血清乙型肝炎病毒表面抗体检测作业指导书

1、血清乙型肝炎病毒表面抗体检测作业指导书（ELISA）1. 原 理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标 记抗 原（ HBsAg-HRP）及 TMB 等 其 它试 剂，采 用 夹 心法 原 理 检 测 人 血 清（ 或 血 浆）中 乙 肝 表 面 抗 体（ HBsAb）。2. 标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清或血浆2.3标 本 要 求 ：采 集 病 人 静 脉 血 3ml（ 可 用 EDTA 抗 凝 ），室温放置不超过 4 小时，分离血清备用。3. 标本储存：2- 8 保存不应超过 1 周，-20 不应超过 3 个月，-70 长期保存，应避免反复冻融。4. 标

2、本运输：密封，室温运输。5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6. 试 剂6.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。6.3包 装 规 格 ： 96Test/Kit6.4试剂盒组成：HBsAb 微 孔 板， HBsAb 酶 标 记 抗 原 ，HBsAb 阳 性 对 照 血清 ，HBsAb 阴 性 对 照 血 清 ，浓 缩 洗 涤 液 ，底 物 A，底 物B，终止液，封口膜，自封袋。6.5试剂储存条件及有效期：2-8避光保存，有效期9 个 月 。7. 仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7.2仪器厂家：KHB7.

3、3仪器型号：ST3608. 操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18- 25 ），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按 1：19稀释后使用 。8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。8.4加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照 血 清 各 50 l 于 相 应 孔 中 。8.5加 酶 ：分 别 在 每 孔 中 加 入 酶 标 记 抗 体 50 l ，轻 拍混 匀 。8.6温育：置 37 温育 60 分钟，室温平衡 5 分钟。8.7洗涤：用洗涤液充分洗涤 5 次，洗涤完扣干（每次应保

4、持 30-60 秒的浸泡时间）。8.8显 色 ： 每 孔 加 入 底 物 A、 B 各 50 l ， 轻 拍 混 匀 ，置 37 暗处 15 分钟。8.9终 止 ： 每 孔 加 终 止 液 50 l ， 混 匀 。8.10测 定 ： 用 酶 标 仪 单 波 长 450nm 或 双 波 长450/630nm测定各孔 OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30 分钟内完成测定，并记录结果）。9. 结果判断与分析9.1临界值（C.O. ）的计算：临界值=阴性对照孔OD值 N2.1 ，阴性对照 OD均值大于 0.1 时应重新试验，小于 0.05 时以 0.05 计算。9.2结 果 判 定 ： 样 品

5、 OD值 S/C.O=1者 为 HBsAb 阳 性样品 OD值 S/C.O1者 为 HbsAb 阴 性10.质量控制每 次 试 验 用 含 30mIu/mlHBsAb的 质 控 血 清 同 步 检测，S/CO 值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11. 参考范围阴性或阳性12. 临床意义HBsAb 阳 性 表 明 存 在 HBV 的 保 护 性 抗 体 。13. 操作性能：灵敏度高，特异性好。14. 方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。15. 注意事项15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白

6、对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗 净 。15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去 12滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4所有样品都应按传染源处理。15.5封口膜使用说明15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性 。15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待