圆二色谱仪使用

1、圆二色谱仪使用手册实用标准文案实验前请先阅读第一部分注意事项2011 年 4 月 6 日整编河北大学理化中心目录精彩文档实用标准文案一、注意事项二、光源的选择三、MOS 450 波长的校正四、电压的调节五、MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程六、MOS 450-SFM 300 动力学操作方法精彩文档实用标准文案精彩文档实用标准文案一、注意事项1、滴定及变温实验时，需要磁子搅拌。实验结束时首先拔掉搅拌电源。在样 品池内无磁子的情况下搅拌器空转会烧毁控温元件。2 、光源 （也就是氙灯或汞氙灯 ）不可频繁开关。举例而言，如果马上不用仪器， 但半个小时后需要使用仪器，就不要为了节约光源寿命而将光源关

2、闭。短时间内 频繁开关光源反而会缩短光源寿命。3 、光电倍增管移动时 （比如从圆二色模式换为荧光模式 ），注意用软件将 Hv高压）关闭4 、扫描速度在 0.5-5s/nm 。使用手册上写的扫描速度有误，特别注意不要低 于 0.5 秒 /nm, 过快的扫描速度易造成 calibration 移位。5 、如需用到 emission 单色器，就是那个需要用光纤连接的单色器，扫描速 度要大于 1s/nm, 连 0.5s/nm 都不能用。6 、PMT 的 HV 不要超过 1000V.7、使用控温附件进行变温实验时，一定要将地上的那个水浴恒温槽打开，水 槽温度设为 20 度以下即可。8 、TCU 上设置为

3、 remote; Power supply 设置为 ARC.9 、仪器运行过程中，更换样品时， shutter 最好关闭。精彩文档实用标准文案二、光源的选择1、电源：图 1 中的 Lamp power supply 处有 Xe （红色）、 Xe（Hg） （红色）、零线（黑 色）三个插孔。零线插头为黑色，直接插到黑色的零线插孔中。 火线插头为红色，在做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时插在 Xe（红色）插孔中， 在做快速动力学测量的时候插在 Xe（Hg） 插孔中。2、光源选择：图 2 中的 Vertical setting 部位下方的底座上有 Xe、 Xe（Hg） 两个标示前后排 列。手动松开中间的

4、大圆头 Screws（图 2 中），可以拉出或推进 Vertical setting 。 当 Vertical setting 的金属头通过前后移动到下方的哪个标示位置上， 也就是那个 标示所示的灯正对着光路，为测试用光源。做快速动力学测量的时候选 Xe（Hg） ， 做圆二色、紫外、荧光的光谱扫描时选 Xe，最后再旋紧中间的大圆头 Screws 。注： Xe （Hg ）灯中的 Hg 元素有一些很强的特征谱线，加强了 Xe 元素发光 的强度，对于动力学测量要求一个波长的光源能量要强，才能测量较为精确的谱 图。而对于光谱扫描，单独的 Xe 元素谱线较为平滑，光源对扫描的影响较小。精彩文档实用标准文

5、案图2图1三、MOS 450 波长的校正仪器使用一段时间后需要对仪器进行波长校正，以保证测量的准确性，波长 校正的操作步骤如下：1、确认样品仓中没有任何样品和样品池。2、根据光源选择的操作说明，将光源换为 Xe（Hg）灯。3、打开 ALX-250 、MM-450 和 PMS-450 电源。4、点击电脑中的 BioKine 软件图标，进入测量主界面。5、在主界面选择 Device 菜单的 Scanning spectrometer 命令，进入光谱扫描精彩文档实用标准文案界面。点击 按钮设置参数， 在光谱测量模式里选择 Fluorescence 模式，波长扫描范围 200-750nm ，进行光谱扫

6、描，得出如图 1 所示谱图。此 时检测器位置为与入射光成 180 度的位置，不用改为荧光的位置。6、谱图在 546nm 处应该出一个峰，比较 546nm 处的峰是否有偏差。如果超出 +/-1nm 的范围，需要进行波长校正。7 、举例说明，如果在 550nm 处出峰，波长偏了 4nm ，那么就在图 2 所示主界 面左下栏的 Ex 处填入 550nm ，按回车键。精彩文档实用标准文案图28、点击图 2 主界面 Install 菜单的 Spectrometer advanced settings 命令，出现图 3 所示的窗口，点击 Excitation 下方的 Calibration 按钮，进入波长

7、校正 界面，如图 4。图3精彩文档实用标准文案图4在图 4 所示窗口里的 Current wavelength 处输入 546 ，点击 OK 按钮，进行波 长校正。Xe 灯校准波长 467nm ； Xe(Hg) 灯校准波长 546nm 。 操作完以上各步骤，波长校正完成。可进行正常的测量操作四、电压的调节1. 选择 Xe 灯，打开 ALX-250 稳定 10 分钟，将 ALX-250 的功率调整到 150 W ；2. 在打开 ALX-250 的同时，打开 MM-450 电源，机器预热 10min ；3. 确保空仓(样品池中无待测样品) 。狭缝设置为 2nm4. 点击电脑桌面上的 图标，进入 B

8、ioKine 软件操作主界面。点击Install 的 Device ，出现图 1 ，只选中 MOS-450 ，点击 OK 。精彩文档实用标准文案图1进入图 2 界面图2输入 EX值 200nm ，打开 shutter ，Hv on ，Auto 值为 200 左右。五、MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程1、选择 Xe灯，打开 ALX-250 稳定10 分钟，将 ALX-250 的功率调整到 150 W ； 2 、在打开 ALX-250 的同时，打开仪器电源，先开 MM-450 ，再开 PMS-450 。机器预热 10min ；精彩文档实用标准文案3、清洗好样品池，添加待测样品的空白溶液（如水

9、或缓冲盐）到样品池中4、安装上样品池盖。5、如果测量波长小于 210nm ，需要对仪器进行氮气吹扫处理。打开氮气，调整 流量计流速为 1000L/h ，通氮气几分钟。确认电源线插在氙灯的位置，并且氙 灯已对准光路，具体操作见光源的选择操作说明。然后打开 ALX-250 光源开关，将氮气流量计流速设为 400L/h ，查看 ALX-250 面板显示，当氙灯能量达到 150W ，氙灯稳定。如果无需氮气吹扫，直接打开 ALX-250 电源，等待氙灯稳定后进行下一步操作6、点击电脑桌面上的 图标，进入 BioKine 软件操作主界面，进入光谱扫描界面， 如7、点击图 1 主界面的 Device/Sca

10、nning Spectrometer图2图1图27. 点击主界面上方的 按钮，进行光谱测定参数的设定，如图 3精彩文档实用标准文案图3Acquisition mode ：选择测量模式 CD 。Begin(nm) ：扫描初始波长End(nm )：扫描结束波长Scan Repeat ：扫描次数Acquisition duration ：每个 nm 的测量持续时间，范围 0.5s-20s ，此项相当 于扫描速度的设定。 园二色谱扫描速度不能低于 0.5s 。使 用 emission 单色器，扫描速度为 1nm/sShutterAutomatic mode ：选择 Always open ，挡板处于始

11、终打开的状态。 PM gain*10 ：当在非常低的信号测量，可选择此项，进行信号的增益。CD parameters ：CD 的灵敏度，根据信号的振幅设置，有四个不同的选项，1000 、300 、100 和 30 mdeg 。其他选项根据需要可以选择。以上参数都设置好后，点击 OK 按钮，参数设置完成，回到主界面8. 在要测量波长的范围内取一个波长点，输入到图 2 下方的 Ex 处，点击 Enter精彩文档实用标准文案键。这时确认 按钮变为 ，然后点击 ，自动调整 HV 电压，然后再点击 按钮，锁定此电压值。 电压值一般小于 800V9. 空白的测量点击图 2 主界面 Blank spectu

12、m 区域的 Record 按钮，记录第一步添加的空白 样品谱图，空白谱图显示在主界面中。测量后选择 Subtract 复选框，将在随 后的样品光谱的测量中扣除空白值。10. 样品的测量再点击 按钮，关闭挡板，取出样品池，将空白样品换成被测样品，然后 再放回到样品支架上，盖好样品仓盖。这时再点击 ，打开挡板。点击图2 主界面 Acquisition control 区域的 按钮，记录样品的园二色谱图， 显示 在图 2 主界面中。11. 谱图的平滑 第十步测量的谱图为样品园二色原始测量图，需要经过平滑处理，得到平滑 的曲线图，操作如下：选择主界面 Analysis 菜单，这时界面变为分析界面，选择

13、 Tools 菜单下的 Smoothing 命令，出现平滑的设置界面，选择第二项。选择平均平滑点数，此数值必须是奇数，然后点击 Proceed 按钮，这时平滑 后的曲线出现在界面中。12. 保存数据选择主界面的 File 菜单下的 Save As ，出现图 5 界面。精彩文档实用标准文案图5选择要保存文件到哪个文件夹， 并给文件命名，选中 Save as text ，然后点击Save 按钮，文件保存到指定的文件夹中。13. 如果对园二色数据需要进行蛋白质二级结构分析，进行如下操作：在 BioKine 软件中选择 File 菜单的 Load data file命令，打开要进行分析的文件，然后选择 File 菜单的 Exprot data to/Dicropro