浙科版选修1第一部分实验一大肠杆菌的培养和分离课件9

1、1,实验,大肠杆菌的培养和分离,实验目的,1,进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进,行细菌培养的操作,2,进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基,本进行细菌的划线培养,3,说明大肠杆菌培养的条件和实验原理,一、基础知识,一,微生物,1,特点：结构都相当简单,个体多数十分微小,通常要,用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没,有细胞结构,且体内一般不含有叶绿素,不能进行光,合作用,病,细,毒,菌,2,微生物包括五类,放线菌,真,菌,原生动物,二,培养基,1,分类,按物理形态分,1,液体培养基,2,固体培养基,常用的固体培养基,琼脂固体培养基,微生物在固体培养基,表面生长,可以形成,肉眼可见的,

2、菌落,2,培养基内所含的基本物质,1,水,2,碳源,3,氮源,4,无机盐,3,培养基内所需的其他条件,1)pH,值,如,培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱,性,2,特殊营养物质,生长因子,如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生,素,3,氧气的含量,如,培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件,三,无菌技术,防止外来杂菌的入侵,1,获得纯净培养物的关键,2,无菌技术,的,四个方面,参看教材,20,页,3,消毒与灭菌,1,消毒,概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体,表面或内部一部分对人体有害的微生物。包括芽孢,和孢子吗,不包括芽孢和孢子,方法,a,煮沸消毒法,b,巴氏消毒法,如牛奶的消毒,c,

3、化学药剂消毒,酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等,d,紫外线消毒,2,灭菌,概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的,微生物，包括芽孢和孢子,方法,a,灼烧灭菌,b,干热灭菌,c,高压蒸汽灭菌,a,灼烧灭菌,注意适用范围,微生物的接种工具,接,种环、接种针,或其,他金属用具直接在火,焰的充分燃烧层灼烧,b,干热灭菌,160,170,1,2h,能耐高温的需要保持干,燥的物品,玻璃器皿,c,高压蒸汽灭菌,100kPa 121,15-30min,通常用于培养基的灭菌,二、实验操作,一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,计算称量溶化灭菌,倒平板,二）纯化大肠杆菌,接种方法有,平板划线法,和,稀释涂布平板法,

4、三）将接种后的培养基和一个未接,种的培养基放入,37,恒温箱中培养,12h,和,24h,后，观察并记录,三、课题延伸：菌种的保藏,1,斜面保藏,临时保存,2,甘油保藏,长期保存,实验,1,大肠杆菌的培养和分离,设备及用品,灭菌锅或高压锅,250ml,的三角瓶、封口膜和橡皮圈,直径,90mm,的培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培,养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有,酒精棉球的广口瓶、镊子、有棉塞的试管,15mm,120mm,5,支,实验材料,1)50mlLB,液体培养基：蛋白胨,0.5g,酵母提取物,0.25g,NaCl 0.5g,加水,50ml,2,大肠杆菌菌种斜面,3,空白斜

5、面,实验步骤,1,灭菌,将配制好的,50mlLB,液体培养基和,50mlLB,液,体培养基分别装入两个,250ml,的三角瓶中，加上封口膜，用高压锅进行灭菌,2,制平板,在酒精灯火焰旁将固体培养基分别倒在,4,个,培养皿中，使培养基铺平皿底部，待凝，使之形成平面,3,接种扩大培养,靠近酒精灯火焰将大肠杆菌接种到,三角烧瓶的液体培养基中，三角烧瓶在,37,摇床振荡培,养,12h,4,划线分离,将摇床上培养,12h,的菌液在固体培养基的,平板上连续划线，然后将盖好的培养皿倒置，放在,37,恒温培养箱中进行培养,5,单菌落接种培养,在无菌操作下将单菌落用接种环,取出，再用划线法接种在空白斜面上，在,37,下培养,24h, 4,冰箱保存,单菌落,实验讨论,实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理,实验完成后，所有接触过细菌的器皿都必须,先高压灭菌后再洗涤，特别是培养基，有可,能被有害菌体污染，在培养繁殖后，大量有,害菌体影响人畜健康，也污染环境，因此必,