检验方法验证检验方法确认实例(2010年版GMP)

1、检验方法确认报告检验方法确认-产品名称确认报告编号人工牛黄甲硝唑胶囊批号：、R-TS-VP-4001-00验证工作组工作组职务姓名部门及职务职 责组长黄汉新质量负责人/质量受权人负责确认方案及报告的批准副组长曾凤敏质量部QC组长负责确认方案起草、实施、汇总报告及培训工作副组长胡建新质量部QA组长审核确认方案、审核验证报告并协调工作组员刘红华质量部QC参加确认方案实施、汇总报告工作目 录1. 概述2. 确认目的和范围3. 组织及职责4. 确认起止日期5. 方法确认所需要的仪器设备及相关文件的确认6. 方法确认所需要的对照品、原辅料、检验样品的确认7.确认项目和确认方法、确认结果7.1【鉴别（1）

2、】人工牛黄薄层色谱鉴别方法确认7.2【鉴别（2）】甲硝唑紫外光谱鉴别方法确认7.3【鉴别（3）】人工牛黄胆红素液相色谱鉴别方法确认7.4甲硝唑含量测定方法专属性确认7.5甲硝唑含量测定方法线性关系与线性范围确认7.6甲硝唑含量测定方法准确度确认7.7甲硝唑含量测定方法精密度确认7.8甲硝唑含量测定方法耐用性确认7.9胆红素含量测定方法系统适用性确认7.10胆红素含量测定方法专属性确认7.11胆红素含量测定方法线性关系与线性范围确认7.12胆红素含量测定方法准确度确认7.13胆红素含量测定方法精密度确认7.14胆红素含量测定方法耐用性确认8.三批产品按本检验方法检验的结果确认9.偏差与漏项控制1

3、0.确认报告会审1. 概述我公司生产的品种人工牛黄甲硝唑胶囊，执行国家药监局颁布的法定药品标准，标准号为：WS-10001-(HD-0204)-2002。本公司前身（原广东华卫药业有限公司）按该标准生产、检验人工牛黄甲硝唑胶囊已有多年的历史。根据GMP（2010版）第二百二十三条规定，对收入药典和其它法定标准的分析方法，应通过检验方法确认来证明该方法在本实验室条件下的适用性。故本公司依照法定标准WS-10001-(HD-0204)-2002以及中国药典2015版四部附录9101：药品质量标准分析方法验证指导原则的规定，制定本检验方法确认方案，由质量部按制定的方法进行试验，根据试验结果判断检验方

4、法在本公司是否适用。本产品的微生物限度检查方法验证，另行制定验证方案进行验证，不包括在本次确认。2. 确认目的和范围确认该产品的检验方法在本公司检验室的适用性，保证检验结果的可靠性。本确认方案采用3批按GMP要求组织生产的人工牛黄甲硝唑胶囊，进行检验方法的确认。确认项目包括【鉴别】、【甲硝唑含量测定】、【胆红素含量测定】等。3.组织及职责3.1确认方案和确认报告的起草、审核、批准确认方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。确认方案实施完成后，由QC组负责汇总各个项目确认的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。3.2确认方案的培训确认方案在经质量负责人批

5、准后，由QC组组长对本次确认实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。3.3确认方案实施过程中的变更和偏差确认方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。3.4 确认工作小组成员表姓名部门及职务职 责黄汉新质量负责人/质量受权人负责确认方案及报告的批准曾凤敏质量部QC组长负责方案制定、实施、报告及培训工作胡建新质量部QA组长审核确认方案、审核确认报告并协调工作刘红华质量部QC参加确认方案实施、汇总报告工作4. 确认起止日期 用于本次检验方法确认的三批产品是人工牛黄甲硝唑胶囊批号： 、 、 实施确认工作的起止时间是： 5. 方法确认所需要的仪器设备及相

6、关文件的确认5.1.主要检验仪器设备确认表序号仪器设备名称型 号编号校准单位校准日期有效期至1电子天平BSA124SJY-102数显鼓风干燥箱GZX-9076MBEJY-193紫外可见分光光度计UV-2401-PCJY-034高效液相色谱仪LC-10ATJY-015液相色谱仪LC-20ADJY-02检查人/日期： 复核人/日期：5.2.确认所需文件的确认表文件名称文件编码是否有效版本文件保存处人工牛黄甲硝唑胶囊内控质量标准TS-QS-4002-00是 否质量部人工牛黄甲硝唑胶囊检验操作规程SOP-QC-4002-00是 否质量部取样操作规程SOP-QA-0001-00是 否质量部紫外可见分光光

7、度法检验操作规程 SOP-QC-0008-00是 否质量部高效液相色谱法检验操作规程 SOP-QC-0009-00是 否质量部薄层色谱法操作规程 SOP-QC-0030-00是 否质量部UV-2401-PC紫外可见分光光度计操作规程SOP-QC-5006-00是 否质量部LC-10AT高效液相色谱仪操作规程SOP-QC-5005-00是 否质量部LC-20AD高效液相色谱仪操作规程SOP-QC-5007-00是 否质量部BSA124S电子天平操作规程SOP-QC-5017-00是 否质量部检查人/日期： 复核人/日期：6. 方法确认所需要的对照品、原辅料、检验样品的确认6.1. 对照品、原辅料

8、检查表序号品名来源批号备注1胆酸对照品中国药品生物制品检定所2猪去氧胆酸对照品中国药品生物制品检定所3胆红素对照品中国药品生物制品检定所含量98.5%4甲硝唑原料药湖北省宏源药业科技股份有限公司标定含量为100.0%5人工牛黄原料药武汉百草园生化药业有限公司6淀粉辅料东莞市东岳葡萄糖厂有限公司7二氧化硅辅料湖州展望药业有限公司检查人/日期： 复核人/日期：6.2. 检验样品确认表序号品名生产厂家批号规格是否按GMP要求生产1人工牛黄甲硝唑胶囊佛山市华普生药业有限公司甲硝唑0.2g人工牛黄5mg是 否2人工牛黄甲硝唑胶囊佛山市华普生药业有限公司甲硝唑0.2g人工牛黄5mg是 否3人工牛黄甲硝唑胶

9、囊佛山市华普生药业有限公司甲硝唑0.2g人工牛黄5mg是 否检查人/日期： 复核人/日期：7.确认项目及确认方法7.1【鉴别（1）】人工牛黄薄层色谱鉴别方法确认7.1.1鉴别方法的专属性确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【鉴别（1）】项下规定，分别制备以下溶液，进行鉴别方法专属性的确认：（1）胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液：取胆酸、猪去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；（2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：分别取本品3批的内容物约0.95g（约相当于人工牛黄20mg），研细，加氯仿15ml，超声处理20分钟，滤

10、过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；（3）人工牛黄阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除人工牛黄不称取外，称取甲硝唑原料0.80g，淀粉0.08g，二氧化硅0.04g共置量瓶中，加氯仿15ml，超声处理20分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为人工牛黄阴性样品溶液。试验方法：照薄层色谱法（中国药典2015年版四部0502）试验，吸取上述溶液各4l,分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（20：25：2：3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热数分钟至斑点显色清晰，日光下或置紫

11、外光灯（365nm）下检视。7.1.2方法确认接受标准：（1）胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液：显2个主斑点；（2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：在与对照品色谱相应位置上，显同颜色斑点；（3）人工牛黄阴性样品溶液：在与对照品色谱相应位置上，不显斑点。7.1.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号 编号 ， 数显鼓风干燥箱型号 编号 硅胶G薄层板批号 ，来源 （2）胆酸对照品称样量 ，稀释倍数 猪去氧胆酸对照品称样量 ，稀释倍数 （3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ；（4）项目确认结果【鉴别（1）】人工牛黄薄层色谱鉴别-方法专属性确认结果测

12、试样品胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液人工牛黄甲硝唑胶囊人工牛黄阴性样品批批批薄层色谱显2个主斑点与对照品色谱相应位置显同颜色斑点与对照品色谱相应位置显同颜色斑点与对照品色谱相应位置显同颜色斑点与对照品色谱相应位置不显斑点项目确认结果: 通过 不通过检查人/日期： 复核人/日期：7.2【鉴别（2）】甲硝唑紫外光谱鉴别方法确认7.2.1鉴别方法的专属性确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【鉴别（2）】项下规定，分别制备以下溶液，进行鉴别方法专属性的确认：（1）甲硝唑对照品溶液：取甲硝唑对照品约20.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（91

13、000）溶解，稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀即得。（2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：分别精密取本品3批的内容物约59mg（约相当于甲硝唑50mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）约80ml，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀即得。（3）甲硝唑阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除甲硝唑不称取外，称取淀粉10mg，二氧化硅5mg、人工牛黄3mg置200ml量瓶中，加盐酸溶液（91

14、000）160ml微温，放冷后稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀即得。试验方法：照分光光度法，取上述各种溶液扫描紫外吸收光谱7.2.2方法确认接受标准：（1）甲硝唑对照品溶液：在2772nm的波长处有最大吸收；在2412nm的波长处有最小吸收；（2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：在2772nm的波长处有最大吸收；在2412nm的波长处有最小吸收；（3）甲硝唑阴性样品溶液：在2772nm的波长处无最大吸收；在2412nm的波长处无最小吸收。7.2.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号 编号 ，紫外分光光度

15、计型号 编号 （2）甲硝唑对照品称样量20.1 mg （3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ；（4）项目确认结果【鉴别（2）】甲硝唑紫外光谱鉴别-方法专属性确认结果测试样品甲硝唑对照品人工牛黄甲硝唑胶囊甲硝唑阴性样品批批批最大吸收2772nm2772nm2772nm2772nm2772nm无最大吸收最小吸收2412nm2412nm2412nm2412nm2412nm无最小吸收项目确认结果: 通过 不通过检查人/日期： 复核人/日期7.3【鉴别（3）】人工牛黄胆红素液相色谱鉴别方法确认7.3.1鉴别方法的专属性确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质

16、量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【鉴别（3）】项下规定，分别制备以下溶液，进行鉴别方法专属性的确认：（1）胆红素对照品溶液：取胆红素对照品约10.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，摇匀，精密量取1.0ml置25ml棕色量瓶中, 加氯仿-甲醇-水-盐酸(90：10：0.3：0.03)混合液稀释至刻度，制成每1ml中含胆红素约4g的溶液，即得。（2）样品提取溶剂：氯仿-甲醇-水-盐酸（90：10:0.3:0.03）的混合液（3）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：取批本品的内容物约1.7g（约相当于胆红素0.2mg），精密称定，置50ml棕色量瓶中，加氯仿-

17、甲醇-水-盐酸（90：10:0.3:0.03）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，迅速冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。（4）人工牛黄阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除人工牛黄不称取外，称取甲硝唑1.45g，淀粉0.145g，二氧化硅0.072g共置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-10%盐酸（50：50:0.3）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。试验方法：精密吸取上述溶液各20l，注入液相色谱仪，记录色谱图。7.3.2方法确认接受标准：（1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液主峰保留时间与胆红素对

18、照品溶液主峰保留时间一致（相对偏差不超过0.5%）；（2）人工牛黄阴性样品溶液、样品提取溶剂在胆红素峰保留时间处均应为平直基线，无吸收峰。7.3.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号 编号 ，高效液相色谱仪型号 编号 （2）胆红素对照品称样量：9.90mg （3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：批号 ，称样量 （4）项目确认结果【鉴别（3）】人工牛黄胆红素液相色谱鉴别-方法专属性确认结果测试样品胆红素对照品成品样品提取溶剂人工牛黄阴性样品胆红素峰保留时间7.183min7.170min在胆红素峰保留时间处为平直基线，无色谱峰。在胆红素峰保留时间处为平直基线，无色谱峰。项目确认结果: 通

19、过 不通过检查人/日期： 复核人/日期7.4甲硝唑含量测定方法专属性确认7.4.1甲硝唑含量测定方法的专属性确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行方法专属性的确认：（1）甲硝唑对照品溶液：取甲硝唑对照品约20.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）溶解，稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀即得。（2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：分别精密取本品3批的内容物约59mg（约相当于甲硝唑50mg），置100ml量瓶中，加

20、盐酸溶液（91000）约80ml，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀即得。（3）甲硝唑阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除甲硝唑不称取外，称取淀粉10mg，二氧化硅5mg、人工牛黄3mg置200ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）160ml微温，放冷后稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀即得。试验方法：照分光光度法，取上述各种溶液扫描紫外吸收光谱，并读取吸收峰处的吸收度。7.

21、4.2方法确认接受标准：（1）甲硝唑对照品溶液：在2772nm的波长处有最大吸收；（2）3批人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：在2772nm的波长处有最大吸收；（3）甲硝唑阴性样品溶液：在2772nm的波长处基本无吸收，吸收度A值接近0。7.4.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号 编号 ，紫外分光光度计型号 编号 （2）甲硝唑对照品称样量20.1 mg （3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ；批号 ，称样量 ；（4）项目确认结果甲硝唑含量测定-方法专属性确认结果测试样品甲硝唑对照品人工牛黄甲硝唑胶囊甲硝唑阴性样品批批批最大吸收在2772nm有最大吸收在27

22、72nm有最大吸收在2772nm有最大吸收在2772nm有最大吸收在2772nm基本无吸收，吸收度A=0项目确认结果: 通过 不通过检查人/日期： 复核人/日期7.5甲硝唑含量测定方法的线性关系与线性范围确认7.5.1甲硝唑含量测定方法的线性关系与线性范围确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行线性关系与线性范围的确认：（1）甲硝唑对照品贮备液：取甲硝唑对照品约20.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）溶解，稀释至刻度，摇匀。精密量取6ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（

23、91000）稀释至刻度，摇匀即得。（2）线性关系测试溶液：分别精密量取甲硝唑对照品贮备液4ml、5ml、6ml、7ml、10ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀得系列浓度的测试溶液。试验方法：照紫外-可见分光光度法，在277nm的波长处测定上述系列溶液的吸收度。计算出各个测试溶液的甲硝唑浓度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，计算线性回归方程、回归系数R2、线性范围。7.5.2方法确认接受标准：（1）测试溶液的甲硝唑浓度与吸收度之间呈良好线性关系，回归系数R2：0.995R21；（2）甲硝唑浓度线性范围：应涵盖人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-020

24、4)-2002【含量测定 甲硝唑】项下样品溶液中甲硝唑浓度12.5g/ml的80%120%，即结果的线性范围应涵盖10.0g/ml15.0g/ml。7.5.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号 编号 ，紫外分光光度计型号 编号 （2）甲硝唑对照品称样量20.1 mg （3）项目确认结果甲硝唑含量测定方法-线性关系与线性范围确认对照品浓度（ug/ml）8.0410.0512.0614.0720.10277nm的A值0.3130.3890.4640.5440.783线性回归方程y=0.039x-0.0037回归系数R2R2=0.9998线性范围甲硝唑浓度8.04 ug/ml20.10 ug

25、/ml项目确认结果: 通过 不通过检查人/日期： 复核人/日期7.6甲硝唑含量测定方法准确度确认（回收率试验）7.6.1甲硝唑含量测定方法的准确度确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 甲硝唑】项下规定，分别制备以下溶液，进行方法准确度的确认：（1）甲硝唑阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，精密称取人工牛黄25.0mg，淀粉100.0mg，二氧化硅50.0mg共置100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀即得。（2）回收率测试溶液：精密称取甲硝唑工作对照品约50mg，置100ml量瓶中，精密加入甲硝唑阴性

26、样品溶液5ml，再加盐酸溶液（91000）约75ml，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在277nm的波长处测定吸收度，按C6H9N3O3的吸收系数为377计算甲硝唑加入量，计算加样回收率。（3）甲硝唑工作对照品：采用依照中国药典2015年版“甲硝唑”项下进行全检合格，标定纯度的甲硝唑原料药。7.6.2方法确认接受标准： A40（1）计算公式：工作对照品回收率%=100% 377WR式中：A为回收率测试溶液的吸收度； WR为工作对照品加入量（g）（2）工作

27、对照品回收率限度为99.0%101.0%，回收率的相对标准偏差（RSD）限度为2.0%7.6.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号 编号 ，紫外分光光度计型号 编号 （2）甲硝唑工作对照品（湖北省宏源药业科技股份有限公司，批号：，标定结果纯度为100.0%）。 （3）项目确认结果甲硝唑含量测定方法-准确度确认结果试验编号工作对照品加入量（mg）测得吸收度A值测得甲硝唑量（mg）工作对照品回收率%平均回收率%回收率的RSD148.90.46249.02100.24100.140.47%250.30.47250.0899.56349.30.46849.66100.73450.60.4795

28、0.82100.43550.50.47450.2999.58649.60.46949.76100.32项目确认结果: 通过 不通过检查人/日期： 复核人/日期7.7甲硝唑含量测定方法精密度确认7.7.1甲硝唑含量测定方法的精密度确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 甲硝唑】项下方法，进行方法精密度的确认：（1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品甲硝唑含量测定溶液：精密取本品批成品的内容物约59mg（约相当于甲硝唑50mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）约80ml，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤

29、纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀, 照分光光度法，在277nm的波长处测定吸收度，按C6H9N3O3的吸收系数为377计算甲硝唑含量。（2）仪器吸收度读数重复性：取同一份含量测定溶液,在紫外分光光度上连续测定吸收度。（3）甲硝唑含量测定的重复性：取批成品，由同一人分别称取6份样品，进行含量测定。（4）甲硝唑含量测定的中间精密度：取批成品，由甲实验人员称取6份样品，进行测定（即上述甲硝唑含量测定的重复性）；再由乙实验人员在不同的日期称取6份样品，进行测定。7.7.2方法确认接受标准： A40（1）计算公式：甲硝唑的绝对百分含量%=100%

30、 377W式中：A为溶液的吸收度； W为样品称样量（g）（2）仪器吸收度读数重复性：读数的相对标准偏差（RSD）限度为0.3%（3）甲硝唑含量测定的重复性：结果的相对标准偏差（RSD）限度为1.5%（4）甲硝唑含量测定的中间精密度：结果的相对标准偏差（RSD）限度为2.0%7.7.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号 编号 ，紫外分光光度计型号 编号 （2）仪器吸收度读数重复性：同一份溶液读数6次，结果如下：测定次数1#2#3#4#5#6#RSD吸收度A0.4700.4720.4720.4720.4720.4710.2%确认结果: 通过 不通过检查人/日期： 复核人/日期（3）甲硝唑含

31、量测定的重复性：成品批号测定次数1#2#3#4#5#6#含量均值含量测定的RSD称样量W(g)0.05950.05920.05890.05960.05930.059284.68%1.2%吸收度A0.4710.4650.4680.4780.4760.481百分含量83.99%83.34%84.30%85.09%85.17%86.21%确认结果: 通过 不通过检查人/日期： 复核人/日期：（4）甲硝唑含量测定的中间精密度 成品批号试验次数甲1甲2甲3甲4甲5甲6乙1乙2乙3乙4乙5乙6平均值含量测定的RSD称样量W(g)0.05950.05920.05890.05960.05930.05920.0

32、6170.06130.06160.05740.05700.0581吸收度A0.4710.4650.4680.4780.4760.4810.4910.4930.4900.4560.4560.457百分含量83.99%83.34%84.30%85.09%85.17%86.21%84.43%85.33%84.40%84.29%84.8883.46%84.57%0.96%确认结果: 通过 不通过 检查人/日期： 复核人/日期：7.8甲硝唑含量测定方法耐用性确认将7.2项下成品溶液、对照品溶液放置于室温，每隔一段时间测定吸收度，吸收度至少应在8小时内稳定。甲硝唑含量测定-方法耐用性确认溶液吸收度A时间成

33、品溶液对照品溶液0hr0.4700.39124hr0.4720.39148hr0.4690.39096hr0.4640.385确认结果: 通过 不通过检查人/日期： 复核人/日期： 7.9胆红素含量测定方法系统适用性确认7.9.1胆红素含量测定方法系统适用性确认方法参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 胆红素】项下方法，进行高效液相色谱系统适用性确认：（1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品胆红素含量测定溶液：精密称取批号的人工牛黄甲硝唑胶囊内容物约1.7g（约相当于胆红素0.2mg），置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-水-盐酸（90：10:0.3:0.

34、03）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，迅速冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。（2）色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为甲醇-氯仿-1%磷酸溶液（81:13:6），检测波长449nm。（3）取上述同一份含量测定溶液,连续6次进样测定，每次进样量均为20l，记录色谱图。7.9.2胆红素含量测定方法系统适用性确认接受标准（1）主峰（胆红素峰）保留时间的相对标准偏差（RSD）限度为1.0%（3）主峰（胆红素峰）面积的相对标准偏差（RSD）限度为2.0%（4）主峰（胆红素峰）的理论板数应大于1500（5）主峰（胆红素峰）的分离度应大于1.5（6）主峰（胆红素峰）的拖

35、尾因子应在0.91.1之间7.9.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号 编号 ，高效液相色谱仪型号 编号 （2）系统适用性确认结果如下：试验次数1#2#3#4#5#6#RSD保留时间7.1707.1657.1657.1597.1507.1690.1%峰面积0.46%理论板数205020352043203720412042胆红素峰分离度单峰（溶剂峰除外）单峰（溶剂峰除外）单峰（溶剂峰除外）单峰（溶剂峰除外）单峰（溶剂峰除外）单峰（溶剂峰除外）胆红素峰拖尾因子1.081.081.081.081.081.08确认结果: 通过 不通过检查人/日期： 复核人/日期7.10胆红素含量测定方法专属性

36、确认7.10.1胆红素含量测定方法的专属性确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 胆红素】项下规定，分别制备以下溶液，进行含量测定方法专属性的确认：（1）胆红素对照品溶液：取胆红素对照品约10.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，摇匀，精密量取1.0ml置25ml棕色量瓶中, 加氯仿-甲醇-水-盐酸(90：10：0.3：0.03)混合液稀释至刻度，制成每1ml中含胆红素约4g的溶液，即得。（2）样品提取溶剂：氯仿-甲醇-水-盐酸（90：10:0.3:0.03）的混合液（3）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：取批本品的

37、内容物约1.7g（约相当于胆红素0.2mg），精密称定，置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-水-盐酸（90：10:0.3:0.03）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，迅速冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。（4）人工牛黄阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除人工牛黄不称取外，称取甲硝唑1.45g，淀粉0.145g，二氧化硅0.072g共置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-10%盐酸（50：50:0.3）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。试验方法：精密吸取上述溶液各20l，注入液相色谱仪，记录色谱

38、图。7.10.2方法确认接受标准：（1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液主峰保留时间与胆红素对照品溶液主峰保留时间一致（相对偏差不超过0.5%）；（2）人工牛黄阴性样品溶液、样品提取溶剂在胆红素峰保留时间处均应为平直基线，无吸收峰。7.10.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号 编号 ，高效液相色谱仪型号 编号 （2）胆红素对照品称样量：9.90mg （3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量：批号 ，称样量 （4）项目确认结果胆红素含量测定-方法专属性确认结果测试样品胆红素对照品成品样品提取溶剂人工牛黄阴性样品胆红素峰保留时间7.183min7.170min在胆红素峰保留时间处为平直基线，无色谱

39、峰。在胆红素峰保留时间处为平直基线，无色谱峰。项目确认结果: 通过 不通过检查人/日期： 复核人/日期7.11胆红素含量测定方法线性关系与线性范围确认7.11.1胆红素含量测定方法的线性关系与线性范围确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 胆红素】项下规定，分别制备以下溶液，进行线性关系与线性范围的确认：（1）胆红素对照品贮备液：取胆红素对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，摇匀即得。（2）线性关系测试溶液：分别精密量取胆红素对照品贮备液1.0ml、1.5ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml置50ml

40、量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀得系列浓度的测试溶液。试验方法：取上述每种浓度的线性关系测试溶液连续进样2针，测定胆红素峰面积平均值。液相色谱仪：LC-10AT，色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为甲醇-氯仿-1%磷酸溶液（81:13:6），检测波长449nm，每次进样量为20l。计算出各个测试溶液的胆红素浓度，以浓度为横坐标，胆红素峰面积平均值为纵坐标，计算线性回归方程、回归系数R2、线性范围。7.11.2方法确认接受标准：（1）测试溶液的胆红素浓度与峰面积之间呈良好线性关系，回归系数R2：0.995R21；（2）胆红素浓度线性范围：应涵盖人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-

41、(HD-0204)-2002【含量测定 胆红素】项下对照品溶液胆红素浓度4g/ml（进样量20l）的80%120%，即结果的线性范围应涵盖3.2g/ml4.8g/ml。7.11.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号 ，编号 ，高效液相色谱仪型号 编号 （2）胆红素对照品称样量9.90 mg 含量： 98.5% （3）项目确认结果胆红素含量测定方法-线性关系与线性范围确认结果对照品浓度（ug/ml）1.95032.92553.90065.85097.8012胆红素峰面积胆红素峰面积均值线性回归方程Y=X-32906回归系数R20.9996线性范围胆红素浓度1.9503ug/ml7.801

42、2 ug/ml（进样量为20l）项目确认结果: 通过 不通过检查人/日期： 复核人/日期7.12胆红素含量测定方法准确度确认（回收率试验）7.12.1胆红素含量测定方法的准确度确认方法：参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 胆红素】项下规定，进行方法准确度的确认：（1）胆红素对照品贮备溶液：取胆红素对照品10mg，精密称定，置100ml棕色量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，摇匀即得。（2）胆红素对照品溶液：精密取胆红素对照品贮备溶液1.0ml置25ml棕色量瓶中, 加氯仿稀释至刻度，摇匀制成每1ml中含胆红素约4g的溶液，即得。（3）回收率测试溶

43、液：取批人工牛黄甲硝唑胶囊（按照7.13项下方法测得其胆红素平均含量为0.0124%）的内容物，研细，充分混合均匀，精密称取适量（约相当于胆红素0.1mg），置50ml棕色量瓶中，精密加入胆红素对照品贮备溶液1.0ml，加氯仿-甲醇-水-盐酸(90：10：0.3：0.03)混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，迅速冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得回收率试验溶液。(4)精密吸取对照品溶液、回收率试验溶液各20l，注入液相色谱仪，记录色谱图及胆红素峰面积，按外标法计算回收率测试溶液中胆红素的量。7.12.2方法确认接受标准： AtWs（1）计算公式：回收率测试溶液中胆红素总量

44、(mg)= As50式中：At为回收率测试溶液的峰面积；As为对照品溶液的峰面积； Ws为对照品称样量（mg）测得胆红素总量-样品本底胆红素量胆红素对照品回收率（%）=-100% 回收率测试溶液中胆红素对照品加入量（2）胆红素对照品回收率限度为94.0%106.0%，回收率的相对标准偏差（RSD）限度为3.0%7.12.3方法确认记录与确认结果（1）电子天平 型号 编号 ，高效液相色谱仪型号 编号 （2）胆红素对照品称样量9.90 mg 含量： 98.5% （3）项目确认结果胆红素含量测定方法-方法准确度确认结果试验编号样品本底胆红素百分含量%样品称样量（g）样品本底胆红素量（mg）对照品加入量mg试验溶液峰面积对照品溶液峰面积测得胆红素总量mg测得对照品加入量mg对照品回收率%平均回收率%RSD10.01240.94180.116780.097520.213760.0969899.4101.32.6%20.93140.115490.097520.215410.09992102.530.95270.118130.097520.221440.10331105.940.94670.117390.