多肽氨基酸知识

1、(一) 基本氨基酸 组成蛋白质得20种氨基酸称为基本氨基酸。它们中除脯氨酸外都就是*氨基酸，即在a-碳原 子上有一个氨基。基本氨基酸都符合通式，都有单字母与三字母缩写符号。 按照氨基酸得侧链结构，可分为三类:脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸与杂环氨基酸。 1、脂肪族氨基酸共15种。 侧链只就是炷链:Gly, Ala, Vai. Leu. lie后三种带有支链,人体不能合成，就是必需氨基酸。 侧链含有羟基:Scr, Thr许多蛋白酶得活性中心含有线氨酸，它还在蛋白质与糖类及磷酸得结 合中起重要作用。 侧链含硫原子:Cys, Met两个半胱氨酸可通过形成二硫键结合成一个胱氨酸。二硫键对维持蛋白质得髙级结

2、构有 重要意义。半胱氨酸也经常出现在蛋白质得活性中心里。甲硫氨酸得硫原子有时参与形成配 位键。甲硫氨酸可作为通用甲基供体，参与多种分子得甲基化反应。 侧链含有竣基:Asp(D), Glu(E) 侧链含酰胺基:Asn(N). Gln(Q) 侧链显碱性:Arg(R), Lys(K) 2、芳香族氨基酸包括苯丙氨酸(Phe.F)与酪氨酸(Tyr.Y)两种。酪氨酸就是合成甲状腺素得原 料。 3、杂环氨基酸 包括色氨酸(Trp.W)、组氨酸(His)与脯氨酸(Pro)三种。其中得色氨酸与芳香族氨基酸都含苯 环,都有紫外吸收(280nm)o所以可通过测量蛋白质得紫外吸收来测立蛋白质得含量。组氨酸 也就是碱性

3、氨基酸，但碱性较弱，在生理条件下就是否带电与周用内环境有关。它在活性中心 常起传递电荷得作用。组氨酸能与铁等金属离子配位。脯氨酸就是唯一得仲氨基酸，就是a- 螺旋得破坏者。 B就是指Asx.R卩Asp或Asn:Z就是指Glx,R卩Glu或Gin。 基本氨基酸也可按侧链极性分类： 非极性氨基酸:Ala, Vai. Leu. lie, Met, Phe. Trp. Pro 共八种 极性不带电荷:Gly, Ser. Thr, Cys, Asn. Gin, Tyr 共七种 带正电荷:Arg, Lys, His 带负电荷:Asp, Glu (二) 不常见得蛋白质氨基酸 某些蛋白质中含有一些不常见得氨基酸

4、,它们就是基本氨基酸在蛋白质合成以后经疑化、拨 化、甲基化等修饰衍生而来得。也叫稀有氨基酸或特殊氨基酸。如4-疑脯氨酸、5-疑赖氨酸、 锁链素等。其中羟脯氨酸与疑赖氨酸在胶原与弹性蛋白中含星较多。在甲状腺素中还有3.5- 二碘酪氨酸。 (三) 非蛋白质氨基酸 自然界中还有150多种不参与构成蛋白质得氨基酸。它们大多就是基本氨基酸得衍生物，也 有一些就是D-氨基酸或队丫、L氨基酸。这些氨基酸中有些就是重要得代谢物前体或中间 产物，如瓜氨酸与乌氨酸就是合成精氨酸得中间产物0-丙氨酸就是遍多酸(泛酸，辅酶A前体) 得前体，丫-氨基丁酸就是传递神经冲动得化学介质。 二、氨基酸得性质 (一) 物理性质

5、*氨基酸都就是白色晶体，每种氨基酸都有特殊得结晶形状，可以用来鉴别怨种氨基酸。除胱 氨酸与酪氨酸外,都能溶于水中。脯氨酸与疑脯氨酸还能溶于乙醇或乙MI中。 除甘氨酸外.a-氨基酸都有旋光性.*碳原子具有手性。苏氨酸与异亮氨酸有两个手性碳原子。 从蛋白质水解得到得氨基酸都就是L-型。但在生物体内特别就是细菌中.D-氨基酸也存在, 如细菌得细胞壁与某些抗菌素中都含有D-氨基酸。 三个带苯环得氨基酸有紫外吸收,F；257iini.S=200; Y:275nm.e=1400; W：280nn“=5600。通常蛋白质得紫外吸收主要就是后两个氨基酸决左得,一般在280nm 氨基酸分子中既含有氨基又含有拨基

6、在水溶液中以偶极离子得形式存在。所以氨基酸晶体 就是离子晶体，熔点在20(TC以上。氨基酸就是两性电解质，各个解离基得表观解离常数按英 酸性强度递降得顺序，分别以Kit K2,来表示。当氨基酸分子所带得净电荷为零时得pH称为 氨基酸得等电点(pl)。等电点得值就是它在等电点前后得两个p值得算术平均值。 氨基酸完全质子化时可瞧作多元弱酸，各解离基团得表观解离常数按酸性减弱得顺序，以 pKr、pK2 、pK3,表示。氨基酸可作为缓冲溶液，在p处得缓冲能力最强.pl处得缓冲能力最弱。 氨基酸得滴定曲线如图。 (二) 化学性质 1、氨基得反应 (1) 酰化 氨基可与酰化试剂，如酰氯或酸酹在碱性溶液中反

7、应，生成酰胺。该反应在多肽合成中可用于 保护氨基。 (2) 与亚硝酸作用 氨基酸在室温下与亚硝酸反应，脱氨，生成疑基竣酸与氮气。因为伯胺都有这个反应，所以赖氨 酸得侧链氨基也能反应,但速度较慢。常用于蛋白质得化学修饰、水解程度测定及氨基酸得 定量。 (3) 与醛反应 氨基酸得a-氨基能与醛类物质反应，生成西佛碱-C=N-0西佛碱就是氨基酸作为底物得某些酶 促反应得中间物。赖氨酸得侧链氨基也能反应。氨基还可以与甲醛反应，生成轻甲基化合物。 由于氨基酸在溶液中以偶极离子形式存在，所以不能用酸碱滴定测定含虽。与甲醛反应后，氨 基酸不再就是偶极离子，其滴左终点可用一般得酸碱指示剂指示，因而可以滴定，这

8、叫甲醛滴 定法,可用于测定氨基酸。 与异硫獄酸苯酯(PITC)反应 a-氨基与PITC在弱碱性条件下形成相应得苯氨基硫甲酰衍生物(PTC-AA),后者在硝基甲烷 中与酸作用发生环化，生成相应得苯乙内酰硫姝衍生物(PTH-AA)O这些衍生物就是无色得, 可用层析法加以分离鉴左。这个反应首先为Edman用来鉴龙蛋白质得N-末端氨基酸.在蛋白 质得氨基酸顺序分析方面占有重要地位。 (5) 磺酰化 氨基酸与5-(二甲胺基)茶-1-磺酰氯(DNS-C1)反应，生成DNS-氨基酸。产物在酸性条件下 (6NHCl)100C也不破坏，因此可用于氨基酸末端分析。DNS-氨基酸有强荧光，激发波长在 360nm左右

9、，比较灵敏，可用于微量分析。 (6) 与DNFB反应 氨基酸勺2.4二硝基氟苯(DNFB)在弱碱性溶液中作用生成二硝基苯基氨基酸(DNP氨基酸)。 这一反应就是左量转变得，产物黄色，可经受酸性100C髙温。该反应曾被英国得Sanger用来 测泄胰岛素得氨基酸顺序，也叫桑格尔试剂，现在应用于蛋白质N-末端测泄。 (7) 转氨反应 在转氨酶得催化下，氨基酸可脱去氨基，变成相应得酮酸。 2、竣基得反应 按基可与碱作用生成盐，其中重金属盐不溶于水。拨基可与醇生成酯，此反应常用于多肽合成 中得竣基保护。某些酯有活化作用，可增加竣基活性，如对硝基苯酯。将氨基保护以后,可与二 氯亚飒或五氯化磷作用生成酰氯,

10、在多肽合成中用于活化竣基。在脱竣酶得催化下，可脱去竣 基，形成伯胺。 3苗三酮反应 氨基酸与苗三酮在微酸性溶液中加热,最后生成蓝色物质。而脯氨酸生成黄色化合物。根据 这个反应可通过二氧化碳测定氨基酸含量。 4、侧链得反应 幺幺氨酸、苏氨酸含疑基，能形成酯或昔。 半胱氨酸侧链兢基反应性高： (1)二硫键(disulfide bond) 半胱氨酸在碱性溶液中容易被氧化形成二硫键,生成胱氨酸。胱氨酸中得二硫键在形成蛋白 质得构象上起很大得作用。氧化剂与还原剂都可以打开二硫键。在研究蛋白质结构时，氧化 剂过甲酸可以定量地拆开二硫键，生成相应得磺酸。还原剂如猛基乙醇、既基乙酸也能拆开 二硫键，生成相应得

11、兢基化合物。由于半胱氨酸中得兢基很不稳立.极易氧化，因此利用还原剂 拆开二硫键时，往往进一步用碘乙酰胺、氯化节、N-乙基丁烯二亚酰胺与对氯汞苯甲酸等试 剂与籬基作用，把它保护起来，防止它重新氧化。 烷化 半胱氨酸可与烷基试剂，如碘乙酸、碘乙酰胺等发生烷化反应。 半胱氨酸与丫丙咙反应，生成带正电得侧链，称为S-氨乙基半胱氨酸(AECys)。 (3)与重金属反应 极微量得某些重金属离子，如Ag+、Hg2+.就能与猛基反应，生成硫醇盐，导致含猛基得酶失活。 5、以下反应常用于氨基酸得检验： 1酪氨酸、组氨酸能与重氮化合物反应(Pauly反应)，可用于左性、泄屋测左。组氨酸生成棕红 色得化合物，酪氨酸

12、为桔黄色。 1精氨酸在氢氧化钠中与1-荼酚与次浪酸钠反应，生成深红色，称为坂口反应。用于肌基得鉴 定。 1酪氨酸与硝酸、亚硝酸、硝酸汞与业硝酸汞反应,生成白色沉淀，加热后变红，称为米伦反应, 就是鉴定酚基得特性反应。 1色氨酸中加入乙醛酸后再缓慢加入浓硫酸，在界面会出现紫色环,用于鉴泄眄I唏基。 在蛋白质中，有些侧链基团被包裹在蛋白质内部,因而反应很慢甚至不反应。 三、色谱与氨基酸得分析分离 1、色谱(chromatography)得发展史 最早得层析实验就是俄国植物学家UBeT在1903年用碳酸钙分离叶绿素，属于吸附层析。40 年代岀现了分配层析,50年代出现了气相色谱,60年代岀现HPLC

13、.80年代出现了超临界层 析,90年代出现得超微量HPLC可分离ng级得样品。 2、色谱得分类： 按流动相可分为气相、液相、超临界色谱等； 按介质可分为纸层析、薄层层析、柱层析等； 按分离机制可分为吸附层析、分配层析、分子筛层析等 3、色谱得应用 可用于分离、制备、纯度鉴定等。 定性可通过保留值、内标、标准曲线等方法，定量一般用标准曲线法。 氨基酸得分析分离就是测左蛋白质结构得基础。在分配层析与离子交换层析法开始应用于氨 基酸成分分析之后,蛋白质结构得研究才取得了显著得成就。现在这些方法已自动化。 氨基酸从强酸型离子交换柱得洗脱顺序如下： Asp.Thr.SeEGlu.Pro,Gly,Ala,

14、Cys,VaI,MetJle.LeikTyr.Phe.Lys.HisXNH3）,Arg 第三节蛋白质得一级结构 蛋白质就是生物大分子，具有明显得结构层次性，由低层到髙层可分为一级结构、二级结构、 三级结构与四级结构。 一、肽键与肽 一个氨基酸得竣基与另一个氨基酸得氨基缩水形成得共价键，称为肽键。在蛋白质分子中，氨 基酸借肽键连接起来，形成肽链。 最简单得肽由两个氨基酸组成，称为二肽。含有三、四、五个氨基酸得肽分别称为三肽、四 肽、五肽等。肽链中得氨基酸由于形成肽键时脱水，已不就是完整得氨基酸，所以称为残基。 肽得命名就是根拯组成肽得氨基酸残基来确左得。一般从肽得氨基端开始，称为某氨基酰某 氨基

15、酰、某氨基酸。肽得书写也就是从氨基端开始。 肽键象酰胺键一样，由于键内原子处于共振状态而表现岀较髙得稳疋性。在肽键中C-N单 键具有约40%双键性质，而C=O双键具有40%单键性质。这样就产生两个重要结果:（1）肽键 得亚氨基在pH 0J4得范囤内没有明显得解离与质子化得倾向;（2）肽键中得C-N单键不能自由旋转,使蛋白 质能折叠成各种三维构象。 除了蛋白质部分水解可以产生各种简单得多肽以外，自然界中还有长短不等得小肽，它们具有 特殊得生理功能。 动植物细胞中含有一种三肽，称为谷胱甘肽，即谷氨酰半胱氨酰甘氨酸。因其含有乾基，故常 以GSH来表示。它在体内得氧化还原过程中起重要作用。脑啡肽就是天

16、然止痛剂。肌肉中 得鹅肌肽就是一个二肽，即卜丙氨酰组氨酸。肌肽可作为肌肉中得缓冲剂，缓冲肌肉产生得乳 酸对pH得影响。一种抗菌素叫做短杆菌酪肽，由12种氨基酸组成，其中有几种就是D-氨基酸。 这些天然肽中得非蛋白质氨基酸可以使其免遭蛋白酶水解。许多激素也就是多肽，如催产素、 加压素、舒缓激肽等。 二、肽得理化性质 小肽得理化性质与氨基酸类似。许多小肽已经结晶。晶体得熔点很髙，说明就是离子晶体，在 水溶液中以偶极离子存在。肽键得亚氨基不解离，所以肽得酸碱性取决于肽得末端氨基、竣 基与侧链上得基团。在长肽或蛋白质中，可解离得基团主要就是侧链上得。肽中末端竣基得 pK比自由氨基酸得稍大，而末端氨基得

17、pK则稍小。侧链基团变化不大。 肽得滴泄曲线与氨基酸得很相似。肽得等电点也可以根据它得pK值确定。 一般小肽得旋光度等于各个氨基酸旋光度得总与，但较大得肽或蛋白质得旋光度不等于英组 成氨基酸得旋光度得简单加与。 肽得化学性质与氨基酸一样，但有一些特殊得反应，如双缩關反应。一般含有两个或两个以上 肽键得化合物都能与CuSO4碱性溶液发生双缩腮反应而生成紫红色或蓝紫色得复合物。利 用这个反应可以测定蛋白质得含量。 三、一级结构得测定 （一）一级结构 蛋白质得一级结构就是指肽链得氨基酸组成及其排列顺序。氨基酸序列就是蛋白质分子结构 得基础，它决定蛋白质得高级结构。一级结构可用氨基酸得三字母符号或单字

18、母符号表示，从 N-末端向C-末端书写。采用三字母符号时,氨基酸之间用连字符（一）隔开。 （二）测定步骤 测定蛋白质得一级结构，要求样品必须就是均一得（纯度大于97%）而且就是已知分子量得蛋 白质。一般得测左步骤就是： 1、通过末端分析确泄蛋白质分子由几条肽链构成。 2、将每条肽链分开,并分离提纯。 3肽链得一部分样品进行完全水解,测左其氨基酸组成与比例。 4、肽链得另一部分样品进行N末端与C末端得鉴泄。 5、拆开肽链内部得二硫键。 6、肽链用酶促或化学得部分水解方法降解成一套大小不等得肽段，并将各个肽段分离出来。 7、测進每个肽段得氨基酸顺序。 8、从第二步得到得肽链样品再用另一种部分水解方

19、法水解成另一套肽段，苴断裂点与第五步 不同。分离肽段并测序。比较两套肽段得氨基酸顺序，根据英重叠部分拼凑出整个肽链得氨 基酸顺序。 9、测左原来得多肽链中二硫键与酰胺基得位置。 (三) 常用方法 1、末端分析 (DN末端 蛋白质得末端氨基与2.4-二硝基氟苯(DNFB)在弱碱性溶液中作用生成二硝基苯基蛋白质 (DNP-蛋白质)。产物黄色，可经受酸性10(TC髙温。水解时，肽链断开，但DNP基并不脱落。 DNP-氨基酸能溶于有机溶剂(如乙MI)中，这样可与其她氨基酸与s-DNP赖氨酸分开。再经双 向滤纸层析或柱层析，可以鉴泄黄色得DNP氨基酸。 丹磺酰氯法就是更灵敏得方法。蛋白质得末端氨基与5-

20、(二甲胺基)蔡亠磺酰氯(DNS-C1)反应, 生成DNS-蛋白质。DNS-氨基酸有强荧光，激发波长在360nm左右，比DNFB法灵敏100倍。 目前应用最广泛得就是异硫鼠酸苯酯(PITC)法。末端氨基与PITC任弱碱性条件下形成相应 得苯氨基硫甲酰衍生物，后者在硝基甲烷中与酸作用发生环化，生成相应得苯乙内酰硫腮衍生 物而从肽链上掉下来。产物可用气-液色谱法进行鉴泄。这个方法最大得优点就是剩下得肽 链仍就是完整得,可依照此法重复测定新生得N末端氨基酸。现在已经有全自动得氨基酸顺 序分析仪，可测左含20个以上氨基酸得肽段得氨基酸顺序。缺点就是不如丹磺酰氯灵敏，可与 之结合使用。 N末端氨基酸也可用

21、酶学方法即氨肽酶法测定。 (2)C末端 a) C末端氨基酸可用硼氢化锂还原生成相应得a氨基醇。肽链水解后，再用层析法鉴泄。有 断裂干扰。 b) 列一个方法就是脐解法。多肽与耕在无水条件下加热，可以断裂所有得肽键，除C末端氨基酸 外,其她氨基酸都转变为相应得酰腓化合物。月井解下来得C末端氨基酸可用纸层析鉴泄。精 氨酸会变成鸟氨酸，半胱氨酸、天冬酰胺与谷氨酰胺被破坏。 b) 也可用竣肽酶法鉴定。将蛋白质在pH 8、0, 30C与竣肽酶一起保温，按一上时间间隔取样,用纸层析测定释放出来得氨基酸，根据氨基酸 得量与时间得关系，就可以知道C末端氨基酸得排列顺序。竣肽酶A水解除精氨酸、赖氨酸 与肺氨酸外所

22、有肽键，竣肽酶B水解精氨酸与赖氨酸。 2、二硫键得拆开与肽链得分离 一般情况下，蛋白质分子中肽链得数目应等于N末端氨基酸残基得数目,可根据末端分析来确 定一种蛋白质由几条肽链构成。必须设法把这些肽链分离开来,然后测定每条肽链得氨基酸 顺序。如果这些肽链之间不就是共价交联得,可用酸、碱、高浓度得盐或苴她变性剂处理蛋 白质,耙肽链分开。如果肽链之间以二硫键交联，或肽链中含有链内二硫键，则必须用氧化或还 原得方法将二硫键拆开。最普遍得方法就是用过量得藐基乙醇处理，然后用碘乙酸保护生成 得半胱氨酸得藐基，防止重新氧化。二硫键拆开后形成得个别肽链,可用纸层析、离子交换柱 层析、电泳等方法进行分离。 3、

23、肽链得完全水解与氨基酸组成得测定。 在测左氨基酸顺序之前，需要知道多肽链得氨基酸组成与比例。一般用酸水解，得到氨基酸混 合物,再分离测定氨基酸目前用氨基酸自动分析仪,24小时即可完成。 蛋白质得氨基酸组成，一般用每分子蛋白质中所含得氨基酸分子数表示。不同种类得蛋白质, 其氨基酸组成相差很大。 4、肽链得部分水解与肽段得分离 当肽链得氨基酸组成及N末端与C末端已知后,随后得步骤就是肽链得部分水解。这就是测 序工作得关键步骤。这一步通常用专一性很强得蛋白酶来完成。 最常用得就是胰蛋白酶(trypsin),它专门水解赖氨酸与精氨酸得竣基形成得肽键，所以生成得 肽段之一得C末端就是赖氨酸或精氨酸。用丫

24、丙咙处理，可增加酶切位点(半胱氨酸);用马来 酸酊(顺丁烯二酸ST)保护赖氨酸得侧链氨基，或用12环己二酮修饰精氨酸得肌基，可减少酶 切位点。 经常使用得还有糜蛋白酶，水解苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸等疏水残基得竣基形成得肽键。 其她疏水残基反应较慢。 用澳化氛处理，可断裂甲硫氨酸得拔基形成得肽键。水解后甲硫氨酸残基转变为C末端高丝 氨酸残基。以上三种方法经常使用。 胃蛋白酶与嗜热菌蛋白酶。前者水解疏水残基之间得肽键，后者水解疏水残基得氨基形成得 肽键。 金葡菌蛋白酶，又称谷氨酸蛋白酶或V8蛋白酶，水解谷氨酸与天冬氨酸得竣基形成得肽键，但 受缓冲液影响。在醋酸缓冲液中只水解谷氨酸，在磷酸缓冲液中还

25、可水解天冬氨酸。 梭状芽抱杆菌蛋白酶，水解精氨酸竣基形成得肽键,又称精氨酸蛋白酶。耐变性剂,可经受6M 尿素2小时。可用于水解不易溶解得蛋白。 凝血酶，水解Arg-Gly肽键。 疑胺可水解Asn-Gly,但Asn-Leu与Asn-Ala也能部分裂解。 以上方法中，酶不能水解脯氨酸参与形成得肽键。 多肽部分水解后，降解成长短不一得小肽段，可用层析或电泳加以分离提纯。经常用双向层析 或电泳分离，再用苗三酮显色,所得得图谱称为肽指纹谱。 5、多肽链中氨基酸顺序得测定 从多肽链中部分水解得到得肽段可用化学法或酶法测序.然后比较用不同方法获得得两套肽 段得氨基酸顺序，根据它们彼此重叠得部分，确左每个肽段

26、得适当位巻，拼凑出整个多肽链得 氨基酸顺序。 6、二硫键位置得确定 一般用蛋白酶水解带有二硫键得蛋白质,从部分水解产物中分离出含二硫键得肽段，再拆开二 硫键，将两个肽段分别测序,再与整个多肽链比较，即可确左二硫键得位豊。常用胃蛋白酶，因其 专一性低,生成得肽段小，容易分离与鉴沱，而且可在酸性条件下作用(pH2),此时二硫键稳左。 肽段得分离可用对角线电泳，将混合物点到滤纸得中央，在pH6、5进行第一次电泳，然后用过 甲酸蒸汽断裂二硫键，使含二硫键得肽段变成一对含半胱氨磺酸得肽段。将滤纸旋转90度后 在相同条件下进行第二次电泳，多数肽段迁移率不变,处于对角线上，而含半胱氨磺酸得肽段 因负电荷增加

27、而偏离对角线。用苗三酮显色，分离，测序，与多肽链比较，即可确定二硫键位置。 四、多肽合成 多肽得人工合成有两种类型，一种就是由不同氨基酸按照一左顺序排列得控制合成，另一种就 是由一种或两种氨基酸聚合或共聚合。控制合成得一个困难就是进行接肽反应所需得试剂, 能同时与英她官能团反应。因此在接肽以前必须首先将这些基团加以封闭或保护，肽键形成 后再除去保护基。这样每连接一个氨基酸残基都要经过几个步骤，要得到较长得肽链就必须 每步都有较髙得产率。如果每一步反应产率都就是90%,那么30次反应后总产率只有4、24%。 保护基必须在接肽时起保护作用，在接肽后容易除去，又不引尼肽键断裂。最常用得氨基保护 基Y

28、就是节氧甲酰基，可用催化加氢或用金属钠在液氨中处理除去。其她还有三苯甲基、叔 丁氧甲酰基等，可用稀盐酸或乙酸在室温下除去。 按基保护基Z通常用烷基,如乙基，可在室温下皂化除去。如用节基,可用催化加氢除去。 肽键不能自发形成,常用缩合剂促进肽键形成。接肽用得缩合剂最有效得就是N.2-二环己基 碳二亚胺（DC CI）. DCCI从两个氨基酸分子中夺取一分子水，自身变为不溶得N,Nt二环己基腺，从反应液中 沉淀出来,可过滤除去。接肽反应除用缩合剂以外,还可用分别活化参加形成肽键得竣基与氨 基得方法。竣基活化可用叠氮化物法与活化酯法（对硝基苯酯）等;氨基活化一般不需特殊手段, 通常在接肽时加入有机碱，

29、如三乙胺,保证姐基在自由状态即可。 近年来固相多肽合成迅速发展。在固相合成中，肽链得逐步延长就是在不溶得聚苯乙烯树脂 小圆珠上进行得。合成多肽得竣基端先与氯甲基聚苯乙烯树脂反应，形成节酯。第二个氨基 酸得氨基用叔丁氧甲酰基保护后，以DCCI为缩合剂，接在第一个氨基酸得氨基上。重复这个 方法,可使肽链按一泄顺序延长。最后把树脂悬浮在无水三氟乙酸中，通入干燥HBr.使多肽与 树脂分离，同时除去保护基。整个合成过程现在已经可以在自动化固相多肽合成仪上进行。 平均合成每个肽键只需三小时。此法可用于医药工业。人工合成得催产素没有混杂得加压素, 比提取得天然药品好。已经成功合成含124个残基得蛋白。 第四

30、节蛋白质得高级结构 蛋白质得多肽链并不就是线形伸展得,而就是按一立方式折叠盘绕成特有得空间结构。蛋白 质得三维构象，也称空间结构或髙级结构，就是指蛋白质分子中原子与基团在三维空间上得排 列、分布及肽链得走向。高级结构就是蛋白质表现其生物功能或活性所必须得，包括二级、 三级与四级结构。Primary stnicture. secondary, tertiary. quaternar）r stnicture 一、有关概念 1、构型 configration 与构象 conformation 构型指立体异构体中取代原子或基团在空间得取向,构型得改变必须通过共价键得断裂。构 象就是指这些取代基团当单键

31、旋转时可能形成得不同得立体结构，构象得改变不涉及共价键 得改变。 2、二而角 因为肽键不能自由旋转，所以肽键得四个原子与与之相连得两个a碳原子共处一个平面，称肽 平面。肽平而内得C=O与N-H呈反式排列，各原子间得键长与键角都就是固宦得、肽链可 瞧作由一系列刚性得肽平而通过a碳原子连接起来得长链，主链得构彖就就是由肽平面之间 得角度决定得。主链上只有a碳原子连接得两个键就是单键,可自由旋转。绕Ca-Nl旋转 得角称，而绕Ca-C2旋转得角称To这两个角称为二而角。规定当旋转键两侧得肽链成 顺式时为0度。取值范闱就是正负180度，当二而角都就是180度时肽链完全伸展。由于空 间位阻，实际得取值范

32、囤就是很有限得。 二、二级结构 （一）二级结构就是肽链得空间走向 蛋白质得二级结构就是指肽链主链得空间定向（折叠与盘绕方式），就是有规则重复得构象。肽 链主链具有重复结构，其中氨基就是氢键供体,按基就是氢键受体。通过形成链内或链间氢键 可以使肽链卷曲折叠形成各种二级结构单元。复杂得蛋白质分子结构,就由这些比较简单得 二级结构单元进一步组合而成。 (二)肽链卷曲折叠形成四种二级结构单元 1、a 螺旋(a-helix) a螺旋模型就是Pauling与Corey等研究a-角蛋白时于1951年提出得。角蛋白就是动物得不 溶性纤维状蛋白，就是由动物得表皮衍生而来得。它包括皮肤得表皮以及毛发、鳞、羽、甲、

33、 蹄、角、丝等。角蛋白可分为两类，一类就是a角蛋白，胱氨酸含量丰富,如角、甲、蹄得蛋白 胱氨酸含量高达22%;另一类就是卩角蛋白，不含胱氨酸，但甘氨酸、丙氨酸与线氨酸得含量很 高，蚕丝丝心蛋白就属于这一类。a角蛋白，如头发，眾壺于湿热环境中几乎可以伸长一倍，冷却 干燥后又收缩到原来长度。卩角蛋白则无此变化。 a角蛋白得X射线衍射图案极其相似，沿长轴方向都有一个大周期结构或重复单位，其长度为 5 5、5埃。Pauling等考虑到肽平而对多肽链构象得限制作用，设计了多肽链折叠得各种可 能模型，发现其中一种a螺旋模型能很好地说明a角蛋白得X射线衍射图案中得5 5、5埃 重复单位。在这个模型中，每隔3、6个氨基酸残基螺旋上升一圈，相当于向上平移5、4埃。 螺旋得直径就是11埃。螺旋上升时，每个氨基酸残基沿轴旋转100。,向上平移1、5埃,比完全 伸展得构象压缩2、4倍。这与衍射图案中得小周期完全一致。其二面角