亚硝酸盐的测定讲课稿

1、亚硝酸盐的测定盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐的含量1亚硝酸盐的测定（盐酸萘乙二胺法）1.1原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸（H2N- C6H-SO3H）重氮化，产生重氮盐，此重氮盐再与偶合试剂 （盐酸萘乙二 胺）偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为 550nm测定其吸光度后，可与标 准比较定量。2HC1+ NaNO + WN-S03H 重氮JCI-J4- 2- SO3H+ NaCl + 2N0N2HCI . H2NH2CH2CHN-盐酸萘乙二胺+ ci-_n-SO3H 週合N2HCI . H2NH2CH2CHN-N - N- - SOH+ HCI紫红色1.2

2、仪器和试剂1.2.1仪器 小型粉碎机。 分光光度计。 25ml具塞比色管1.2.2试剂 氯化铵缓冲溶液：在1 000ml容量瓶中加人500ml水，然后准确加入 20.0ml 盐酸，振荡混匀后，再准确加入 50ml 氢氧化铵，用水稀释至刻度。必 要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试 pH至9.69.7。 硫酸锌溶液(0.42mol/L):称取120g硫酸锌(ZnSQ 7HO)，用水溶 解，并稀释至 1000ml。 氢氧化钠溶液 (20g/L) ：称取 20g 氢氧化钠用水溶解，稀释至 1 000ml。 对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml 冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温

3、保存。 盐酸萘乙二胺溶液 (1g/L) ：称职 0.1g 盐酸萘乙二胺，加 60%乙酸溶 解并稀释至100ml，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，1周内稳定。 显色剂：临用前，将盐酸萘乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积 混合。仅供 1 次使用。 亚硝酸钠标准储备液：准确称取 250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，用水溶解后移入 500ml 容量瓶中，加 100ml 氯化铵缓冲溶液，用水 稀释至刻度，混匀，在 4 C避光保存。此溶液每毫升相当于500他的亚硝酸钠。 亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准储备液1.00ml，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀

4、。此溶液每毫升相当于5.0 pg的亚硝酸钠。1.3 操作步骤1.3.1 样品的处理称取约10.00g（粮食称取5.00g）经绞碎混匀的样品，置于 250ml烧杯中， 加。70ml水和12ml氢氧化钠溶液（20g/L），混匀，用氢氧化钠溶液（20g/L）调 样品pH至8,定量转移至200ml容量瓶中，加l0ml硫酸锌溶液，混匀。如不 产生白色沉淀，可再补加 25ml氢氧化钠溶液，搅拌混匀。置60C水浴中加热10min,取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20ml，收集滤液备用。1.3.2亚硝酸盐标准曲线的绘制吸取0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5

5、.0ml亚硝酸钠标准使用液（相当于 0.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 用 的亚硝酸钠），分别置于 25ml 具 塞比色管中。分别加入4.5ml氯化铵缓冲溶液，2.5ml60 %的乙酸，然后立即加 入5.0ml显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min,用1cm比色杯（灵敏度低时可换2cm比色杯），以零管调节零点，于波长 550nm处测吸光度，绘制标 准曲线。1.3.3样品的测定吸取10.0ml样品滤液于25ml具塞比色管中，按标准曲线制备程序，自“分 别加入4.5ml氯化铵缓冲液”起依法操作。同时做试剂空白。1.4结果计算式中：X样品中亚硝酸盐的含量，mg/k

6、g；m1样品的质量，g； m2测定用样液中亚硝酸盐的质量，卩g;Vi样品处理液的总体积，ml；V2测定用样液体积，ml o结果以算术平均值的二位有效数字表述亚硝隈钠童/ k e0.Q50.1亚硝酸钠含虽的栋准曲Y = 20.81X 0.016RJ = 0.990亚硝醱讷旦汕总线性亚硝醸铀量/闵O13sWi样工HI M-g/ml.XjiNOj1)0-3 nfl-20(l+MCL 40“a栢岂J业議踌由慢中卑廿2.03.04.05Pfl/1f/r0.05OfD5131.0013L+00l+wL+O01.0-01.00SJ3-5min0.500.500.500.FOOJ 00.00.00.50加水Z

7、E到康，混习赫咼13I1UUU-D24V.U4SV. Q77U.1Q20.11-10.U4S1.5说明及注意事项硫酸锌溶液作为蛋白质沉淀剂使用，也可用亚铁氰化钾和乙酸锌的混合 溶液，利用产生的亚铁氰化锌与蛋白质共沉淀；实验中使用重蒸水可以减少试 验误差。2硝酸盐的测定2.1原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，将样品提取液通过镉柱，使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子。在酸性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料，经比色测得亚硝酸盐总量，从还 原前后亚硝酸盐量即可求得硝酸盐的含量。2.2仪器和试剂2.2.1仪器(1)镉柱a.海绵状镉粉的制备：投入足够的锌皮或锌棒于

8、500ml200g/L的硫酸镉溶液中，经34h,当溶液中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出 残余锌皮，使镉沉底，倾去上层清液，以蒸馏水用倾斜法洗涤，然后移入组织 捣碎机中，加500ml水。捣碎约2s，用水将金属细粒洗至标准筛上，取 2040 目之间的部分。置试剂瓶中，用水封盖保存，备用。b.镉柱装填：如图8 3所示。用蒸馏水装满镉柱玻璃管，并装入2cm高的玻璃棉作垫。将玻璃棉压向柱底，并将其中所包含的空气全部排出，在轻轻敲 击下加入海绵状镉至810cm高，上面用1cm高的玻璃棉覆盖，上置一个储液 漏斗，末端穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接。图83镉柱装置示意图如无上述镉柱玻璃管，也可用2

9、5ml酸式滴定管代用。Tllto25ml盐酸(0.1mol/L)洗涤，再以蒸馏水洗 2当nmn每次封盖随时都要保持水sa面在镉层之上m得使镉层夹有气泡。镉柱每次使用完毕后，应先以25ml盐酸(0.1mol/L)洗涤，再以水洗2次，每次25ml，最后用水覆盖镉柱2.2.2试剂 氨缓冲溶液(pH9.69.7):量取20ml盐酸加50ml蒸馏水，混匀后加50ml氨水，用水定容至1 000ml。 稀氨缓冲溶液:取 50ml 氨缓冲溶液，用水定容至 500ml。 对氨基苯磺酸溶液 (4g/L) 。 盐酸萘乙二胺溶液 (2g/L) 。 盐酸溶液 (0.1mol/L) :吸取 8.4ml 盐酸，用水稀释至

10、1 000ml。 硝酸钠标准储备液：准确称取 0.123 2g硝酸钠(已于110120C干 燥至恒重，相当于0.1000g亚硝酸钠)，以重蒸水溶解，移于500ml容量瓶中并 定容。此液浓度为200pg/ml亚硝酸钠。 硝酸钠标准使用液：临用时吸取标准液2.50ml置于100ml容量瓶中，加水定容。此液浓度为5 pmg/ml亚硝酸钠。 亚硝酸钠标准使用液同亚硝酸盐的测定。2.3 操作步骤2.3.1 样品的处理 。同亚硝酸盐测定。2.3.2 镉柱还原效率的测定 先以 25ml 稀氨缓冲溶液冲洗镉柱，流速控制在35ml/min( 以滴定管代替的，可控制在 2 3ml/min) 。 吸取 20ml 硝

11、酸钠标准使用液，加入 5ml 稀氨缓冲溶液，混匀，注入 储液漏斗，使流经镉柱还原，以原烧杯收集流出液，当储液中溶液流完后，再加 5ml 水置换柱内留存溶液。将全部收集液如前经镉柱再还原一次，第二次流 出液收集于100ml容量瓶中，再用20ml水洗涤镉柱，共洗涤3次，洗涤液收集 于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。 吸取10.00ml还原后的标准液（相当于10mg亚硝酸钠）于50ml比色管中，加人2.0ml对氨基苯磺酸溶液（4g/L），混匀，静置35min,各加入1.0ml 盐酸萘乙二胺溶液（2g/L），加水至刻度，混匀，静置 15min,用2cm比色杯， 于538nm处测定吸光度并绘制标准曲线。

12、根据标准曲线计算测得结果。还原效 率大于98%为符合要求。式中：X还原效率，;A测得亚硝酸盐的含量，卩g;10 测定用溶液相当于亚硝酸盐的含量，卩g。2.3.3样品中亚硝酸盐总量测定 样液还原：吸取20ml样品处理液于50ml烧杯中，加5ml氨缓冲溶 液，混匀后注入储液漏斗中，使流经镉柱还原，以下按镉柱还原效率测定操作 进行，收集还原后的样液于100ml容量瓶中并定容。 吸取1020ml还原后的样液于50ml比色管中，以下按镉柱还原效率 测定操作进行，测得吸光度，从标准曲线上查出亚硝酸盐量。2.3.4亚硝酸盐测定吸取40ml样品处理液于50ml比色管中，按亚硝酸测定操作进行，测定吸 光度，从标准曲线上查出亚硝酸盐含量。2.4结果计算式中：X硝酸盐含量，