RNA提取注意事项_第1页
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文档简介

1、一 . 组 织 R N A 提 取1. 最好新鲜组织，这样 RNA 提取的效果比较好，这是肯定的。2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80C或者液氮中冻存的）组 织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4C,注意不要拿到常温， 待组织解冻后，用DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预 冷的匀浆器中，然后加入一定量的 TRIZOL 试剂，然后匀浆。注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热， RNA遇 热会加速降解。如果一次做多个标本的 RNA提取，也要这样做，更不 能急。后面的步骤和细胞 RNA提取一样。二.培养细胞的RNA提取1. 贴壁细胞，需要先用胰酶消化后，然后收集到

2、 离心管 中，离心，去 上清，然后用PBS多洗2-3次，以去除多余的胰酶。悬浮细胞， 直接用 吸管 或者加样枪吹打评壁， 以使细胞基本可以被吹 下来。然后离心去上清，不需要用 PBS洗。2. 然后将少量细胞悬液转移到预冷的 DEPC泡过的1.5毫升EP管中， 然后加入一定量的TRIZOL（细胞多的话加1毫升，细胞少的话加0.5 毫升就可以 ） ，然后用枪头吹打混匀 5-10 分钟。（如果有时间就继续 往下做，如果没有时间，可以把加了 TRIZOL后的细胞裂解液冻存到 -80C，用的时候提取和新的提取的效果一样。）在冰上操作。3. 上面的混匀 5-10 分钟，基本可以使细胞裂解，然后可以进行下面

3、 的步骤，详细的步骤我就不介绍了。介绍一些需要注意的地方。1. 一定要注意冰上操作，低温离心。2. 戴口罩和勤换手套，去任何东西都要带着手套去取。3. 每次去器材的时候都要用镊子去夹，镊子要在酒精灯上烧一下。4. 所有的器材都要经过DEP（浸泡后高压后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，异丙醇等都保证没有被 RNA酶污染，不能用没有泡过DEPC 的枪头去提取液体，一定要用 DEPCS泡过的枪头去吸，如果发现试 剂有可能被污染了，要立即更换。5. 吸取上清一定不要吸到中间层的蛋白， 如果吸到蛋白一定要重新用 氯仿抽提，因为，吸到的蛋白很可能会对RNA产生降解作用。一定要 少吸，不要贪多，RNA提取不要求量，更多的要求质。6. 最后用75%勺酒精洗一次就可以，尽量减少 RNA提取时间。7. 最后一步，用DEPC水溶解RNA不要用太多的体积，以保证 RNA 的浓度。提取完后，电泳观察结果，如果上面的两条带

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