免疫自动化仪器分析

1、 免疫检验自动化仪器分免疫检验自动化仪器分 析析 第一节第一节 自动化免疫浊度分析系统自动化免疫浊度分析系统 一、免疫透射比浊法一、免疫透射比浊法 二、免疫胶乳比浊法二、免疫胶乳比浊法 三、免疫散射比浊法三、免疫散射比浊法 四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用 第四节第四节 自动化酶联免疫分析系统自动化酶联免疫分析系统 第二节第二节 自动化发光免疫分析系统自动化发光免疫分析系统 一、吖啶酯标记化学发光免疫分析仪一、吖啶酯标记化学发光免疫分析仪 二、酶联发光免疫分析仪二、酶联发光免疫分析仪 三、三、 电化学发光免疫分析仪电化学发光免疫分析仪 四、在临床免疫检测

2、中的应用四、在临床免疫检测中的应用 第三节第三节 自动化荧光免疫分析系统自动化荧光免疫分析系统 一、时间分辨荧光免疫分析仪一、时间分辨荧光免疫分析仪 二、荧光偏振免疫分析仪二、荧光偏振免疫分析仪 思考题思考题 小结小结 免疫检验自动化免疫检验自动化 （automation of immunoassays) 是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、混合、是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、混合、 温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报 告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，自动化告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，自动化 进行。进行

3、。 第一节第一节 自动化免疫浊度分析系统自动化免疫浊度分析系统 免疫浊度分析的基本原理是：抗原、抗体在特定的电解质溶免疫浊度分析的基本原理是：抗原、抗体在特定的电解质溶 液中反应，形成小分子免疫复合物（液中反应，形成小分子免疫复合物（19s19s19s），使反应），使反应 液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复液出现浊度。在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复 合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之增大，即 待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。 一定波长的入射光线通过抗原抗体反

4、应后的溶液一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶液 时，被其中的免疫复合物微粒吸收、反射和折射而时，被其中的免疫复合物微粒吸收、反射和折射而 减弱，在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正减弱，在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正 相关，而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和相关，而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和 抗体的量呈函数关系。与已知浓度的抗原标准品比抗体的量呈函数关系。与已知浓度的抗原标准品比 较，可确定标本中抗原含量。较，可确定标本中抗原含量。 一、免疫透射比浊法一、免疫透射比浊法 （一）（一）原理：原理： 1. 1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。将待检标本和抗原参考品作

5、适当稀释。 （二）仪器工作过程（二）仪器工作过程 2. 2.将待测标本和标准抗原溶液（将待测标本和标准抗原溶液（5 5个浓度抗原标准个浓度抗原标准 品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗 原抗体反应完成后，在原抗体反应完成后，在340nm340nm处测定各管吸光度。处测定各管吸光度。 3.按按log-logit转换或转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线方程进行曲线 拟合，制备剂量拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算反应曲线，由计算机处理，计算 出抗原浓度。出抗原浓度。 （三）方法评价（三）方法评价 优点优点: : 灵敏度高，稳

6、定性好，操作简便，结果准确灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确 不足不足: : 抗体用量较大；抗体用量较大； 溶液中存在的抗原抗体复合物分子应足够大溶液中存在的抗原抗体复合物分子应足够大 透射比浊测定在抗原抗体反应的第二阶段，检透射比浊测定在抗原抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。 用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为（一般为0.2 m），），在在 遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗

7、粒凝聚粒凝聚 ，使，使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示：透射光和散射光即出现显著变化。如图所示：a a为单个为单个 胶乳颗粒不阻碍光线透过，胶乳颗粒不阻碍光线透过，b b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒 使透射光减弱或散射光增强。使透射光减弱或散射光增强。 二、免疫胶乳比浊法二、免疫胶乳比浊法 （一）（一）原理：原理： （二）方法评价（二）方法评价 本法敏感度大大高于普通比浊法，可达本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng/l水平，水平， 操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子操作简便，易自动化；血清中的类风湿因子(rf)可可 与与igg fc段结合，使

8、段结合，使igg致敏胶乳颗粒出现非特异致敏胶乳颗粒出现非特异 性凝集，用性凝集，用f(ab)2片段代替片段代替igg既可消除此干扰，既可消除此干扰， 又可克服又可克服igg致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度 自凝或抗体活性降低会严重影响结果。自凝或抗体活性降低会严重影响结果。 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到光 线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成散 射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒射光。悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒 的大小、数量、入射光的波长

9、和强度、测量角度等的大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等 因素密切相关，其公式如下：因素密切相关，其公式如下： 三、免疫散射比浊法三、免疫散射比浊法 ( (一一) ) 原理原理 式式i 中为与入射光成中为与入射光成角处散射光强度；角处散射光强度；和和i0为入为入 射光的波长和强度；射光的波长和强度；dn/dc为校正因子，反映了溶液为校正因子，反映了溶液 折射指数和颗粒浓度的变化；折射指数和颗粒浓度的变化；m为颗粒分子量；为颗粒分子量；c为为 浓度；浓度；n为阿佛加德指数；为阿佛加德指数；为颗粒到检测器的距离；为颗粒到检测器的距离； 为散射光与入射光的夹角（散射夹角）。为散射光与入射光的夹

10、角（散射夹角）。 ii042（dn/dc) 2 mc(1+cos) n24 定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入 待测抗原，此时反应立即开始，在反应的第一阶段，待测抗原，此时反应立即开始，在反应的第一阶段， 溶液中产生的散射光信号波动较大，所获取的信号溶液中产生的散射光信号波动较大，所获取的信号 计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法 是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射光信号是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射光信号 在开始反应在开始反应7.5s2min内的第一次读数，专门在抗内的第一次

11、读数，专门在抗 原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误差降到原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误差降到 最低。最低。 (二二)定时散射比浊法（定时散射比浊法（fixed time nephelometry） 1. 1. 仪器测定技术要点仪器测定技术要点 (1) 抗原抗体预反应阶段抗原抗体预反应阶段 (2) 反应阶段反应阶段 (3) 信号检测信号检测 2. 2. 抗原过量检测抗原过量检测 (1) 抗体适当过量抗体适当过量 (2) 对抗原过量进行阈值限定对抗原过量进行阈值限定 定时散射比浊法测定原理示意图定时散射比浊法测定原理示意图 bn prospec全自动特定蛋白分析仪全自动特定蛋白分析仪

12、速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测 定法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形定法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形 成免疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），成免疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量）， 连续测定各时间复合物形成的速率与其产生的散射连续测定各时间复合物形成的速率与其产生的散射 光信号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法，光信号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法， 每项检测仅每项检测仅12min即可完成。即可完成。 ( (三三) )速率散射比浊法速率散射比浊法（rate nephelometry） 仪器测定技术要点仪

13、器测定技术要点 开启机器，进行定标开启机器，进行定标 反应阶段反应阶段 抗原过量检测抗原过量检测 抗原抗体复合物形成的速率抗原抗体复合物形成的速率 累计时间（累计时间（s s）形成形成icic总量速率总量速率累计时间（累计时间（s s）形成形成icic总量速率总量速率 5 5 8 8 1010 13 13 5 5 1515 25 251212 2020 60 603535 2525 150 1509090 3030 230 2308080 3535 300 300 7070 4040 360360 6060 4545 415 415 5555 5050 450 450 4545 5555 48

14、0480 3030 6060 500500 2020 抗原抗体反应速率的动态变化抗原抗体反应速率的动态变化 immage全自动特定蛋白分析仪全自动特定蛋白分析仪 ( (三三) )方法评价方法评价 散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本 法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密 等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的 准确性。但仪器和试剂价格比较贵准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质对抗体的质 量要求很高。量要求很高。 1.抗原抗体比例抗原抗体比例 2.

15、抗体的质量抗体的质量 3.增浊剂的使用增浊剂的使用 （一）免疫比浊分析的影响因素免疫比浊分析的影响因素 四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用 4.伪浊度伪浊度 5.入射光光源和波长入射光光源和波长 6.结果报告中的计量单位结果报告中的计量单位 7.标准曲线制备与质量控制标准曲线制备与质量控制 （二）临床应用（二）临床应用 免疫比浊分析法主要用于检测免疫球蛋白免疫比浊分析法主要用于检测免疫球蛋白igg、iga、 igm、链、链、链、免疫球蛋白亚类；补体链、免疫球蛋白亚类；补体c3、c4；血；血 浆蛋白如前白蛋白浆蛋白如前白蛋白(pab)、白蛋白、白蛋白(alb

16、)、1-抗胰蛋白抗胰蛋白 酶酶(1-at)、2-微球蛋白微球蛋白(2-mg)、转铁蛋白、转铁蛋白(trf)、 铜蓝蛋白铜蓝蛋白(cer)、结合珠蛋白、结合珠蛋白(hp)、，、，c-反应蛋白反应蛋白 (crp)、载脂蛋白、载脂蛋白apoai、apob、脂蛋白、脂蛋白(a)、类风湿、类风湿 因子因子(rf)、尿微量蛋白系列和某些治疗性药物浓度等。、尿微量蛋白系列和某些治疗性药物浓度等。 第二节自动化学发光免疫分析系统第二节自动化学发光免疫分析系统 自动化发光免疫分析仪主要由样本盘、试剂自动化发光免疫分析仪主要由样本盘、试剂 盘盘(盒盒)、温育反应系统、固相载体分离清洗系统、温育反应系统、固相载体分

17、离清洗系统、 信号检测系统和计算机数据处理、控制系统组信号检测系统和计算机数据处理、控制系统组 成。成。 吖啶酯标记的化学发光免疫分析仪是一种用发光剂直接标吖啶酯标记的化学发光免疫分析仪是一种用发光剂直接标 记抗体或抗原的一类免疫分析法。该仪器利用化学发光技术记抗体或抗原的一类免疫分析法。该仪器利用化学发光技术 和磁性微粒子分离技术，以吖啶酯为化学发光剂，以细小的和磁性微粒子分离技术，以吖啶酯为化学发光剂，以细小的 顺磁性微粒为固相载体。其测定原理与双抗体夹心法、双抗顺磁性微粒为固相载体。其测定原理与双抗体夹心法、双抗 原夹心法和竞争结合法等相同。原夹心法和竞争结合法等相同。 一、吖啶酯标记化

18、学发光免疫分析仪一、吖啶酯标记化学发光免疫分析仪 y y y yy y y y y yy y y y y y y y y y y yy y y yy yy yy y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y 顺磁性微粒示意图顺磁性微粒示意图 磁微粒技磁微粒技术术 磁磁微粒微粒在在 电磁场电磁场中中分离分离 磁磁微微粒粒标记抗体标记抗体 发光发光 y y y 磁微粒磁微粒被测抗原被测抗原+抗体抗体+ 带丫啶带丫啶 酯标记酯标记 物抗体物抗体 y y y y y y y y y y y 冲

19、洗后冲洗后 双抗体夹心法双抗体夹心法 直接化直接化学发学发光的机理光的机理 （1 1） 加入酸性加入酸性h h2 2o o2 2 （ph10） 仪器测定技术要点仪器测定技术要点 抗原抗体结合抗原抗体结合 洗涤、分离洗涤、分离 加入氧化剂发光加入氧化剂发光 信号检测信号检测 吖啶酯标记化学发光免疫测定示意图吖啶酯标记化学发光免疫测定示意图 acsacs：180 se180 se和和acscentauracscentaur化学发光免疫分析仪化学发光免疫分析仪 acs：180 se acs centaur ci8200 i2000sr 酶联发光免疫分析仪是用参与催化某一化学发光或荧光反酶联发光免疫分

20、析仪是用参与催化某一化学发光或荧光反 应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应后，加入底物应的酶来标记抗原或抗体，在抗原抗体反应后，加入底物(发光发光 剂剂)，由酶催化和分解底物发光，通过光信号的强弱来进行被测，由酶催化和分解底物发光，通过光信号的强弱来进行被测 物的定量。物的定量。 常用的标记酶有常用的标记酶有辣根过氧化物酶（辣根过氧化物酶（hrp）和和碱性磷酸酶碱性磷酸酶 (alp)，常用的发光底物有常用的发光底物有鲁米诺、鲁米诺、amppd和和4-mup等。等。 二、酶联发光免疫分析仪二、酶联发光免疫分析仪 该仪器采用辣根过氧化物酶（该仪器采用辣根过氧化物酶（hrp）标记抗标记抗 原或抗体

21、、以塑料锥形小管为固相载体，鲁米原或抗体、以塑料锥形小管为固相载体，鲁米 诺为化学发光剂，还利用增强剂使化学发光强诺为化学发光剂，还利用增强剂使化学发光强 度增加、时间延长。度增加、时间延长。 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析仪辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析仪 鲁米诺是一种还原剂，在碱性溶液中被鲁米诺是一种还原剂，在碱性溶液中被h2o2氧化产生鲁米诺衍生物氧化产生鲁米诺衍生物 （激发态）。它以光量子辐射形式返回基态时，发出微绿色可见光。（激发态）。它以光量子辐射形式返回基态时，发出微绿色可见光。 鲁米诺增强化学发光的原理鲁米诺增强化学发光的原理 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫测定示

22、意图辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫测定示意图 vitros eci全自动增强化学发光酶免分析仪全自动增强化学发光酶免分析仪 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析仪碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析仪 该仪器是以碱性磷酸酶标记抗原或抗体，以该仪器是以碱性磷酸酶标记抗原或抗体，以 顺磁性微粒子为固相载体，用顺磁性微粒子为固相载体，用amppd作为化学发作为化学发 光剂进行测定的自动化仪器。光剂进行测定的自动化仪器。 amppd发光反应原理示意图发光反应原理示意图 抗原抗体结合抗原抗体结合 洗涤、分离洗涤、分离 加入加入amppd发光剂发光剂 信号检测信号检测 仪器测定技术要点仪器测定技术要点 碱性磷酸

23、酶标记的化学发光免疫测定示意图碱性磷酸酶标记的化学发光免疫测定示意图 access全自动酶标记化学发光免疫分析仪全自动酶标记化学发光免疫分析仪 unicelunicel dxi dxi 800 800 immulite 2000型全自动酶标记化学发光免疫分析系统型全自动酶标记化学发光免疫分析系统 （三）碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫分析仪（三）碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫分析仪 该仪器以碱性磷酸酶标记抗原或抗体，以塑料微粒为该仪器以碱性磷酸酶标记抗原或抗体，以塑料微粒为 固相载体包被抗体（或抗原），以固相载体包被抗体（或抗原），以4-甲基伞型酮磷酸甲基伞型酮磷酸 盐（盐（4-mup）作为酶促

24、反应的荧光基质（底物），）作为酶促反应的荧光基质（底物）， 底物被酶水解后，脱磷酸根基团，形成底物被酶水解后，脱磷酸根基团，形成4-甲基伞型酮甲基伞型酮 (4-mu)，用，用360nm激发光照射，发出激发光照射，发出450nm的荧光。的荧光。 4-甲基伞型酮磷酸盐（甲基伞型酮磷酸盐（4-mup）反应原理示意图）反应原理示意图 仪器测定技术要点仪器测定技术要点 抗原抗体结合抗原抗体结合 洗涤、分离洗涤、分离 加入底物加入底物4-mup 信号检测信号检测 碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫测定示意图碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫测定示意图 axsym全自动酶标记荧光免疫分析仪全自动酶标记荧光免疫分析仪

25、 aia-1800型全自动酶标记荧光免疫分析仪型全自动酶标记荧光免疫分析仪 电化学发光免疫分析（电化学发光免疫分析（eclia）是一种在电极表面由电化是一种在电极表面由电化 学引发的特异性化学发光反应，它包括电化学和化学发光两学引发的特异性化学发光反应，它包括电化学和化学发光两 个过程。电化学发光免疫分析仪是采用电化学发光技术，生个过程。电化学发光免疫分析仪是采用电化学发光技术，生 物素放大技术，以顺磁性微粒为固相载体，用三联吡啶钌标物素放大技术，以顺磁性微粒为固相载体，用三联吡啶钌标 记抗原或抗体，三丙胺记抗原或抗体，三丙胺(tpa)为电子供体，而设计的一种自为电子供体，而设计的一种自 动化

26、分析仪器。电化学发光稳定、持续时间长，易于控制并动化分析仪器。电化学发光稳定、持续时间长，易于控制并 可根据待测分子的大小设计成多种反应模式如夹心法、竞争可根据待测分子的大小设计成多种反应模式如夹心法、竞争 法等。法等。 三、三、 电化学发光免疫分析仪电化学发光免疫分析仪 三联吡啶钌三联吡啶钌ru(bpy)3 2+分子结构图分子结构图 电化学发光剂发光的反应原理电化学发光剂发光的反应原理 磁性微磁性微粒直径粒直径2.8 m，表面的凸凹使包被面积放大表面的凸凹使包被面积放大。磁性微磁性微 粒体积小，粒体积小，悬浮于反应体系中悬浮于反应体系中，形成均一稳定的液相，在磁，形成均一稳定的液相，在磁 场

27、中易于场中易于分离分离。 仪器测定技术要点仪器测定技术要点 抗原抗体结合抗原抗体结合 电化学发光反应电化学发光反应 光信号检测光信号检测 检测完毕检测完毕 电化学发光免疫测定示意图电化学发光免疫测定示意图 电化学发光免疫测定工作示意图电化学发光免疫测定工作示意图 标记磁颗粒在电场中发光工作示意图标记磁颗粒在电场中发光工作示意图 可用于内分泌激素类、肿瘤标志物类、心肌标可用于内分泌激素类、肿瘤标志物类、心肌标 志物类、病毒标志物类、治疗性药物浓度、骨代谢志物类、病毒标志物类、治疗性药物浓度、骨代谢 指标和贫血类等方面的检测，是目前免疫化学应用指标和贫血类等方面的检测，是目前免疫化学应用 最为广泛

28、的新技术。最为广泛的新技术。 四、在临床免疫检测中的应用四、在临床免疫检测中的应用 第三节第三节 自动化荧光免疫分析系统自动化荧光免疫分析系统 荧光免疫自动化分析主要是将抗原荧光免疫自动化分析主要是将抗原 抗体结合反应与荧抗体结合反应与荧 光物质发光分析和计算机技术有机结合的一项自动化免疫光物质发光分析和计算机技术有机结合的一项自动化免疫 分析技术。根据抗原抗体反应后是否需要进行固相分离，分析技术。根据抗原抗体反应后是否需要进行固相分离， 分为均相和非均相两类。非均相荧光免疫测定主要有时间分为均相和非均相两类。非均相荧光免疫测定主要有时间 分辨荧光免疫测定法；均相荧光免疫测定主要有荧光偏振分辨

29、荧光免疫测定法；均相荧光免疫测定主要有荧光偏振 免疫测定法。免疫测定法。 时间分辨荧光免疫测定（时间分辨荧光免疫测定（time resolved fluorescence immunoassay, trfia）是以镧系元素标记抗原或抗体作是以镧系元素标记抗原或抗体作 为示踪物，并与时间分辨测定技术相结合，建立起来的一为示踪物，并与时间分辨测定技术相结合，建立起来的一 种新型非放射性微量分析技术，具有灵敏度高，镧系元素种新型非放射性微量分析技术，具有灵敏度高，镧系元素 发光稳定，荧光寿命长，不受样品自然荧光干扰，标准曲发光稳定，荧光寿命长，不受样品自然荧光干扰，标准曲 线范围宽等特点，已在临床实

30、验室广泛使用。线范围宽等特点，已在临床实验室广泛使用。 一、时间分辨荧光免疫分析仪一、时间分辨荧光免疫分析仪 eu3+元素激发光谱和发射光谱之间的元素激发光谱和发射光谱之间的stokes位移位移 （一）、原理（一）、原理 时间分辨时间分辨eu3+元素荧光信号测量示意图元素荧光信号测量示意图 （二）仪器测定技术要点（二）仪器测定技术要点 抗原抗体结合抗原抗体结合 加入加入eu3+螯合抗体螯合抗体 加入酸性增强液加入酸性增强液 4. 信号检测信号检测 固相双抗体夹心固相双抗体夹心trfia检测过程示意图检测过程示意图 增强液增强液(enhancement solution)，使，使eu3+抗体抗原

31、复合物的抗体抗原复合物的ph 值降低至值降低至23，以利于，以利于eu3+从复合物上完全解离下来，游离的从复合物上完全解离下来，游离的eu3+为增为增 强液中的另一种螯合剂所螯合，在协同剂等其它成分的作用下，与增强强液中的另一种螯合剂所螯合，在协同剂等其它成分的作用下，与增强 液中的液中的-二酮体生成一个二酮体生成一个eu3+在其内部的保护性胶态分子团，这是一个在其内部的保护性胶态分子团，这是一个 新的具有高强度荧光的稳定螯合物，它在紫外光的激发下发射很强的荧新的具有高强度荧光的稳定螯合物，它在紫外光的激发下发射很强的荧 光，信号的增强效果可达上万倍，该技术使用了解离增强步骤，并且采光，信号的

32、增强效果可达上万倍，该技术使用了解离增强步骤，并且采 用了前后两种不同的螯合剂，前一种用于用了前后两种不同的螯合剂，前一种用于eu3+与抗体标记，后一种用于与抗体标记，后一种用于 与解离下来的与解离下来的eu3+螯合成新的强荧光发射分子，因此，又将该技术称为螯合成新的强荧光发射分子，因此，又将该技术称为 解离增强镧系元素荧光免疫解离增强镧系元素荧光免疫(dissociation-enhanced lanthanide fluoroimmunoassay, delfia) （三）解离增强原理：（三）解离增强原理： auto delfiaauto delfia全自动时间分辨荧光免疫检测系统全自动时

33、间分辨荧光免疫检测系统 1. trfia分析用的酸性增强液易受环境、试剂、分析用的酸性增强液易受环境、试剂、 容器等里面的镧系元素污染，使本底升高，所用试容器等里面的镧系元素污染，使本底升高，所用试 剂和器材应尽量防尘。剂和器材应尽量防尘。 2.trfia分析用载体最常用的是聚苯乙烯微分析用载体最常用的是聚苯乙烯微96孔板，孔板， 其荧光本底低，并有洗涤微孔板的自动装置，但不其荧光本底低，并有洗涤微孔板的自动装置，但不 同厂家生产的微孔板，所产生的荧光有很大差异，同厂家生产的微孔板，所产生的荧光有很大差异， 应选择应用。应选择应用。 （四）注意事项（四）注意事项 荧光偏振免疫测定荧光偏振免疫测

34、定(fluorescence polarization immunoassay，fpia)，为一种均相荧光免疫测定方为一种均相荧光免疫测定方 法，其利用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光照法，其利用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光照 射后，可吸收光能而产生另一单一平面的偏振发射荧射后，可吸收光能而产生另一单一平面的偏振发射荧 光，该荧光强度与荧光光，该荧光强度与荧光 标记物质在溶液中旋转的速度标记物质在溶液中旋转的速度 与分子大小呈反比，常采用抗原与分子大小呈反比，常采用抗原-抗体竞争反应原理，抗体竞争反应原理， 适用于小分子半抗原（如药物浓度）的检测。适用于小分子半抗原（如药物浓度）的检测

35、。 二、荧光偏振免疫分析仪二、荧光偏振免疫分析仪 光的本质是电滋波，光是各个方向电滋波的混合物光的本质是电滋波，光是各个方向电滋波的混合物 ，当光线通过偏振滤光片后，形成只有一个方向的电，当光线通过偏振滤光片后，形成只有一个方向的电 滋波，称之为偏振光。荧光物质经单一平面的偏振光滋波，称之为偏振光。荧光物质经单一平面的偏振光 （蓝色光，（蓝色光，485nm）激发后，可吸收光能跃入激发态激发后，可吸收光能跃入激发态 ，在其恢复至基态时，释放能量并发射出单一平面的，在其恢复至基态时，释放能量并发射出单一平面的 偏振荧光（绿色光，偏振荧光（绿色光，525nm550nm） 。偏振荧光。偏振荧光 强度与

36、荧光物质分子在液相中转动的速度呈反比，即强度与荧光物质分子在液相中转动的速度呈反比，即 分子大转动速度慢，荧光强度大，分子小转动速度快分子大转动速度慢，荧光强度大，分子小转动速度快 ，荧光强度小。，荧光强度小。 ( (一一) ) 原理原理 偏振光和偏振荧偏振光和偏振荧 光发生示意图光发生示意图 荧光偏振免疫测定工作原理示意图荧光偏振免疫测定工作原理示意图 1. 抗原抗体反应抗原抗体反应 2.偏振荧光强度测定偏振荧光强度测定 （二）（二） 仪器测定技术要点仪器测定技术要点 1.fpia的结果好坏取决于荧光素标记的好坏、激发的结果好坏取决于荧光素标记的好坏、激发 态荧光的平均寿命、抗原的相对分子量

37、和复合物的态荧光的平均寿命、抗原的相对分子量和复合物的 特性等因素。特性等因素。 2.为提高为提高fpia灵敏度，可用除蛋白剂对标本进行预灵敏度，可用除蛋白剂对标本进行预 处理，除去干扰成分。处理，除去干扰成分。 （三）注意事项（三）注意事项 第四节第四节 自动化酶联免疫分析系统自动化酶联免疫分析系统 根据全自动酶联免疫分析系统的处理模式，人们通常将根据全自动酶联免疫分析系统的处理模式，人们通常将 全自动酶免分析仪分成二类，一类为分体机，一类为连体全自动酶免分析仪分成二类，一类为分体机，一类为连体 机。分体机是由机。分体机是由“前处理系统前处理系统”即全自动样本处理工作站即全自动样本处理工作站

38、 和和“后处理系统后处理系统”即全自动酶免分析仪两个独立的部分组即全自动酶免分析仪两个独立的部分组 成。连体机是由多个模块组成，使用一台计算机、一套操成。连体机是由多个模块组成，使用一台计算机、一套操 作系统实现了从标本稀释、加样到酶标板孵育、洗涤、加作系统实现了从标本稀释、加样到酶标板孵育、洗涤、加 试剂、再孵育、洗涤、读数和结果打印全自动进行。试剂、再孵育、洗涤、读数和结果打印全自动进行。 （一）仪器组成和性能（一）仪器组成和性能 1.条形码识别系统条形码识别系统 2.样本架和加样系统样本架和加样系统 3.试剂架试剂架 4.温育系统温育系统 5.液路系统液路系统 6.洗板系统洗板系统 7.

39、 酶标板读数仪酶标板读数仪 8.自动装载传递系统自动装载传递系统 9. 计算机管理和信息系统计算机管理和信息系统 全自动酶免分析仪中的连体机是将样本处理全自动酶免分析仪中的连体机是将样本处理 工作站和全自动酶免分析仪联合起来，工作工作站和全自动酶免分析仪联合起来，工作 速度快，自动化程度高，适合大批量样本的速度快，自动化程度高，适合大批量样本的 处理，如血站系统。处理，如血站系统。 分体机，由于它有一个独立的全自动样本处分体机，由于它有一个独立的全自动样本处 理站，加样速度快，适合试验项目变化多、理站，加样速度快，适合试验项目变化多、 样本批量不等的临床实验室。样本批量不等的临床实验室。 （二

40、）仪器评价（二）仪器评价 加样加样 洗板洗板 1. 什么是免疫检验自动化？应用哪些技术？优点是什么？什么是免疫检验自动化？应用哪些技术？优点是什么？ 2. 免疫浊度分析的原理是什么？有哪些临床应用？免疫浊度分析的原理是什么？有哪些临床应用？ 3. 免疫胶乳比浊法和免疫散射比浊法的原理是什么？免疫胶乳比浊法和免疫散射比浊法的原理是什么？ 4. 定时散射比浊法和速率散射比浊法的测定原理，其抗原过量检测有什么定时散射比浊法和速率散射比浊法的测定原理，其抗原过量检测有什么 不同点？不同点？ 5. 免疫比浊分析的影响因素有哪些？免疫比浊分析的影响因素有哪些？ 6. 吖啶酯标记的化学发光免疫分析仪技术要点是什么？吖啶酯标记的化学发光免疫分析仪技术要点是什么？ 7. 酶联发光免疫分析仪的原理，有哪几种类型？各有什么特点？酶联发光免疫分析仪的原理，有哪几种类型？各有什么