雾器、层

10、析缸、水浴锅四、材料羊蹄根、石油醚、丙酮等试剂均为分析纯，水为蒸馏水，硅胶g板。五、实验步骤（一）供试品溶液的制备取羊蹄根药材40 g，精密称定，切成粉末状，置于250 ml具塞锥形瓶中，加入95%乙醇。在60水浴锅中加热2h之后冷却至室温，过滤、浓缩、再过滤，取滤液，即得。（二）展开剂：石油醚一丙酮(4：1)（三）薄层分析1、取分离得到的供试品溶液加甲醇制成每1 ml含2 mg的溶液，2、点样活化后的硅胶板室温冷却后，在距底边2cm水平线上均匀确定几个点。用毛细管吸取氨供试品溶液，轻轻接触薄层表面，每次加样后原点扩散直径不超过3mm，干后再点一次。3、展层在层析缸中加入扩展剂1cm厚，加盖平

11、衡0.5小时。将薄层板点样端浸入扩展剂，扩展剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线，用热风吹干。4、显色将吹干的薄板置荧光灯254 nm下观察。标准图：上侧为大黄酚、下侧为大黄素甲醚实验结果：数据：样品原点至斑点前沿的距离（cm）原点至展开剂中心的距离（cm）值112.610.66.9组分1：0.817组分2：0.511213.210.86.9313.310.76.7413.310.76.8513.210.56.8612.910.66.6平均值13.110.76.7结果分析：组分1为：大黄酚；组份2为：大黄素甲醚以上就是这次实习的主要内容，在我们大家共同努力下终于圆满完成了任务。当然在实验操作中也遇到了好多问题，但是在指导老师的讲解、组内和组间同学的讨论中得以解决。这使我更加了解到没有解决不了的问题，只要我们用心去做了就会有个好结果的。这正是培养了我们在实践中研究问题，分析问题和解决问题的能力以及培养了良