细菌内毒素检测方法验证实施方案定稿

1、个人收集整理仅供参考学习细菌内毒素检测方法验证方案起草人:部门姓名签名日期QC朱雪审核人:部门姓名签名日期批准人:部门姓名签名日期生效日期：文件分发范围：QA.QC1验证目地：为确保细菌内毒素检测方法地专属性灵敏度,保证检测结果可符合质量标准要求特制定此验证方案.b5E2RGbCAP2.验证范围：适用于注射液细菌内毒素检测方法验证.3验证小组成员及职责：组长：，QC经理，负责协调小组地行动，跟进验证方案地审批流程，协调与其他部门及小组 成员内地交流,组织验证数据并文件化.plEanqFDPw组员：，QC人员,负责起草方案并按照确认方案进行验证，起草验证报告组员：QC微生物主管，负责验证方案与报

2、告地审核，验证过程地复核4验证依据：4.1药品生产质量管理规范（2010年修订）4.2药品生产验证指南（2003年版）4.4细菌内毒素检验操作规程（SN-008-F0061-02）4.5中国药典2010版二部附录5验证前准备：5.1人员培训确认：姓名部门培训时间培训内容考核结果注射液细菌内毒素检测方法验证方案（SN-AMVP2012055标准所有参与人员均应培训考核合格.结论备注检查人：日期：复核人：日期:5.2仪器设备仪器设备型号设备编码校验有效期电热干燥箱洁净工作台试管恒温仪旋涡混合器移液枪5.3检验材料.试剂及标准品名 称规格批号灵敏度内毒素含量生产厂家细菌内毒素检查用水细菌内毒素工作标

3、准品鲎试剂异丙醇无热原吸头6.鲎试剂灵敏度复核:以上该批鲎试剂按细菌内毒素检查法操作规程(SN-008-F0061-02)检查法地 要求复核标示灵敏度,应符合规定.DXDiTa9E3d鲎试剂灵敏度复核记录(SN-008-F0061-R02-01)编号：.灵敏度复核结果：EU/ml7验证方法：通过比较内毒素在水溶液和供试品溶液中反应地差异程度，来确定供试品在该浓度下是否对细菌内毒素（BET检查有干扰,至少对3批样品进行干扰试验.RTCrpUDGiT 7.1供试品细菌内毒素限值和最大稀释倍数地确定（L）:7.1.1限值：每1mg中含细菌内毒素地量应小于 30EU7.1.2供试品地最大有效稀释倍数（

4、MVD公式：MV氐C*L/入式中：C为供试品溶液地浓度（为 2.5mg/ml）,其中当L以EU/ml表示时,C为 1.0ml/ml ;当L以EU/mg或EU/U表示时,C地单位为mg/ml或U/ml,入为鲎试剂地灵敏 度.5PCzVD7HxA7.1.3最大有效稀释倍数（MVD计算结果：MV氐CL/入=（2.5mg/ml*30EU/mg） /0.25 EU/ ml=300 倍7.2干扰试验7.2.1细菌内毒素标准溶液制备：取细菌内毒素工作标准品（160EU/ml） 一支，开启，加入1ml细菌内毒素检查用用水 溶解，置旋涡混合器上混合15分钟，得到160EU/ml地内毒素标准溶液（以E160表示）

5、， 用细菌内毒素检查用水稀释成 4个浓度地标准溶液即2入.入.0.5入.0.25入.具体稀释过程 如下：（选用灵敏度入=0.25地鲎试剂进行实验）jLBHrnAlLg1mlBET 0.2mlE 価 0.2mlE 161.0ml E 8 1.0mlE 1 1.0mlEo.5xHAQX74J0XE 16（/ 支E 160” E16 El.6kE1E3.5”LDAYtRyKfE1.8mlBET 1.8mlBET 0.6mlBET 1.0mlBET 1.0mlBETZzz6ZB2Ltk1.0mlE 0.25 1.0mlE 0.125E 0.25 0.125E0.06251.0mlBET 1.0mlBE

6、T7.2.2供试品溶液地制备直接将供试品按最大稀释倍数稀释,即稀释300咅,供试液浓度为So。.稀释步骤如下：0.2ml0.5ml5.0mlS原液 S0S50S）001.8ml7.0ml5.0ml4个浓度2入（丘5） .X7.2.3含内毒素地供试品溶液地制备用供试品溶液将7.2.1中地同支细菌内毒素标准品稀释成160 0.2mlE161.0ml E8 1.0mlE 11.OmlEo.5- E16 El.6 1”E1-Ed.5ImIBET 0.2mlErqyn14ZNXIE 16（/ 支3001.8ml S 3000.6ml S3001.0ml S 3001.0ml（丘.5 ） .0.5 X （

7、曰.5 ） .0.25 X （ Ed.5 ）地含内毒素地供试品溶液.dvzfvkwMIlEmxvxOtOco1.8ml SSsooSixE2yXPq51.0mlE 0.25 1.0E 0.125E 0.25 E -0.125曰.0 *1.0ml S3001.0ml S 300注：每步稀释前被稀释液应置于旋涡混合仪上混合至少30秒.7.2.4鲎试剂地准备取规格为0.1ml/支地鲎试剂36支,轻弹壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，70%异丙醇棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内.每支加入0.1ml检查用水溶解， 轻轻转动瓶壁,使内容物充分溶解,避免产生气泡.6ewMyirQFL7.2.5加

8、 样（1）将准备好地规格为0.1ml/支鲎试剂取其中18支（管）放在试管架上，排成5列,4 列4支（管），1列2支（管）.其中地4支4列每列每支分别加入0.1ml地2.0 X （ E0.5 ） .1.0X（E0.25 ） .0.5 X （E0.125） .0.25 X （E0.0625）地内毒素标准溶液,另一列 2支（管）加入 0.1ml 检查用水作为阴性对照.kavU42VRUs（2） 将另外18支（管）鲎试剂放在试管架上，排成5列,4列4支（管），1列2支（管）. 其中地4支4列每列每支分别加入0.1ml地含2.0.1.0X .0.5X .0.25X地内毒素地供试品溶液, 另一列2支（管）

9、分别加入0.1mlS300供试品溶液作为供试品对照.y6v3ALoS897.2.6加样结束后，轻轻振动混匀，避免产生气泡，放入37 1.0C试管恒温器中，保温60 2分 钟后，观察并记录结果.M2ub6vSTnP7.2.7试验结果记录（阳性表示为“ +”；阴性表示为“-”）：见附件干扰试验记录.728试验结果计算如两组最大浓度2.0入均为阳性，最低浓度0.25入均为阴性，阴性对照4管均为阴性时, 按下式计算用检查用水制成地内毒素标准溶液地反应终点浓度地几何平均值（Es）和用供试品溶液或稀释液制成地内毒素溶液地反应终点浓度地几何平均值（Et）.OYujCfmUCw4_-1_-E= lg - （E

10、Xs/4 ） E= lg - （EXt/4 ）式中：Xs.Xt分别为用检查用水和供试品溶液制成地内毒素溶液地反应终点浓度地对数值（lg ） . eUts8ZQVRd7.2.9结果判断及结论当Es在0.5心2.0 （包括0.5 和 2.0入时且Et在0.5 Es2.0 Es （包括0.5 Es和2.0Es时，则认为供试品在该浓度下不干扰实验，可在该浓度下对此供试品进行细菌内毒素检查.试验记录及结论见附件干扰试验记录.sQsAEJkW5T&异常情况处理验证过程中，应严格按照岗位标准操作规程和验证方案进行操作，如出现偏差或检查结果不符合标准时应及时报告验证小组组长,验证小组组长组织人员进行讨论，确认

11、 是否影响产品质量和验证结果，如无影响可继续进行验证；如有影响应分析原因或调整 方案后重新进行验证操作，调整方案后应经验证委员会批准，所有异常情况应在验证报 告中予以描述说明.GMslasNXkA9. 验证结果评价与结论验证管理员负责收集各项验证试验结果记录，验证小组组长进行综合评审，做出验 证结论,确认验证周期.对验证结果地评审应包括：TIrRGchYzg验证试验是否有遗漏，验证记录是否完整？验证试验过程中对验证方案有无修改？修改原因依据以及是否经过批准？验证试验结果是否符合要求？偏差及偏差说明是否合理？是否需要进一步补充 试验？起草好地相关 SOP应同验证参数吻合，如出现偏差，应根据验证数

12、据修订相关SOP.验证小组成员根据验证结果，确定该验证地再验证周期.10. 附录附件：干扰试验记录附件干扰试验记录检验项目：细菌内毒素检品名称批号样品来源检验目地取样日期检验日期检验依据中国药典2010版二部附录 XI E细菌内毒素检验操作规程(SN-008-F0061-XX)【细菌内毒素】标准规定：每1mg中含细菌内毒素地量应小于30EU.1.检验仪器及设备：设备名称设备型号设备编码校验有效期至洁净工作台电热鼓风干燥箱试管恒温仪微型漩涡仪移液枪2.检验用材料.试剂及标准品名称生产厂家规格批号内毒素工作标准品细菌内毒素检查用水鲎试剂无热原吸头3.检验操作：3.1鲎试剂复溶:鲎试剂灵敏度复核结果

13、：EU/ml配制：每支鲎试剂加入 ml细菌内毒素检查用水，复溶.3.2供试品稀释步骤：3.3细菌内毒素溶液地配制:3.4含内毒素地供试品溶液地制备：3.5加样:内毒素浓度(EU/ml)2.0入入0.5入0.25 入供试品对照阴性对照1内毒素标准溶液(ml)2341含供试品地内毒素溶液(ml)2343.6检验结果记录:内毒素浓度(EU/ml)2.0入入0.5入0.25 入供试品对照阴性对照反应终点浓度地对数值XEsEt12内毒素标3准溶液41234含供试品地内毒素溶液(备注：“+”表示阳性；“”表示阴性)3.7检验结果计算：4_-1_-E= lg - (Xs/4 ) Et= lg - (EXt/

14、4 )式中：Xs.Xt分别为用检查用水和供试品溶液制成地内毒素溶液地反应终点浓度地对数值(lg ). 7EqZcWLZNX3.8结果判断：3.9结论:注：本次试验异常情况.有 无日期:检验人/日期：复核人/日期:版权申明本文部分内容，包括文字、图片、以及设计等在网上搜集整理.版权为个人所有This articlein eludes some parts, in cludi ngtext, pictures, anddesig n. Copyright is pers onal own ership.izq7iGfO2E用户可将本文地内容或服务用于个人学习、研究或欣赏，以及其他非 商业性或非盈利

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