临床生化常用地色原及检测波长

1、实用标准文案临床生化常用的色原及检测波长Toos 545nm苯酚（对氯苯酚）505nmNAD （ P） H指示系统，波长340nm，项目：ALT、AST、GLUC己糖激酶法、CK、UREA、LDH 等。苯衍生物类，波长 400-410nm ，女口 ALP、GGT、CHE等。过氧化物酶指示系统，项目：TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA等。可见光波长及其互补色：可见光波长及其相应被吸收的颜色依次为：红色（630700nm ）、橙色（600 630nm ）、黄色（570 600nm ）、绿色（500 570nm ）、 蓝色（435 500nm ）、紫色（400 435nm ）。 540nm

2、:1. 双缩脲测蛋白：所有蛋白质分子都含有肽键。在碱性溶液中，肽键与铜离子结合，生成蓝紫色化合物，在540nm处吸光度与肽键的数量呈正比关系，可以计算蛋白质含量。2. 染料结合法测脑脊液蛋白：在柠檬酸存在的酸性条件下，伊红丫燃料离解成阴离子型，染料的 黄色消退，使试剂空白吸光度降低；另外，蛋白质多肽链中 的精氨酸、组氨酸、赖氨酸和色氨酸残基，离解生成带- NH3+基团，与染料阴 离子的羧基和酚基借静电吸引而结合成红色蛋白燃料复合物，其540nm处吸光度大小与蛋白质浓度呈比例。 628nm :1. 溴甲酚绿法测血清白蛋白：在 PH4.2的缓冲液中，白蛋白分子带正电荷，与 带负电荷的溴甲酚绿（BC

3、G）生成蓝绿色复合物，在波长628nm处有吸收峰。 复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比。 603nm :1. 溴甲酚紫法（BCP）测血清白蛋白：BCP溶于PH5.2的醋酸缓冲液中，呈黄 色。当它与白蛋白结合后转变为绿色的符合物，在波长603出有最大吸收峰。 650nm :1.磷钨酸法测黏蛋白：以0.6mol/L过氯酸沉淀血清中蛋白质时，黏蛋白不被沉 淀，仍存留在滤液中，再加磷钨酸使黏蛋白沉淀，然后以酚试剂测定沉淀物中蛋 白质的含量2. 米吐尔直接显色法测血清无机磷：利用无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生 成磷钼酸铵复合物，用还原剂对甲氨基酚硫酸盐（米吐尔）还原生成钼蓝。在试 剂中加入吐温一80以抑

4、制蛋白质的干扰。 604nm :1.邻苯三酚红钼络合显色法测脑脊液总蛋白：邻苯三酚红与钼酸络合形成红色复合物（吸收峰475nm ）。该复合物在酸性条件下与蛋白质形成复合体，其吸收峰移至604nm。用比色法求蛋白质含量。 530nm :1比浊法测脑脊液蛋白：脑脊液中蛋白质与磺基水杨酸-硫酸钠试剂作用产生 沉淀，所形成的浊度在530nm处进行吸光度测定，与同样处理的标准液比较测 得蛋白含量。 415nm :1亲和层析法测HbAlc :用于分离糖化与非糖化 Hb的亲和层析凝胶柱，是交 联间-氨基苯硼酸的琼脂糖珠。硼酸与结合在 Hb分子上葡萄糖的 顺位二醇基 反应，形成可逆的五环化合物，致使样品中的糖

5、化 Hb选择性地结合在柱上，而 非糖化Hb则被洗脱。然后用山梨醇解离五环化合物以洗脱糖化 Hb，在415nm 分别测定解析液的吸光度，计算糖化 Hb的百分率。 550nm :1. 糖化血清蛋白测定：血清葡萄糖能与白蛋白及其他血清蛋白分子N末端的氨基发生非酶促糖化反应，形成高分子酮胺结构。此酮胺结构能在碱性环境中与硝 基四氮唑蓝（NBT）发生还原反应，生成甲？，以1 脱氧一1 吗啉果糖（DMF ） 为标准参照物，在550nm处进行比色。 340nm :1.血清前白蛋白测定：血清中的PA与抗PA抗体在液相中反应生成抗原抗体复合物，使反应液呈现浊度。当一定量抗体存在时，浊度与血清中PA的含量呈正比，

6、利用340nm处的散射比浊或投射比浊技术，与同样处理的PA标准比较，求得样品种PA含量2. 尿微量白蛋白测定：尿液中的白蛋白与抗人白蛋白特异性抗体在缓冲液中反 应生成抗原一抗体复合物，产生浊度，与尿中白蛋白浓度呈正比，利用透射比浊 法测定340nm处吸光度，与同样处理的标准品制备的标准曲线比较，求得尿液 中的白蛋白浓度。3. 己糖激酶法测血清葡萄糖：在己糖激酶（HK）催化下，Glu和ATP发生磷酸 化反应，生成葡萄糖6 磷酸（G-6-P ）与ADP。前者在葡萄糖6 磷酸脱 氢酶（G 6 PD）催化下脱氢，生成 6 磷酸葡萄糖醛酸（6 PG）,同时使 NADP还原成NADPH。反应式如下：葡萄糖

7、 +ATP HK G6P+ ADPG6P + NADP G6PD 6PG + NADPH + H+NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比。NADPH在波长340nm有吸收峰，检测吸光度升高速率，计算血清葡萄糖浓度。4. 葡萄糖脱氢酶法测血清葡萄糖：葡萄糖脱氢酶（GDH ）催化葡萄糖脱氢，氧 化生成葡萄糖酸（D 葡萄糖酸& 内酯）。B D 葡萄糖+NAD+ GDH D 葡萄糖酸内酯+NADH向反应液中加入变旋酶可缩短反应达平衡时间，反应过程中NADH生成量与葡萄糖浓度成正比关系。5. 血浆乳酸测定：在NAD存在下，乳酸脱氢酶催化乳酸氧化成丙酮酸， 同时生成 NADH :L 乳酸 + NAD+ L

8、DH 丙酮酸 + NADH + H+在PH9.8时，平衡偏向乳酸氧化成丙酮酸。加入肼或氨基脲与丙酮酸生成复合 物，使丙酮酸不断从反应体系中移去， 进一步促进反应向右移动，从而驱动反应 的完成。分光光度计波长340nm，监测吸光度的升高速率，计算乳酸含量。6. 全血乳酸测定：在NAD+存在下，LDH催化乳酸，氧化成丙酮酸。加入硫酸肼捕获产物丙酮酸，并促进反应完成。反应完成后生成的NADH与乳酸为等摩尔关系，在340nm下测定NADH的生成量，计算乳酸的含量。7. 血浆丙酮酸测定：乳酸脱氢酶催化丙酮酸还原成乳酸，反应如下。丙酮酸 + NADH + H+ LDH L 乳酸 + NAD+分光光度计波长

9、340nm，监测NADH吸光度下降速率，计算样品中丙酮酸浓 度。本法适用于各种任选式自动分析仪。8. 全血丙酮酸测定：原理同血浆丙酮酸测定，PH7.5条件下利于上述反应（生成乳酸方向）9. 血清（B 羟丁酸）B HB测定：在有NAD存在时，B 羟丁酸在B 羟丁 酸脱氢酶（B HBDH ）催化下，生成乙酰乙酸（AcAc ）和NADH。在波长340nm 处，监测反应中吸光度的上升速率，可以计算血清中 B 羟丁酸的浓度。B HB + NAD B-HBDH AcAc + NADH + H+10. 钾的酶法测定：磷酸烯醇丙酮酸（PEP）与二磷酸腺苷（ADP ）在钾依赖性 丙酮酸激酶（PK）催化下，生成丙

10、酮酸和三磷酸腺苷（ATP）。再在乳酸脱氢酶 催化下，所生成的丙酮酸和 NADH反应，生成乳酸和NAD。反应中NADH的 消耗量与样品种钾离子浓度呈正比。因此，在 340nm处监测吸光度下降速率， 可以计算钾离子含量。反应式如下：PEP + ADP K+, PK 丙酮酸 + ATP丙酮酸 + NADH + H+ LDH 孚L酸 + NAD+11. 酶法测定血浆（血清）碳酸氢根及总二氧化碳：血浆（清）中的碳酸氢根在 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）催化下和磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）反应， 生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH ）催化下，生成苹果酸， 同时NADH被氧化成NAD+。在

11、分光光度计340nm处，吸光度下降速率与样 品中HCO3-含量成正比。反应式如下。磷酸烯醇式丙酮酸 + HCO3- PEPC 草酰乙酸+磷酸草酰乙酸 + NADH + H+ MDH 苹果酸 + NAD+12. 紫外分光光度法测血清无机磷：血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生 成的磷钼酸铵复合物，直接在340nm或325nm波长处测定吸光度。13. 速率法测定血清ALT :在ALT速率法测定中，酶偶联反应式为：L-丙氨酸+a-酮戊二酸一ALT丙酮酸+L-谷氨酸丙酮酸 +NADH+H+ LDH L-孚L酸 +NAD+上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中酶活性成正比，可在 340nm波 长处

12、检测吸光度下降速率（-K/min ），计算出ALT的活力单位。 600nm :1.染料结合法测尿微量白蛋白：将尿标本实现用Sephadex G-50凝胶过滤， 除去尿中色素及其他干扰成分。将流出物加BPB染料，使之与白蛋白结合显色, 经与同样显色的白蛋白标准液比较，可求得尿中白蛋白含量。2. 甲基麝香草酚兰比色法测血清镁：血清中镁、钙离子在碱性溶液中能与甲基 麝香草酚兰染料结合，生成蓝紫色的复合物，加入EGTA （乙二醇双-N,N,N,N-四乙酸，简称EGTA）可掩盖钙离子的干扰。 505nm :1.葡萄糖氧化酶法测血清葡萄糖：葡萄糖氧化酶（GOD ）催化葡萄糖氧化成葡 萄糖酸（D -葡萄糖酸

13、&内酯），并产生过氧化氢：Glu + 2H2O + 02 GOD 葡萄糖酸 + 2H2O2在色原性氧受体（如联大茴香胺、4-氨基安替比林偶氮酚）的存在下，过氧化 物酶催化过氧化氢，氧化色原物质，生成有色化合物。于505nm处比色即可测的葡萄糖浓度。 405nm :1钠的酶法测定：邻硝基酚-B-D-半乳糖苷（ONPG ）在钠依赖性B-半乳糖苷 酶催化下生成邻-硝基酚和半乳糖。邻-硝基酚的生成量和样品中钠离子浓度呈 正比。邻-硝基酚在碱性环境中呈黄色，可在 405nm波长处监测吸光度的升高 速度，计算钠的浓度。 460nm :1.硫氰酸汞比色法测血清氯化物：标本中的氯离子与硫氰酸汞反应，生成极难解

14、离的氯化汞，并释放出相应当量的硫氰酸离子。后者与试剂中铁离子结合生成 色泽很深的橙红色硫氰酸铁，吸收峰在 460nm，色泽强度与氯化物的含量成正 比。Hg （ SCN）2 2CI - HgCI2 + 2SCN-3CN- + Fe3+ Fe（ SCN）3 （橙红色） 610 nm甲基麝香草酚兰比色法测血清总钙：血清中钙离子在碱性溶液中与甲基麝香草酚 兰结合，声称蓝色的络合物。加入适量的 8-羟基喹啉，可消除镁离子对测定的 干扰，与同样处理的钙标准液进行比较，以求得血清总钙的含量。 575nm邻-甲酚酞络合酮比色法测血清总钙： 邻-甲酚络合酮是金属络合指示剂，同时 也是酸碱指示剂，在碱性溶液中与钙

15、及镁螯合，声称紫红色螯合物。作钙测定时， 在试剂中加入8-羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰。 640nm硫酸亚铁磷钼蓝比色法：用三氯醋酸沉淀蛋白，向无蛋白滤液中加入钼酸铵试剂， 与无机磷结合生成磷钼酸铵，在以硫酸亚铁为还原剂，还原成蓝色化合物（钼蓝）， 进行比色测定。 510 nmCalmagite染料比色法测定血清镁：血清中镁在碱性条件下与 Calmagite染料 生成紫红色络合物，颜色的深浅与镁的浓度成正比。 溶液中的EGTA可消除钙的 干扰，使用表面活性剂可使蛋白胶体稳定，不必去除血清中蛋白质而直接测定镁。 562nm血清铁和总铁结合力测定：与转铁蛋白结合的血清铁在酸性介质中从转铁蛋白中 解离出来，再被还原剂还原成二价铁，后者与亚铁嗪生成紫红色化合物，在 562nm处有吸收峰，可作比色测定。直接测定法应纠正血清本身的色度，故应 设血清空白。总铁结合力（TIBC）是指血清中转铁蛋白能与铁结合的总量。将过量铁标准液 加到血清中，使之与未带铁的转铁蛋白结合，多余的铁被轻质碳酸镁粉