-微生物遗传-

1、引言1.遗传与变异遗传(heredity ):变异(variation):上一代生物将自身的一整套遗传基因稳定地 传递给下一代的特性。生物体在某种外因或内因的作用下，发生遗 传物质结构或数量的改变，而且这种改变稳 定，具有可遗传性。遗传保证了微生物种的相对稳定性、种的存在和延续, 而变异则推动了种的进化和发展。2遗传型和表型表型(phenotype )某生物体所具有的一切外表特征及内在特性的总和。表型的实现是由生物体的遗传型和环境条件共同作用的结果。遗传型(genotype)某一生物体个体所含有的全部遗传因子，即基因的总和，又称为基因型。Figure 12-1. Agrobacterium r

2、a- diobacter grown on two different media. Left: Mucoid colonies on sucrose-salts medium; right: non mucoid colonies on trypticase-soy agar mediumFigure 12-2. Morphological modifications (phenotypic changes) re suiting from changes in media composition. (A) and (B) are phase .contrast micrographs of

3、 No cardia sp. in (A) tryptone agar culture; (B) brain-heart infusion agar; both cultures 12 h at 30C (Courtesy of B L Beaman and D. M. Shankel, and J. Bacteriol, 99:876, 1969. (C) and (D) are electron micrographs of thin sections of Arthrobacter lobiformis 425 grown in (C) nutritionally complete me

4、dium and (D) biotin deficient medium resulting in ab normal forms of the bacterium (several protoplasts embedded in an amorphous matrix). Note that the aberrant cells are devoid of cell walls and no longer exhibit the typical shape of the species as shown in (C). Incubation was at 25C for 36 h. (Cou

5、rtesy of Margaret Gomersall and E. C. S Chan.)微生物是遗传学研究中的明星:微生物细胞结构简单，营养体一般为单倍体，方便建立纯系。很多常见微生物都易于人工培养，快速、大量生长繁殖。对环境因素的作用敏感，易于获得各类突变株，操作性强。第一节遗传变异的物质基础、证明核酸是遗传物质基础的三个经典实验二、遗传物质在细胞内存在部位和方式Live R strainHeat-killed 1 Strain of .Colony !Cell typeEffectNo capsuleIl :1 a4 1 Rough(R)LiveRstrainL分别用S型菌中提取的DN

6、A、RNA和 蛋白质转化R型菌且DNA被酶降解破坏的抽提物无转化活性DNA是转化所必需的转化因子Ave阳在四十年代以更精密的实验设计重复了以上实验bumococci, which strain and a3.植物病毒的重建实验H. Fraenkel-Conrat(1956)T2噬菌体感染实验沉淀细胞逬一步培 养后可产生大量 完整的子代噬菌体图8-2用含鶉蛋白质（外壳）的噬菌体作感染实验丄0一分钟后离心9沉淀细胞进一步 培养后可产生大 量完整的子代噬館体病斑的特性和血清学反应说明病毒蛋证明杂种病毒的蛋白质病毒核酸一致I质的特性由核酸而定外壳来自TMV还是HRV,可用血清学反应鉴定J证明核酸（RN

7、A）是遗传的物质基础二、遗传物质在细胞内存在的部位和方式（一）七个水平细胞水平 （单核，多核） 细胞核水平 （真核，拟核）染色体水平（一套，两套，核外染色体）核酸水平（DNA,部分病毒为RNA；双链少数病毒为单链）基因水平（遗传功能单位）密码子水平（遗传信息单位）核昔酸水平（最低突变单位和交换单位）第二节质粒P196基因（gene）是什么?是实体，其物质基础是DNA （或RNA）;是一个含有特定遗传信息的DNA分子区段;是遗传信息传递和性状分化发育的依据;基因是可分的，根据功能不同，分为： 编码蛋白质的基因结构基因（结构蛋白，酶）1调节基因（阻遏蛋白或激活蛋白）无翻译产物的基因I tRNA基因

8、（简称tDNA ）1 fRNA基因（简称rDNA）不转录的DNA区段 I启动子（promotor）1操纵基因（operator）基因是一个含有特定遗传信息的核昔酸序列，它是遗传的功能单位。质粒(plasmid)一种独立于染色体外，能进行自主复制的细胞质遗传因子,主要存在于各种微生物细胞中O 附加体(episome)指哪些既可以整合到核染色体上，作为染色体的一部分而 进行复制，又可以再游离出来或携带一些寄主的染色体基因游 离出来，这类质粒被称为附加体。Supercoiled circular DNAfigure 6.7 Supercoiled circular DNA and relaxed,

9、nicked circular DNA interconversions. A nick is a break in a phosphodiester bond of one strand2质粒的分离碱提取法: 菌体的培养和收集：一般采用丰富堵养基对菌体进行培养，当细 胞生长到指数期后期时,离心收集细胞。 溶菌：一般用溶菌酶去壁以形成原生质体或原生质球。 碱变性处理:在SDS等表面活性剂存在下加NaOH液使pH升至 12.4 f可使菌体蛋白质.染色体DNA以及质粒DNA变性。 质粒复性：加入PH4.8的KAoHAc缓冲液f将提取液调至中性f由 于质粒分子量小而容易复性,并稳定存在于溶液中；染色

10、体DNA分子 量太大，在复性过程中形成DNA之间的交联导致其形成更大分子的不 溶性物质。 离心分离:经高速离心可以使细胞碎片和已变性的菌体蛋白及染 色体DNA-起沉淀f上清液中主要是质粒DNA r经乙醇沉淀后,可获得质粒DNA。oc图8-4质粒的三种构型对于由于三种构型同时存在时造成的多带现象（提取质粒时造成 或自然存在），可以进行特异性单酶切，使其成为一条带。4.质粒的特性(1)位于核基因组外;(2) cccDNA(4) 有的质粒可整合到核染色体上；(5) 可重组(质粒与质粒间，质粒与染色体间)；(6) 人为消除(丫叮类，UV,电离辐射，利福平等)(7) 有的质粒可在细胞间转移(F因子，R因

11、子)质粒所含的基因对宿主细胞一般是非必需的；有时能赋予宿主细胞以特殊的机能，从而使宿主得到生长优势5、质粒的主要类型致育因子(Fertility factor, F因子)抗性质粒(Resistance factor, R因子)根据质粒所 编码的功能 和赋予宿主 的表型效应产细菌素的质粒(Bacteriocin production plasmid毒性质粒(virulence plasmid)分类:代谢质粒(Metabolic plasmid) 隐秘质粒(cryptic plasmid ) 2pm质粒致育因子（Fertility factor, F因子）（参见P197）replication a

12、nd gene transfer during conjugation.0F factor2. factor into a host bacterial 、 chromosome. The process begins with association between plasmid and bacterial insertionil、cu ucncc、. The O “rrowhcjd在放线菌中，天蓝色链霉菌含有SCP1和SCP2两种致育质粒 H ,这两种质粒在天蓝色链霉菌的接合过程中起重要作用，带 动染色体从供体细胞向受体细胞转移。（相当于雄性），无F质粒的 菌株称为F菌株（相当于雌性）。

13、 Figure 14.6 Bacterial Conjugation. An electron micrograph of iwo E. coli cells undergoing conjugation. The F* cell to the right is covered with small pili or fimbriae and a sex pilus connects lhe two cells.包括抗药性和抗重金属二大类,merISsulfJScml抗性因子(Resistance factor, R因子)(参见P197)简称R质粒。抗性质粒在细菌间的传递是细菌 产生抗药性的重要

14、原因之一。R100质粒(89kb)可使宿主对 下列药物及重金属具有抗性： 汞 (mercuric ion , mer 四环素(tetracycline, tet ) 链霉素(Streptomycin, str)、 磺胺(Sulfonamide sul) 氯霉素(Chlorampenicol cml) 夫西地酸(fusidic acid, fus 负责这些抗性的基因是成簇地 存在于抗性质粒上。Figure 9.21 Genetic map of the resistance plasmid R100.The inner circle shows the size of the plasmid i

15、n kilobasc(3)Col 质粒：产细菌素的质粒(Bacteriocin production plasmid)许多细菌都能产生某些代谢产物，抑制或杀死其他近缘细 菌或同种不同菌株，因为这些代谢产物是由质粒编码的蛋白质，不 象扰生素那样具肴很广的杀菌谱，所以称为细菌素(bacteriiocin)细菌素抗生素抑制或杀死近缘，甚至同种不同株的细菌较广的抗菌谱通过核糖体直接合成的多肽类物质一般是次级代谢产物编码细菌素的结构基因及相关的基因一般位一般无直接的结构基因，相关酶的基因多在于质粒或转座子上号染色体上细菌孝结构基因、L一涉顏菌素运输及发挥作用(processing)的蛋白质的基因、 赋予

16、宿主对该细菌素具有“免疫力”的相关产物的基因细菌素种类很多，一般根据产生菌的种类进行命名:大肠杆菌（Ecoli产生的细菌素为colicins （大肠杆菌素）, 而质粒被称为Col质粒。此外还有枯草杆菌素、乳酸菌素、根 瘤菌索等。大肠杆菌素是产自大肠杆菌的一种蛋白质，具有专一性地杀 死其亲缘关系很近的.不具Col质粒的其它肠道细菌的功能。由G+细菌产生的细菌素或与细菌素类似的因子与colicins有所 不同，但通常也是由质粒基因编码，有些甚至有商业价值，例如一种乳酸细菌产生的细菌素NisinA能强烈抑制某些G+细菌的生长，而被用于食品工业的保藏。(4)毒性质粒(virulence plasmid

17、 )Infcoon by& pixt wound A-AsycsaenumcTi plasmxlT-ONAPnxes*ng of T-ONA fr 辛烷和樟脑等的能力。TOL质粒：含分解甲苯的基因；CAM-OCT质粒：含分解樟脑辛烷的基因(6)隐秘质粒(cryptic plasmid )隐秘质粒不显示任何表型效应，它们的存在只有通过物理的方法，例如用凝胶电泳检测细胞抽提液等方法才能发现。它们存在的生物学意义，目前几乎不了解。在应用上，很多隐秘质粒被加以改造作为基因工程的载体（一般加上抗性基因）(7) 2 um质粒大多数酵母菌含有一种称为2 u m的质粒，属隐秘质粒-长为2屮n的6kb的环状双链

18、DNA分子 位于酵母细胞核内，50100拷贝只携带与复制和重组有关的4个基因，无遗传表型质粒上有两个600bp长的IR,被一个2.7kb区域和一个2.3kb小区域所间隔两个IR上都有一个专一重组位点(FRT),经过重组，可使质 粒互变异构成A型和B型。意义: 2 11 m质粒是酵母菌中进行分子克隆和基因工程的重要载体，因此以它为基础构建的克隆和表达载体已得到广泛的应用。另一方 面，该质粒也是研究真核基因调控和染色体复制的一个十分有用 的模型根据拷贝数或复制特点，质粒可分为:厂高拷贝数(high copy number)质粒(每个细胞中可以有10100个拷贝，其复制和染色体的复制不同步)如Col

19、El、ColE2等松弛型质粒(relaxed plasmid)低拷贝数(low copy number)质粒.(每个细胞中只有12个拷贝，j其复制行为与染色体的复制同步)如F因子，R100严谨型质粒(stringent plasmid)窄宿主范围质粒(narrow host range plasmid) (只能在一种特定的宿主细胞中愛制)I 广宿主范围质粒(broad host range plasmid) (可以在许多种细菌中复制)第三节 基因突变的规律及类型野生型:从自然界分离到的菌株一般称野生型菌株(wild type strain ),简称野生型。突变株:野生型经突变后形成的带有新性状

20、的菌株,称为突变株（mutant）一、突变(mutation)突变指细胞内遗传物质的分子结构或数量发生变化的现象。包 括基因突变(又称点突变)和染色体畸变。基因突变(gene mutation ):是指一个基因内咅B遗传结构或DNA序列的任何改变,涉及一对或少数几对碱基的置换、缺失或插入/因其发生的范围很小,所以又称点突变(point mutation ) o染色体畸变(chromosomal aberration):是指染色体较大范围内结构的变化，如缺失、重复、倒位、易位等以及染色体数目的变化。碱基置换匾疯颠换:A_G, T _CA T.G C.同种碱基的置换不同种碱基的置换缺失:TABC

21、AB ABC A1个或少数几个碱基对的插1少对的 中或几基变 子对数碱突I移码突变ABC A I B C AB传密码的阅读框架发生改变,并进一步引起转录和转译错 误的突变。遗传物质在染色体水 平发生较大范围的变 化a be X def abc efg abe abc de abc pqr de-:一一abc fed g（添加: 缺失: 畸变（染色体大损伤）丿重复: I 移位:倒位:、基因突变的特点（规律）（参见P199）自发性菌种衰退的根本原因不对应性突变的性状与突变的原因无关系 稀有性 自发突变几率低（10-610-10）突变率：每一个细胞在每一世代中发生某一性状突变的几率。（某一单位群体在

22、每一世代中产生突变株的数目） 独立性某基因的突变率不受它种基因突变率的影响可诱变性自发突变的频率可因诱变剂的影响而提高（103106 :稳定性基因突变后的新性状是稳定的可逆性 野生型菌株某一性状可发生正向突变，也可发生反 向的回复突变。三、基因突变自发性和不对应性的实验证明如何证明基因突变的非对应性?三个经典实验：1变量实验、2涂布实验、3影E卩实验证明突变的性状与引起突变的原因间无直接对应关系!1)变量实验(fluctuation analysis ) Salvador Luria & Max Delbmck(1943)甲管册杆（培养前先分成50小fP对噬菌体T1敏感的Ecoli对数期培养物

23、 ,稀释至103/mL扮装两试管，各10mL乙管与甲管分装的各小管 同时保温2436h（在同一大管中作整体培养）图 8-5 Luria辛的变協试聆oooooo o(S)(2)(C4Xl/0Xk 03)(1 )21)(|)(抗噬蔣休菌落救O O O 0QOOO O(7) ( (5) (4)(7X5X3X6)AT不引起突变G X（黄嚓吟）烷化剂作用的主要机理是引起碱基上某些能形成氢键的 集团发生烷基化。烷化位点主要在鸟卩票吟的N - 7位和腺1 票吟的N - 3位上, ；烷化后的碱基也像碱基结构类似物一样能引起碱基配对的错 误。烷化剂的另一作用是使嚓吟整个地从DNA链上脱下来, 产生一个缺口，在与

24、缺口相对应的位点上就能配上任何一个 碱基,从而引起转换或颠换。很多烷化剂除了能诱发点突变外，还能诱发染色体畸变。由于 染色体畸变常为辐射所诱发，所以这些物质又称为拟辐射物质ONTG：诱变作用强，称为超强诱变剂（突变率1%）;能诱发邻近位置的基因同时发生突变，即所谓并发突变。（3）移码突变的诱变剂一嵌入诱变剂叮噪类染料（如原黄素，卩丫叮黄（橙），ICR类等）具 有类似碱基对的扁平结构，能插入DNA分子的碱基对之 间，使DNA结构变形，导致DNA在复制过程中的滑动, 引起DNA链中插入或缺失一个或几个核昔酸，产生移码 突变。ICR： 一系列烷化剂和卩丫噪分子相结合的化合物2.物理诱变剂及其诱变机制

25、紫外线，X-射线，Y -射线，快中子，超声波等(1) 紫外线(UV)紫外线是实验室中常用的非电离辐射诱变因子,其作用 机制主要是能引起：DNA链的断裂、DNA分子双链的交联、嚅卩定的水合作用相邻碱基形成II密屣二聚体(TT , TC,CC )等。其中最主宴的效应星胸腺喀碇二聚体的形胸腺嚅卩定二聚体通常出现在同一 DNA单链上两个相邻的胸腺腳定之间,也可出现在两条DNA单链之间。两种情 况导致结果不同。(2) X 射线、厂 射线、快中子X-射线、厂射线、快中子等属于电离辐射。以X- 射线为例解释该类诱变剂诱变机理:X-射线的诱变作用有直接和间接两种方式:(1) 直接作用是引起DNA双链间氢键的断

26、裂、DNA单 链的断裂、不同DNA分子之间的交联等。(2) 间接作用是电离辐射能从水或有机分子中产生自 由基,这些自由基作用于DNA分子，引起缺失和损伤。自 由基对吨卩定的作用更强烈。此外,X射线还可能使细胞中形成一些碱基类似物, 突变由这些碱基类似物所诱发。与紫外线不同的是，电离 辐射可通过玻璃和其他物质,穿透力强,能达到生殖细胞 ,因此常用于动植物的诱变育种。热短时间的热处理也可诱发突变,热的作用是使胞吨卩定脱氨基而成为尿吨屣,从而通过碱基配对错误而引起GC-AT的转换；另外，热也可引起鸟嗥吟-脱氧核糖键的移动, 从而在DNA复制时出现包括两个鸟d票吟的碱基对, 在下一次的DNA复制中该碱

27、基对错配就会引起GC-CG的颠换。3.生物诱变剂（转座因子）及其诱变机制转座因子（transposable element）定义：位于染色体或质粒 上的一段能改变自身位置的DNA序列。广泛分布于原核和真核 细胞中。又称“跳跃基因”（2）.转座因子的特点1）在转座时，通过转座因子的复制，可将新形成的拷贝以非同 源重组的方式转移到染色体的新部位上；2）都携带有编码转座酶的基因，该酶具有转移位置的功能, 是转座所必需的； 3）两端都有正向或反向末端重复序列。(3) 根据分子结构和遗传性质，转座因子可分为3类:牛插入序列(Insertion sequencers)仅含有编码转座所必需的转座酶的基因，两

28、端存在941bp的反 向重复序列。但其插入可干扰基因的正常读码序列，导致基因失 活或引起突变。转座子(Transposon，Tn)除转座基因外，还有抗药性基因。分为1 和牛Mu噬菌体是以大肠杆菌为宿主的温和性噬菌体。它在几方面不同于另一 种温和噬菌体入：第一、Mu DNA几乎可以插入到宿主染色体的 任何一个位点上；第二、DNA两端没有粘性末端；第三、会引 起宿主的被插入基因的基因突变。复制后的靶序列(4)转座的过程:A B C D EAfBfCrDfEf靶序列由转座酶 诱导的DNA断裂转座因子A B C D ELlABCDE，A B C D E 勿单链缺口的復制和缝合 A B C D EA B

29、 C D EA9BfC9D9Ef（5）转座的遗传学效应：插入突变（基因失活和极性作用）染色体畸变（染色体的缺失重复和倒位）二、诱变及化学致癌物质的检测Ames试验Ames试验的依据“生物化学统一性”法则:人和细菌在DNA的结构及特性方面是一致的，能使微生物发生突变的诱变剂必然也会作用于人的DNA,使其发生 突变，最后造成癌变或其他不良的后果。诱变剂的共性原则：化学药剂对细菌的诱变率与其对动物的致癌性成正比oAme s试验斑点试验和平板掺入试验美国加利福尼亚大学的Bmce Ames教授于1966年发明, 因此称为Ames试验标准菌株要求：检测鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhmuri

30、um)组氨酸营养缺 陷型菌株(加厂)的回复突变率(为了增加试验的敏感性，该菌株 还应包括另外两个突变，一个是造成细胞表面透性增加的深度 粗糙突变型，另一个是丧失切除修复能力的缺失型)。回复突变(reverse mutation或back mutation): 突变体失去的野生型性状，可以通过第二次突变得到恢复，这种第二次突变称为回复突变。可疑“三致”试样+-+St7s+阳性阴性鼠肝匀浆（含加氧酶等）用途：广泛用于检测环境和食品中是否 存在化学致癌物。特点：快速、准确、费用廉价三、DNA损伤的修复除了DNA聚合酶进行校正外，还通过几种不同的机制进行DNA的修复: (1)光复活作用 (2)切除修复

31、 (3)重组修复SOS修复(1)光复活作用(photoreactivation )可见光可大大降低经紫外线照射后微生物死亡率的现象。机理：经UV照射后带有囉噪二聚体的DNA分子，在黑暗中会 和一种光激活酶光解酶结合，形成酶-DNA复合物， 该复合物暴露在可见光下时，光解酶会因获得光能而被激 活，并使二聚体重新分解成单体，光解酶也从复合物中释 放出来，再结合到其它二聚体上。这种修复机制不是移去和取代核昔酸，而是胸腺喀噪二聚体直接被修复，所以是一种无错误的修复。紫外线诱变时必须在暗室、红光下进行（2）切除修复（excision repair,又称暗修复）一种普遍的修复系统。能移去胸腺喀噪二聚体和修

32、复大多数引 起的DNA扭曲损伤。该修复系统不需要可见光，通过酶切作用 移去损伤的碱基（包括损伤位点附近的一些碱基），随后合成 一段正常DNA链。5F3内切核酸酶一3-5内切核酸酶4种酶参与外切核酸酶DNA聚合酶DNA连接酶I外切核酸酶t OHP I1DNA聚合酶 -1_OHP-rSOS修复-这是在DNA分子受到较大范围的重大损伤时诱导产生 的一种应急反应。涉及儿个基因：recA lexA uvrA uvrB uvrC的共同作用。-此外，经紫外线照射的大肠杆菌还可能诱导产生一种 称为错误倾向(ne)的DNA聚合酶，催化空 缺部位的DNA修复合成，但由于它们识别碱基的精确 度低，所

33、以容易造成复制的差错，这是一种以提咼突 变率来换取生命存活的修复，又称错误倾向的SOS修 复。dna连接酶第五节微生物的诱变育种、诱变育种中的几个原则指利用物理或化学诱变剂处理微生物群体细胞，促进其突率显著提高，然后设法从中选取少数符合育种目的的突变株。2个主要环节: （诱变（随机）筛选（定向）选用合适的诱变剂和诱变剂量处理大量均匀 、分散的微生物细胞，以引起绝大多数细胞致死的同时，使存活个体中的突变频率大大提高。设计有效的筛选方法，将少量正变株中的 优良菌株挑选出来。（一）出发菌株（original strain ）出发菌株指用于诱变育种的起始菌株O出发菌株的选择标准：养要求粗放、具有有利性

34、状乙如高产、生长速度快、营 标记明显等）；对诱变剂敏感出发菌株的来源：野生型菌株；从生产中选育的自发突变菌株;诱变获得的高产菌株（二）菌悬液的制备1选用单细胞或单抱子悬液（均匀、分散）目的使每个细胞能均匀接触诱变减少表型延迟现象（诱变后性状的分离及退化现象）2.同步培养（生理状态一致）3菌龄：对诱变剂最敏感时期J营养细胞：对数期抱子或芽抱：萌发前期4.菌悬液的制备方法物理诱变：生理盐水配制 化学诱变：缓冲液配制5.菌悬液的浓度酵母菌，霉菌的抱子：106个/mL 细菌，放线菌抱子:108个/mL（三）诱变剂的选择及处理方法1诱变剂的选择（高效，简便）物理诱变剂：频度低、 化学诱变剂：频度高,大损

35、伤，难修复，且操作简便； 点突变，易回复突变，操作麻烦。（NTG超诱变剂）UV是最常用的一种诱变剂2.剂量的选择常以杀菌率来表示相对剂量（剂量存活率曲线）最适剂量：在提高突变率的基础上，既能扩大变异幅度, 又能使变异向正突变范围移动的剂量。突变率随剂量的增加而提高，但到达一定程度后，再提 高剂量，反而会使突变率下降。正变较多出现在偏低剂量中，而负变较多出现在偏高剂 量中。在产量变异工作中，常釆用相对杀菌率为7075 %，甚至 3070 %的剂量。UV的剂量：固定UV功率和照射距离，以照射时间长短来 确定剂量多少。3诱变处理方法单因素处理或多因素的复合处理: 同一诱变剂的重复使用;两种或多种诱变

36、剂的先后使用； 两种或多种诱变剂的同时使用.（五）突变株的筛选（四）中间培养（CM,培养过夜）目的：克服表型延迟表型延迟（phenotypic lag）:表型的改变落后于基因型改变的分离性延迟的原因：对数生长期中,单核细胞常出现双核 现象,多核细胞的核也成倍增加,诱变对数期的细胞时,突 杏诵堂冷牛存一个核上，故其变具或非变具的细胞必须经过生理性延迟：気因：当变异细胞由杂合状态变为纯合状态 时，由于杂合期所合成的非变异的蛋白或酶仍然发挥作用，必 须经过细胞多代分离后，才能将这些非变异的酶稀释掉，最终 达到变异后应该表现的形态，如营养缺陷型突变株的筛选过程r初筛2步复筛1 初筛（以量为主）方法需简

37、便、快速（1）利用形态变异：需预先测定形态与产量的相关性（2）根据平板颜色反应直接挑选透明圈法（蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶）； 抑菌圈法（抗生素）；变色圈法（柠檬酸）、显色圈（氨基酸）；沉淀圈法（外毒素）透明圈直径（H） /菌落直径（C）:产量高低（初筛指标）2复筛（以质为主，定量测定） 摇瓶培养，直接检测所需产物诱变育种的基本原则:选择简便有效的诱变剂;挑选优良的出发菌株;处理单细胞或单抱子悬液;选用最适的诱变剂量;充分利用复合处理的协同效应;利用和创造形态、生理与产量间的相关指标;设计高效筛选方案;创造新型筛选方法。二、几种重要突变株的筛选方法 1抗性突变株的筛选-(1)抗终代谢物结构类似物突变株的筛选-(2)抗药性突变株筛选 2营养缺陷型的筛选1.抗性突变株的筛选（1）抗终代谢物结构类似物的突变株用豊：墮雪相应代谢物的高产菌株詬谓嶷i妻礦（又称代谢拮抗物）是指那些