促肾上腺皮质激素作业指导书

1、XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书Elecsys E 170/E 411促肾上腺皮质激素（ACTHf牛编号：LAB OP- MY020 1页，共4页版本：A/0生效日期：1. 分析原理采用双抗体夹心法原理，整个过程 18分钟完成。第1步：50标本、生物素抗ACT特异性单克隆抗体和钉（Ru）标记ACT特异性单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。第3步：将反应液吸入检测池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。未结合的物质通过ProCell除去。在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用

2、光电倍增器检测发光的强度。通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线 是通过2点定标点和试剂条形码上获得的主曲线生成的。2. 标本要求只有按如下方法收集的标本才适合用本试剂盒检测。 K3-EDTA K2-EDTA血浆；收集于硅化管或塑料管，非硅化管将导致测量值减低；只能使用预先冷冻的标本小瓶。注入血液标本后，立即将小瓶放置在冰上。使用冷却离心机分离血浆。立即测定标本或冷 冻在-20 C下保存；稳定性：22 C可保存2小时；在-20C可保存4周，只可冻溶一次14;不是所有能获得的厂商的试管均可用于检测。不同厂商标本收集系统可能含有不同材料，某些情况下会影响检测结果。在使用原始试管处理标本时

3、，应遵循试管生产商所提供的指导。如标本中有沉淀出现，必须先作离心处理再进行分析。已经加热失活的标本无法分析。使用叠氮化物作为稳定剂的标本或 质控液无法分析。检测前，请确保患者标本、定标液及质控液放置在20 -25C的环境中。由于蒸发因素的影响，标本、定标液及质控液在放入分析仪后请在 2小时内完成测定。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M链酶亲和素包被的微粒（透明瓶盖）每瓶 6.5ml。链酶亲和素包被的微粒：0.72mg/ml ；结合力：470ng生物素/mg微粒; 微粒经过防腐处理。R1:生物素化抗ACT抗体（灰色瓶盖）每瓶8 ml；生物素化单克隆抗ACTI抗

4、体（鼠）：0.3 mg/L； MES缓冲液：50 mmol/L，PH值6.2 ;经过防腐处理。R2 :钉复合物标记的抗ACT抗体（黑色瓶盖）每瓶8ml;钉复合物标记的抗ACTI单克隆抗体（鼠）：0.3 mg/L； ME缓冲液:50 mmol/L，PH值6.2 ;经过防腐处理。b）MES=2-吗啉乙磺酸校准品:货号 03255760, Elecsys ACTH CalSet, for 4 x 1 mL质控品:货号 04655346, Elecsys PreciControl ACTH 2 x 3 mL，各含 PreciCo ntrol Uni versal 1 和 2其他所需材料:Elecsys

5、2010，e411分析仪所需材料：货号 11662988, Elecsys ProCell, 6 x 380 mL ,系统缓冲液 货号 11662970, Elecsys CleanCell, 6 x 380 mL,检测池洗液 货号 11930346, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL附加洗液 货号 11933159, SysClean 适配器 货号 11706802, Elecsys 2010 分析杯,60 x 60反应管Elecsys E 170/E 411文件编号：LAB OP- MY020 第2页，共4页版本：A/0生效日期：XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目

6、作业指导书.货号11706799, Elecsys 2010 分吸吸头，30 x 120移液管吸头Modular Analytics E170免疫分析仪所需材料：.货号 04880340, ProCell M, 1 x 2 L系统缓冲液.货号 04880293, CleanCell M, 1 x 2 L检测池洗液货号03023141, PC/CC杯，50杯用于在测定前预热Procell M 及Cleancell M。货号03005712,ProbeWash M, 12 x 70 mL清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗系统。货号12102137,分析杯/分析吸头 组合装M, 48分析杯x

7、84反应管或加液器吸头，废物袋货号 03023150, WasteL in er, 废物袋货号 03027651, SysClean 适配器 M所有分析仪均需要的材料：货号 11298500, Elecsys SysClea n, 5 x 100 mL系统清洗液4. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411 全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：溯源性：本测定方法已按照标准人造 ACT产品标准化。每批Elecsys ACTH试剂盒上都有条形码记录各批号试剂特定的定标信息。预先确定的主曲线适用于用Elecsys ACTHCalSet试剂盒进行测定

8、的分析仪。定校间隔：每批不同试剂须重新进行定标（例如在试剂盒被分析仪识别后的24小时内）。除此之外，以下情况必须重新进行定标：Elecsys 2010、E170和 cobas e 分析仪：4同一批号的试剂盒在分析仪上使用超过1个月（28天）。同一试剂盒在分析仪上使用超过 7天对于所有分析仪上均需定标：根据需要：如质控数据超过额定的限度。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在Application Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入Calibration St

9、atus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK建）或两点定标（TWGPOINT键）、跨距定标（SPAN建）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最 后点SAVE将定标物放入在 Calibration Calibrator中定义好的位置，点 Start，再点Start，仪器开始定标。在Calibration Status菜单中看定标结果，点 Calibration Result键看定标结果，点 Reaction Monitor 键看每个定标物的反应曲线。5.2样本检测程序：单个样本输入，在主菜单下选择 Workplace- Testslection，在Se

10、quenee No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目点 SAVE建，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection ，在Sequenee No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目点REPEAT输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在 Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内，按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点 START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书Elecsys E 170/

11、E 411文件编号：LAB OP- MY020 第3页，共4页版本：A/0生效日期：ElecsysPreciControl ACTH1和2试剂和其它适合的试剂均可作为测定时的质控液。在测定时，对于不同浓度范围的标本，每24小时内必须进行一次质控测试。每次更换试剂盒或进行定标后也须进行质控测试。每个实验室须根据各自的情况确定合适 的质控间隔和范围。测定值必须处于规定的范围内。若测定值不在规定的范围内，则每个试验室必须建立相应的矫正方法。7. 计算方法分析仪自动计算得出每份标本的测定浓度（单位可为pg/mL, pmol/L 或pmol/L ）.换算公式pg/mL x 0.2202 = pmol/L

12、pmol/L x 4.541 = pg/mL8. 参考范围354 名健康人群用血浆测得的值范围（5-95%）： 7.2-63.3 pg/mL （1.6-13.9 pmol/L） 。不同生理条件下ACTH浓度明显不同，因此，ACTHM定结果必须结合同时测定的皮质醇浓度进行评估。每个实验室必须调查各自患者群体的参考范围变异性，必要时根据具体情况制订自己的参考范围。9. 分析性能1.0-2000 pg/mL或0.220-440 pmol/L （由系统主曲线的最低限和最高限决定）。ACTH浓度低于检测最低限则报告为 1.0 pg/mL或 0.220 pmol/L, 而高于检测上限则报告为 2000 p

13、g/mL或 440 pmol/L 。由于检测范围宽，因此一般无须稀释。10. 干扰因素测定结果不受黄疸（胆红素 428mol/L或25 mg/dl ）,溶血（血红蛋白0.25 mmol/L或 0.4g/dl ）,高脂血（症）（脂 肪乳剂 1500 mg/dl ）和生物素（ 246 nmol/L或60 ng/ml ）的影响；标准：回收率90 110%;对于因某些疾病需要而接受高剂量生物素治疗的患者（ 5mg/天），必须在末次生物素治疗 8小时后采集标本；浓度达400U/ml的风湿因子对测定无影响；高达1*106 1 IU/mL （12,690 ng/mL）大剂量不产生钩状效应；体外对17种常用药

14、物进行试验未发现有药物影响检测结果；但是，若使用ACTH 1-24药物治疗，则不推荐进行 ACTHM定，因为其会影响“三明治”形成而产生干扰，使测定结果偏低。由于检测试剂中含有单克隆抗体，因此某些接受单克隆鼠抗体治疗或诊断的患者标本检测结果可能有误；试剂盒附带有试剂添加剂以减少以上不良影响；少数病例中极高浓度的链霉抗生物素蛋白和钉抗体会影响测定结果；必须结合患者病史，各项实验室检查及其它临床资料来综合评估测定结果。11. 临床意义促肾上腺皮质激素（ACTH是一种由39个氨基酸组成的多肽激素，在大脑垂体前叶合成，其前体物是阿片促黑色素皮质激 素原（POMC。POM经组织特异性分解产生ACTI和其

15、他相关肽1,2。ACT通过肾上腺皮质刺激糖皮质激素（特别是皮质醇）合成和 分泌。糖皮质激素合成调节受多种因素调节 3,4,5,6。机体受到刺激（如物理刺激或机体内部刺激）后，下丘脑分泌CRH促肾上腺皮质激素释放激素）。CRF作用于垂体，促使ACT合成和分泌。最后，ACT作用于肾上腺促使糖皮质激素分泌。血液中高浓度糖皮质 激素通过负反馈调节机制抑制 CRI和ACT分泌。日间不同时间ACT浓度不同，早晨浓度较高，晚间浓度较低。因此，如同皮质醇，了解血浆标本收集时间对于结果解释是非常重要的。血浆ACT测定有助于鉴别诊断下列疾病：垂体库欣综合征（ACTH分泌过多），ACT合成垂体瘤（如Nelson综合征）， 伴ACT缺乏的垂体功能减退和异位ACT症候群7,8。结合皮质醇测定，ACTHM定联合功能或刺激检测还能诊断确定糖皮质激素合成 过多的原因。同样，ACT测定可用于鉴别诊断肾上腺皮质功能减退症（阿狄森氏病）。非垂体合成的ACT称为异位ACTH,通常认为与肺小细胞癌有关。极少情况下，异位ACTF由胸腺瘤、胰腺腺癌或支气管类癌导