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文档简介
1、1,Tetramer(四聚体)技术,2,原理 应用 产品,3,外源性抗原加工 递程,4,5,6,抗原特异性CTL的分析方法,51Cr释放实验,PCR法,ELISPOT,扩增特异T淋巴细胞受体,Tetramer,间接法、需大量的特异性CTLs作为效应细胞 需体外扩增、周期长,敏感性低,敏感性高 但只能用于已知TCR基因型的特异性CTLs检测,迅速、灵敏、直接、特异性强、方法简单、无需刺激,目前已成为定量检测特异性 CD8+T细胞的金标准,有限稀释法(LDA,T细胞反应时敏感性、特异性和可重复性都很高,操作简单迅速,需要少量标本,7,Tetramer 与ELISPOT区别? Tetramer+的
2、T细胞并不能分泌细胞因子和/ 或无细胞毒活性;而某些CD8+T细胞能分泌细胞因子和/或细胞毒活性 ,却不能和tetramer结合。表明单独采用tetramer技术能精确反映机体具有高度抗原特异性的 CD8+T细胞群 ,但并不能精确反映机体的保护性免疫状态 ,必须结合相应的功能实验进行综合评估,8,原理 应用 产品,9,1.感染性疾病,HIV-AIDS, EBV, CMV, HPV, HBV, HCV, IV, Measles, Malaria, TB and RSV,含有HIV-I型病毒包膜肽等三种抗原肽:HIV特异性CTL数量与血浆中RNA病毒量有明显的负相关,而与产毒性感染细胞的清除率无关
3、。 慢性HCV感染患者的特异性CTLs数量明显少于急性HCV感染和已康复患者,10,2.肿瘤,Breast, Prostate, Melanoma, Colon, Lung, Cervical, Ovarian and Leukemia,用黑色素瘤抗原诱导潜在的肿瘤特异性T细胞用Tetramer分离,富集,11,3.移植,GVHD(移植物抗宿主反应):受体与供体的次要组织相容性抗原(mHags)的不同引起,在骨髓移植后早期出现(14天内),造成骨髓移植失败-HLA-mHags肽四聚体监测mHags特异性CTL,以了解对GVHD的临床治疗效果. HLA-A2/pp65 Tetramer监测肾移植患者感染CMV后的免疫应答能力,EBV and CMV,12,4.自身免疫性疾病,Diabetes, Lyme disease, Multiple sclerosis, Rheumatoid arthritis, Autoimmune vitiligo,13,原理 应用 产品,14,Tetramer难点,合成及稳定MHC类分子。 抗原表位的选择,公司合成,15,荷兰 (Sanquin) 人:FLU、HIV、CMV、EBV、RSV、HBV、HPV、tumour 鼠:OVA(卵清蛋白) 、TRP-
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