原子法确认方案讲解

1、原子吸收分光光度计法确认方案QY TS 05 - 014-01第16页/共5页亳州市远光中药饮片厂原子吸收分光光度计法确认方案文件编号：QY TS 05 014-01备注:亳州市远光中药饮片厂 原子吸收分光光度计法确认方案目录1. 验证方案批准1、确认的目的；2、确认的范围;3、实施人员及人员职责；4、确认方案的培训；5、实施过程中出现变更和偏差处理；6、样品信息；7、试验所用仪器及试剂；8、确认项目及方法；9、结论评估及判定；10、再确认;11、风险评估O亳州市远光中药饮片厂原子吸收分光光度确 认方案编号QY TS 05 014-01页数共5页制定人制定日期年 月H修订日期年 月 日审核人审

2、核日期年 月IT颁发部门质量管理部批准人批准日期年 月 日生效日期年 月 日分发部门1、确认的的：建立原子吸收分光光度计法确认方案，在试验中严格按照标准操作，保证试验结果的真实可信，以确认原子吸收分光光度计法按中国药典2015版的测定方法符合我 厂的检验需要。2、确认范围:中国药典2015版中的用于重金属及有害元素测定原子吸收分光光度计法。3、确认小组成员及职责部门姓名确认分工化验室负责确认工作的安排。 确保确认工作按方案进行。负责起草确认方案、确认报告，负责对相关人员进行培 训。负责按照方案的要求执行，并记录检验原始记录。 负责将检查结果填写在本方案的附件记录表中。质量部确认方案适用法令规章

3、、标准、产品质量标准；偏差管 理（如果需要）。负责确认过程的监督工作安排。负责对确认中出现的问题提出指导意见。负责审核批准 偏差。确认小组协助起草确认方案，为确认过程提供技术支持，协调确 认的正常进行并负责保存所有确认相关资料以备査。质量授权人负责确认方案及报告的审核与批准，提供资源，颁发确 认证书。4、确认方案的培训：确认方案的批准后，必须对所有确认实施人员进行该方案及相关操作规程的培训,培训合格后方可进行确认方案的实施。5、实施过程中出现变更和偏差处理：在实施过程中，出现变更和偏差时，要及时上报确认小组，山确认小组进行风险评 估，然后报验证委员会的评估结论审批。6、样品信息：本次试验用甘草

4、作为供试品，用两个人分别做两组试验来确认原子吸收分光光度汁 法是否符合我厂需要。对照品必须为国家法定标准物质并且在有效期内。7、试验所用仪器及试剂：7. 1试验所用仪器必须经过校验，并且在校验有效期内。试验用仪器使用前必须挂 有“已清洁”、“完好”标志。保证试验的正常运行。7. 2试验所用试剂必须在有效期内以保证试验的正常运行，降低风险。8、确认项目及方法：8、1确认项LI为R草的重金属及有害元素测定测定。8、2确认的方法为按照中国药典2015版中关于甘草的原子吸收分光光度计法: 照铅、镉、神、汞、铜测定法（附录IX B原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体 质谱法）测定，铅不得过白万分之五；镉

5、不得过千万分之三；碑不得过白万分之二；汞 不得过千万分之二；铜不得过百万分之二十。注：附录IX B原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法一、原子吸收分光光度法本法系釆用原子吸收分光光度法测定中药中的铅、镉、碑、汞、铜，所用仪器应符 合使用要求（附录V D）。除另有规定外，按下列方法测定。1 铅的测定（石墨炉法）测定条件参考条件：波长283.3nm,干燥温度100-120C,持续20秒；灰化温度 400750C,持续2025秒；原子化温度17002100C,持续45秒。铅标准储备液的制备精密量取铅单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制 成每lml含铅（Pb） lpg的溶液,即得（05C贮

6、存）。标准曲线的制备 分别精密量取铅标准储备液适量，用2%硝酸洛液制成每lml分 别含铅Ong, 5ng, 20ng, 40ng, 60ng, 80ng的溶液。分别精密量取lml,精密加含1 % 磷酸二氢鞍和0.2%硝酸镁的溶液0.5ml,混匀，精密吸取20卩1注入石墨炉原子化器， 测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备 A法 取供试品粗粉0.5g,精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内， 加硝酸35ml,混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内，进 行消解（按仪器规定的消解程序操作）。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热 至红棕色蒸气挥尽，并继

7、续缓缓浓缩至23ml,放冷，用水转入25ml量瓶中，并稀释 至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液。B法 取供试品粗粉lg,精密称定，置凯氏烧瓶中，加硝酸-高氯酸（4： 1）液合 溶液510ml,混匀，瓶口加一小漏斗，浸泡过夜。置电热板上加热消解，保持微沸， 若变棕黑色，再加硝酸-高氯酸（4： 1）混合溶液适量，持续加热至溶液澄明后升高温 度，继续加热至冒浓烟，直至口烟散尽，消解液呈无色透明或略带黃色，放冷，转入50ml 量瓶中，用2%硝酸溶液洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。 同法同时制备试剂空白溶液。C法 取供试品粗粉0.5g,精密称定，置瓷堆竭中，于电热板上先低

8、温炭化至无烟, 移入高温炉中，于50CTC灰化56小时（若个别灰化不完全，加硝酸适量，于电热板上 低温加热，反复多次直至灰化完全），取出冷却，加10%硝酸溶液5ml使溶解，转入25ml 量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制 备试剂空口溶液。测定法 精密量取空口溶液与供试品溶液各lml,精密加含1%磷酸二氢按和0.2% 硝酸镁的溶液0.5ml,混匀，精密吸取1020卩1,照标准曲线的制备项下方法测定吸光 度，从标准曲线上读出供试品洛液中铅（Pb）的含量，计算，即得。2.镉的测定（石墨炉法）测定条件参考条件：波长228.8nm,干燥温度100120C,持续2

9、0秒；灰化温 度300-500C,持续2025秒，原子化温度15001900C,持续45秒。镉标准储备液的制备精密量取镉单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制 成每lml含镉（Cd） 1昭的溶液,即得（05C贮存）。标准曲线的制备 分别精密量取镉标准储备液适量，用2%硝酸洛液稀释制成每1ml 分别含镉Ong, O.8ng, 2.0ng, 4.0ng, 6.0ng, 8.0ng的溶液。分别精密吸取10pl,注入 石墨炉原子化器，测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备同铅测定项下供试品溶液的制备。测定法精密吸取空口溶液与供试品溶液各10-20卩1,照标准曲线

10、的制备项下方法 测定吸光度（若供试品有干扰，可分别精密量取标准溶液、空口溶液和供试品溶液各lml, 精密加含1 %磷酸二氢按和0.2%硝酸镁的溶液0.5ml,混匀，依法测定），从标准曲线 上读出供试品溶液中镉（Cd）的含量，计算，即得。3神的测定（氢化物法）测定条件 釆用适宜的氢化物发生装置，以含1 %硼氢化钠和0.3%氢氧化钠溶液 （临用前配制）作为还原剂，盐酸溶液（1-100）为载液，氮气为载气，检测波长为 193.7nmo碑标准储备液的制备精密量取碑单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制 成每lml含神（As） lyg的溶液,即得（05C贮存）。标准曲线的制备 分别精密量取碑标准储备

11、液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml 分别含神Ong, 5ng, 10ng, 20ng, 30ng, 40ng的溶液。分别精密量取10ml,置25ml 量瓶中，加25%碘化钾溶液（临用前配制）lml,摇匀，加10%抗坏血酸溶液（临用前 配制lml,摇匀，用盐酸溶液（20-100）稀释至刻度，摇匀，密塞，置80C水浴中加 热3分钟，取出，放冷。取适量，吸入氢化物发生装置，测定吸收值，以峰面积（或吸 光度）为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备 同铅测定项下供试品溶液的制备中的A法或B法制备。测定法精密吸取空口溶液与供试品溶液各10ml,照标准曲线的制备项下，自“加 25%碘化钾

12、溶液（临用前配制）1ml”起，依法测定。从标准曲线上读出供试品溶液中 神（As）的含量，计算，即得。4汞的测定（冷蒸气吸收法）测定条件 采用适宜的氢化物发生装置，以含0.5%硼氢化钠和0.1%氢氧化钠的溶 液（临用前配制）作为还原剂，盐酸溶液（1-100）为载液，氮气为载气，检测波长为 253. 6nmo汞标准储备液的制备精密量取汞单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制 成每lml含汞（Hg） lyg的溶液,即得（05C贮存）。标准曲线的制备 分别精密量取汞标准储备液0ml, 0.1ml, 0.3ml, 0.5ml, 0.7ml, 0.9ml,置50ml量瓶中，加20%硫酸溶液10ml,

13、5%高镭酸钾溶液0.5ml,摇匀，滴加 5%盐酸為胺溶液至紫红色恰消失，用水稀释至刻度，摇匀。取适量，吸入氢化物发生 装置，测定吸收值，以峰面积（或吸光度）为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备 A法 取供试品粗粉0.5g,精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内， 加硝酸35ml,混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内进行 消解（按仪器规定的消解程序操作）。消解完全后，取消解内罐置电热板上，于120C缓 缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续浓缩至23ml,放冷，加20%硫酸溶液2ml, 5%高 猛酸钾溶液0.5ml,摇匀，滴加5%盐酸疑胺溶液至紫红色恰消失，转入10ml量瓶

14、中， 用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，必要时离心，取上清液，即 得。同法同时制备试剂空白溶液。B法取供试品粗粉lg,精密称定，置凯氏烧瓶中，加硝酸-高氯酸（4： 1）混合 溶液510ml ,混匀，瓶口加一小漏斗，浸泡过夜，置电热板上，于120140C加热 消解48小时（必要时延长消解时间,至消解完全），放冷，加20%硫酸溶液5ml, 5% 高镭酸钾帑液0.5ml,摇匀，滴加5%盐酸疑胺溶液至紫红色恰消失，转入25ml量瓶中, 用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，必要时离心，取上清液，即 得。同法同时制备试剂空白溶液。测定法精密吸取空口洛液与供试品溶液适量，照

15、标准曲线制备项下的方法测定。 从标准曲线上读出供试品溶液中汞（Hg）的含量，计算，即得。5铜的测定（火焰法）测定条件检测波长为324.7nm,采用空气-乙烘火焰，必要时进行背景校正。铜标准储备液的制备精密量取铜单元素标准溶液适量，用2%硝酸溶液稀释，制 成每lml含铜（Cu） 10pg的溶液，即得（05C贮存）。标准曲线的制备 分别精密量取铜标准储备液适量，用2%硝酸溶液制成侮lml分 别含铜Opg, 0.05|ig, 0.2pg, 0.4（ig, 0.6gg, 0.8|ig的溶液。依次喷入火焰,测定吸光度， 以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。供试品溶液的制备同铅测定项下供试品溶液

16、的制备。测定法精密吸取空口溶液与供试品溶液适量，照标准曲线的制备项下的方法测 定。从标准曲线上读出供试品溶液中铜（Cu）的含量，计算，即得。二、电感耦合等离子体质谱法本法系釆用电感耦合等离子体质谱仪测定中药中的铅、神、镉、汞、铜，所用仪器 应符合使用要求（附录XI D）。标准品储备液的制备 分别精密量取铅、神、镉、汞、铜单元素标准溶液适量，用 10%硝酸溶液稀释制成每lml分别含铅、神、镉、汞、铜为l|ig, 0.5pg, lpg, lpg, 10pg 的溶液，即得。标准品溶液的制备 精密量取铅、碑、镉、铜标准品储备液适量，用10%硝酸溶液 稀释制成每 lml 含铅、li申 Ong、Ing、5

17、ng 10ng、20ng,含镉 Ong、O.5ng 2.5ng、5ng、 lOng,含铜Ong、50ng、lOOng、200ng、500ng的系列浓度混合溶液。另精密量取汞标 准品储备液适量，用10%硝酸溶液稀释制成每lml分别含汞Ong、O.2ng、O.5ng、Ing. 2ng、5ng的溶液,本液应临用配制。内标溶液的制备 精密量取错、锢、彼单元素标准溶液适量，用水稀释制成每lml 各含1隧的混合溶液，即得。供试品溶液的制备 取供试品于60C干燥2小时，粉碎成粗粉，取约0.5g,精密称 定，置耐压耐高温微波消解罐中，加硝酸510ml （如果反应剧烈，放置至反应停止）。 密闭并按各微波消解仪的

18、相应要求及一定的消解程序进行消解。消解完全后，消解液冷 却至60C以下，取出消解罐，放冷，将消解液转入50ml量瓶中，用少量水洗涤消解罐 3次，洗液合并于量瓶中，加入金单元素标准溶液（lMg/ml） 200pl,用水稀释至刻度, 摇匀，即得（如有少量沉淀，必要时可离心分取上清液）。除不加金单元素标准溶液外，余同法制备试剂空口溶液。测定法 测定时选取的同位素为63CU. 75AS痕Cd、202电、和2O8pb,其中叱1|、 75As以72Ge作为内标，痕Cd以“讪作为内标，2O2Hg、208Pb以“Bi作为内标，并根 据不同仪器的要求选用适宜校正方程对测定的元素进行校正。仪器的内标进样管在仪器分

19、析工作过程中始终插入内标溶液中，依次将仪器的样品 管插入各个浓度的标准品洛液中进行测定（浓度依次递增），以测量值（3次读数的平均 值）为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。将仪器的样品管插入供试品溶液中，测 定，取3次读数的平均值。从标准曲线上计算得相应的浓度。在同样的分析条件下进行空口试验，根据仪器说明书的要求扣除空白干扰。8、3取供试品甘草用两个人分别做二组试验来进行确认该原子吸收分光光度汁法 是否符合我厂需要。9、结论评估及判定：确认小组对检验结果进行评估分析，然后判定是否釆用该种检验方法。10、再确认：如遇中国药典的检验方法改变时，该检验方法需进行重新确认。11、风险评估：该验证方案的

20、主要风险点在于仪器使用、试剂配置、人为判定等的 人为操作方面，可能导致数据不准确，经过不同的人来做实验确认是降低操作原因导致 的试验准确性风险，并通过QA全程监控，降低风险使之在可接受的范围之内。原子吸收分光光度计法确认报告确认项目名称原子吸收分光光度计法确认报告确认报告编号QY TS 05 014-01确认开始时间年 月 日确认结束时间年 月 日确认小组成员组长组员确认实施情况1、人员情况2、检验用水情况3、仪器情况4、试剂情况5、检验用文件执行情况检查记录6、试验情况偏差处理结果在执行本确认过程中，发生任何偏差均应有文件记录，将所有偏 差情况描述清楚，并列出偏差纠正结果，说明引起偏差的原因

21、，III 确认小组组长填写偏差报告，交给确认委员会，经审核合格后批准， 实施后直至达到合理的结果。确认结果 分析与评价1、人员情况人员情况评价表项 目质量检验人员质量保证人员人数健康情况评价人员 培 训 情 况GMP及附录药品管理法安全防护仪器SOP、维修保养SOP更衣岗位SOP原子吸收分光光度讣法确认方案质量检验相关文件备注：检查人检查日期年 月 日复核人复核日期年 月 日2、检验用水情况公用介质（检验用水）检查情况记录检查内容检查结果是否符合要求检验用水符合口不符合口备注：检査人检查日期年 月 日复核人复核日期年 月 日3、仪器情况仪器名称清洁情况运行及保养状况检查结果万分之一天平已清洁口未清洁口超声波已清洁口未清洁口原子吸收分光光度计已清洁口未清洁口微波消解仪已清洁口未清洁口备注：检查人检查日期年 月 日复核人复核日期年 月 日4、试剂