微生物的实验室培养一轮

1、专题二 微生物的培养与应用,课题一 微生物的实验室培养,1、形态：球形、杆形、螺旋形。,一、细菌,2、繁殖 二分裂,20分钟30分钟，分裂一次,无鞭毛的球菌：菌落较小较厚、边缘整齐. 有鞭毛的细菌：菌落大而扁平、边缘波状或锯齿状.,问：菌落在生态学 上属于什么单位？,二、菌 落,菌落可以作为菌种 鉴定的重要依据。,单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。,几种菌落,一、微生物的实验室培养,（一）培养基,人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质,一般的培养基均需要碳源、氮源、生长因子、无机盐和水等。,1、培养基的基本成

2、分,不同培养基要满足不同微生物对pH、特殊营养物质及氧气的需求。,2、培养基的种类,（1）按物理状态来分： 分为固体培养基和液体培养基(还有半固体)。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。 （2）按功能来分： 分为选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分来分： 分为天然培养基和合成培养基。,（二）无菌技术,消毒,灭菌,使用较为温和的方法来杀死部分对人体有害的微生物。,对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行 ； 将培养皿、接种用具进行 ； 接种的过程要在 附近进行。,使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。,清洁消毒,灭菌,酒精灯,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min

3、 2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ,(1)消毒的方法：,1.灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。,（2）常用的灭菌方法,2.干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160170OC中加热12h即可。,3.高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内（见教材16页图2-4）煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到100kPa，温度到121OC后，维持1530min即可。,

4、二、实 验 操 作,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1.计算,2.称量,3.溶化,4.灭菌,5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右（P17）,平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,（二）纯化大肠杆菌,1.平板划线法,在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。,1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？,杀灭残留在接种环的微生物。,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷

5、却后再进行划线？ 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,以免接种环温度太高，杀死菌种。,划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,2.稀释涂布平板法,稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平板操作。,系列稀释操作,(1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。,(2)用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。,(3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六

6、支试管。,涂布平板操作（P19）,(1)将涂布器浸在盛有70的酒精的烧杯中。,(2)取少量菌液（不超0.1mL），滴加到培养基表面。,(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却810s。,(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。,涂布平板操作后，37度恒温培养，如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。,无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。,两种纯化细菌的方法的比较,1、下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。 实验步骤： (1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液

7、。 (2)为了得到更加准确的结果，你选用_法接种样品。 (3)适宜温度下培养。 结果分析： (1)测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是_，其理由是_ 。 A一个平板，统计的菌落数是230 B两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240 C三个平板，统计的菌落数分别是210、50和520，取平均值260 D四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和250，取平均值250 (2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中的菌落数是_(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)。,稀释涂布平板,D,在设计实验时，一定要涂布至少三个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性；在分析实验结果时，要考虑所设置的重复组的结果是否合理,2.34108,(3)用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得的数量_，因为_,多,当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落,2制备牛肉膏蛋白胨固体