紫外光度法测定维生素C实验报告

1、紫 外 分 光 光 度 法 测 定 维 生 素 C 片 维 生 素 C 的 含 量 一、实验目的 1. 学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法； 2. 熟练紫外 -可见分光光度计的操作。 二、实验原理 维生素C （V。是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构，分D和L 两种立体构型，但只有L型有生理功效。维生素C具有较强的还原性，在一定条件下氧化 型和还原型可以互变,两者均具有生物活性（结构式见图1）,其C2和C3位上两个相邻的 烯醇式羟基极易解离而释放出 H+,故维生素C虽然不含自由羧基，仍具有有机酸的性质。 维生素C呈无色无臭的片状结晶体，易溶于水,不溶于脂。在酸性环境中稳定

2、，遇空气中氧、 热、光、碱性物质 , 特别是有氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。 具有n电子的共轭双键化合物、芳香烃化合物等，在紫外光谱区都有强烈吸收，其 摩尔吸收系数 k 可达 1 04- 1 0 6数量级。利用紫外吸收光谱进行定量分析，要借助朗伯 -比 尔定律。根据维生素C在稀硫酸溶液（维生素C水溶液在pH 56之间稳定）中，在245 nm波长处有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法测定维生素C片含量的方法。 三、实验仪器及试剂 实验仪器：容量瓶（100 ml、1000 ml）、移液管（0.5 ml、5 ml ）、烧杯、紫外分光光 度计 实验用品：98%&硫酸（分析纯，1

3、.84 g/ml ）、维生素C对照品系以原料药经105 C干 燥至恒重（含量为99.7 %）、维生素C片（2片）、去离子水 四、实验步骤 1. 0.005 mol L-1硫酸溶液的配制 用 0.5 ml 移液管移取 0.27 ml 98% 浓硫酸放入事先已盛有蒸馏水的烧杯中，搅拌， 冷却至室温后移入 1000 ml 容量瓶，稀释至刻度，待用。 2. 0.5 g L-1 对照品溶液的配制 精密称取105C干燥至恒重的维生素 C对照品50 mg置100 ml量瓶中，加0.005 mol L-1硫酸溶液制成0.5 g L-1对照品溶液。 3. 维生素C对照品标准溶液的配制 用5 ml移液管精密量取0

4、.5 g L-1对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 ml，分别 置100 ml量瓶中，用0.005 molL-1硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，待用。 4. 测定波长及标准曲线 以0. 005 mol L-1硫酸溶液为空白，测定维生素C在稀硫酸溶液中最大吸收波长，并 在此波长处测定维生素C对照品标准溶液的吸光度，以浓度对吸光度作线性回归。 5. 样品含量测定 取维生素C片2片，精密称定，研细，精密称取适量（0.06g，约相当于维生素C 50 mg） 置100 ml容量瓶中,加0. 005 mol L-1硫酸溶液适量，超声5 min使溶解,再加0. 005 mol L-1 硫酸溶液至刻度

5、，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2.0 ml置100 ml量瓶中， 加0.005 mol L-1硫酸溶液至刻度，摇匀，在最大吸收波长处测定吸光度。 6. 空白试验 模拟维生素C片处方比例，精密称取辅料适量置100 ml量瓶中，与步骤5样品含量测 定同法操作，在最大吸收波长处测定吸收度为0。 7. 回收率试验 先测得2 ml样品溶液的吸光度A （C）,再取0.0125 g/L的VC标液200卩l，于2 ml 已测得吸光度A的样品溶液中，再测得吸光度G）。 五、实验数据记录及处理 1. 维生素的吸收波长 在紫外可见分光光度计上扫描测定 VC标准样品的吸收光谱，结果显示 VC在244nm 波

6、长处的吸光度值最大。 2. 维生素C对照品标准曲线 标准VC浓度（g/L ） 0.0025 0.0050 0.0075 0.0100 0.0125 Abs 0.1264 0.2663 0.4079 0.5462 0.6905 y = 56.3240 x - 0.0150R=1.0000 3. 样品中维生素C含量测定 样品nWg 0.0600 0.0600 0.0580 Abs 0.5482 0.5426 0.5257 样品VC浓度（g/L ） 0.0100 0.0099 0.0096 样品中VC含量（% 83.33 82.50 82.76 平均值（%） 82.86 RSD( % 0.5147

7、4. 回收率试验 先测得2 ml样品溶液的吸光度 A (C),再取0.0125 g/L的VC标液200卩l，于 2 ml已测得吸光度A的样品溶液中，再测得吸光度 A (G)。 1 2 3 A1 0.5482 0.5426 0.5257 G 0.0100 0.0099 0.0096 加入 V (0.0125 g/L ) /mL 0.2000 0.2000 0.2000 A 0.6093 0.6016 0.5912 C 0.0111 0.0109 0.0108 回收率(% 95.42 92.21 102.32 平均回收率(% 96.65 RSD( % 5.17 六、实验结果及讨论 1. 维生素C还原性很强，在空气中易被氧化，在酸性介质中氧化作用减慢，水溶液在 pH = 56之间稳定，故本实验选用 0.005 mol L-1硫酸溶液(pH = 5.2 )为溶剂，维 生素C稳定性好。 2. 标准曲线R=1.0000,且测定的未知样品的吸光度均落在标准曲线有效的范围内，实验 结果表明，维生素C在0.0025-0.0125 g/L范围内与吸光度呈良好的线性关系。 3. 由于对加标回收率的原理及概念模糊，导致实验在这