人褪黑素(melatonin)ELISA试剂盒使用说明书

1、人褪黑素(melato nin )ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清, 血浆及相关液体样本 中褪黑素(melatonin)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人褪黑素(melat onin)水平。用纯化的人褪黑素 (melatonin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入褪黑素 (melatonin)，再与HRP标记的褪黑素 (melatonin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物， 经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下 转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的

2、褪黑素(melatonin)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人褪黑素(melatonin)浓度。 试剂盒组成 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 圭寸板膜 2 片(48) 2 片(96) 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1X 48 1X 96 2-8 C保存 标准品：54n g/L 0.5ml X 1 瓶 0.5ml X 1 瓶 2-8 C保存 标准品稀释液 1.5ml X 1 瓶 1.5ml X 1 瓶 2-8 C保存 酶标试剂 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 样品稀释液 3 ml X 1

3、 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 显色剂A液 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 显色剂B液 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 终止液 3ml X 1 瓶 6ml X 1 瓶 2-8 C保存 浓缩洗涤液 (20ml X 20 倍)X 1 瓶 (20ml X 30 倍)X 1 瓶 2-8 C保存 样本处理及要求： 1血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转份)。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心

4、20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次 离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转份)。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS( PH7.2-7.4 )稀释细胞悬液，细胞 浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分 钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次

5、离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS, PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8C的温度。加入一定量的PBS （ PH7.4）,用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待 检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于 -20 C保存，但应避免反复冻融 . 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤： 1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10

6、孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100 M，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50 d，混匀；然后从第一孔、第二 孔中各取100 d分别加到第三孔和第四孔， 再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50 d, 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50 d弃掉，再各取50 d分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取50 d分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50 d，混 匀后从第七、第八孔中分别取50 d加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液50 d，混匀后从第九第十孔中各取50 d弃掉。（稀释后

7、各孔加样量都为 50 d, 浓度分别为 36 ng/L , 24 ng/L , 12 ng/L , 6 ng/L , 3 ng/L ）。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40 d,然后再加待测样品10 d （样 品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混 匀。 3. 温育：用封板膜封板后置 37 C温育30分钟。 4. 配液：将30 （48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 （48T的20倍）倍稀释后备用。 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗

8、涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50 d，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 d，再加入显色剂 B50 d，轻轻震荡混匀，37 C避光显色 15分钟. 10. 终止：每孔加终止液 50卩,1终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（ OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 注意事项： 1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2. 浓洗涤液可能会

9、有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值 大于标准品孔第一孔的 OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（Xn X 5）。 5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6. 底物请避光保存。 7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 2-8Co 2 有效期：6个月 依着风的眼眸, 的风是有灵性

10、的, 我看到了那一株株桃花读信的倩影，在桃林深处，紫色的青藤爬满那个小屋。我的小城，桃花已然开成海，像是一场粉色的春梦。是否，可以赴一场最美的相逢，如是，便不负曾经许下的约 定。守住心底最美风景，是一种风度，一种期望。让心，随花儿轻舞，让梦，随蝶儿翩跹。 等一缕柔风载满诗意，落满我的小院，好想，牵着你的手走在花开的路上，临摹又一个春的相遇，陌上绿色蔓延，让深情的诗句落在眉弯，打开灵魂的心门，写尽情意绵绵。春雨如丝， 暖了一季寒凉露出温暖，碧水映蓝天，云朵儿似乎摸到嫩草尖尖。花香十里，暗香盈袖。我们微笑着，不说话，就十分美好。 生命里，总会有一些人，渐行渐远，偶尔想起，却只是停留在文字里，那一抹

11、淡淡的回忆。唯有春天，总那么诗意明亮，始终晕染着眉心，让涩涩的往事随风，让一些温暖的记忆温润着 心房。珍惜眼前的幸福，紧握手中的暖意，面向青山绿水，一路微笑，一路行走 情暖山水间，盈一份诗意于心田，以云的飘逸轻盈过往，以花的姿态拥馨香满怀，以文字的杯盏邀约一曲细水长流。 煮一壶春色，与时光对语。窗前，柳枝儿发芽，玉兰含苞，时光一直绕指馨香。心念如这徐徐春风，荡漾成一片流云。春落人间，一种别样的景致美了心境，所有的疲惫与忧愁也随风而 去，微笑着面对生活，用内心的那份热情，那份纯真来经营生活，来创造幸福，何尝不是一种快乐？我的流年，风过，红尘入画；雨落，缠绵入心。 行走在春天里，眼里满是明丽与清澈，一树一树的花开，细碎而芬芳；一片一片的绿地，静美而清新。嗅着阳光的味道，把自己置身于大自然中，真好！只要心足够明媚，纵然有小小的 阴霾也无妨。 我们一路走来，沿途总会有美丽的风景。于喧嚣红尘中，守着心灵的一方山水。不乱于心，不困于情，不畏将来，不念过往。 春水初生，耐人寻味。春雨如丝，丝如媚，绵绵的不着一点儿声息。踏春而去，不知是哪一处的红尘山水在心间已布满了雅致，心如花开，一朵娴雅的光阴，柔软着眼角的笑意，置身于 安暖的春天，一抹浅喜，一怀深爱。一颗心，便在另一颗心的相随里静好。 春光无限温柔地洒满山川，我愿