食品微生物实验室的基本要求(课堂PPT)

1、1,食品微生物实验室的基本要求与管理,严纪文 ,2,GB4789.1-2010总则：3.1环境,3.1.1实验室环境应不影响检测结果的准确性。 3.1.2实验室的工作区域应与办公室区域明显分开。 3.1.3实验室工作区域面积和总体布局应能满足从事检测工作需求，实验室布局应采用单方向工作流程，避免交叉污染。 3.1.4实验室内温度、湿度、照度、噪声和洁净度等应符合工作要求,3,3.1.5一般样品检测应在洁净区域(包括超净工作台或洁净实验 室)进行，洁净区域的应有明显标示。 3.1.6病原微生物分离鉴定工作应在二级生物安全实验室(Biosafety level 2 BSL-2) 进行,4,洁净实验

2、室与BSL-2实验室的区别,百级洁净实验室只针对实验环境提出洁净要求，不提供对人员或环境的生物安全保护。(超净工作台不能替代生物安全柜)。 普通的食品微生物实验(不进行病原微生物分离与鉴定)只要求在洁净实验室进行。 进行病原微生物分离与鉴定必须在BLS-2实验室中进行,5,什么是生物安全实验室,是通过规范的实验室设计建造、实验设备的配置、个人防护装备的使用（硬件）、严格遵从标准化的操作程序和管理规程等（软件）： 确保操作生物危险因子的工作人员不受实验对象的伤害； 确保周围环境不受其污染； 确保实验因子保持原有本性所采取综合措施的实验室,6,生物安全防护的基本原则(三要素,安全设备、个体防护装置

3、和措施 。 实验室的特殊设计和建设要求 。 严格的管理制度和标准化的操作程序和规程目标确保实验室工作人员不受实验对象侵染， 确保周围环境不受其污染的目的,7,生物安全实验室设施的基本要求,必须为实验室安全运行、清洁和维护提供足够的空间。 实验室的墙壁、天花板和地面应光整、易清洁、防渗漏并耐化学品和消毒剂的腐蚀。地板应防滑。 实验台面应防水，并可耐消毒剂、酸、碱、有机溶剂和中等热度的作用,8,应保证实验室内所有活动的照明，避免不必要的反光和闪光。 实验室器具应坚实耐用，在实验台、生物 安全柜和其它设备之间及其下面要保证有足够的空间以便进行清洁。 应当有足够的储存空间。 应当有足够的储存空间摆放随

4、时使用的物品 (试剂、气体等)。 在实验室工作区外应当有存放外衣和私人物品的设施。还应当有供长期使用的存储空间,9,每个实验室都应有洗手池，并最好安装在出口处，尽可能用自来水(要有防止嚼齿动物和节肢动物侵扰的装置)。 实验室的门应有可视窗，并达到适当的防火等级，最好能自动关闭。 二级生物安全水平时，应在靠近实验室的位置配备高压灭菌器或其它清除污染的工具。 安全系统应当包括消防、应急供电、应急淋浴及洗眼设施,10,应当考虑设置机械通风系统，以使空气向内单向流动。如果没有机械通风系统，实验室窗户应当能够打开，同时安装防虫纱窗。 在实验室内应有基本生物安全设备：生物安全柜(一级或二级）、移液助器、乳

5、胶手套等,11,百级洁净实验室与BSL-2实验室的区别,百级洁净实验室的洁净度要求,12,BSL-2实验室的主要技术指标,注：BSL-3主要实验室相对于大气的最小负压不应小于-30Pa，BSL-4主要实验室相对于大气的最小负压不应小于-40Pa。本表中的噪声不包括生物安全柜、动物隔离器的噪声，如包括上述设备的噪声，则最大不应超过68dB(A,13,二级生物安全防护水平(BSL2,二级生物安全防护水平是指实验室的操作、安全设备、和设施适用于操作我国的第三类（少量二类）危害的致病微生物。 二级生物安全防护水平适合于从未知病原的人身上取血、体液和组织的检测和研究（可能含有高致病微生物,14,BSL2

6、：实验室设施(二级屏障,15,BSL-2实验室,16,生物安全标识,17,生物安全柜,18,19,注意乳胶手套的使用,20,千级无菌实验室,21,风淋室,22,食品微生物无菌室的基本要求及管理,无菌室的基本建设要求 根据本实验室所涉及的生物安全等级，无菌室的设计应符合GB 50364(生物安全实验室建筑技术)和GB 19489(生物安全通用要求)的相关要求。 无菌室大小应满足检验工作的需要。内墙为浅色，墙面和地面应光滑，墙面与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，无死角，易于清洁与消毒,23,无菌入口处应开设缓冲间，缓冲间内应安装非手动式形关的洗手盆，并可有毛巾。缓冲间应有足够的面积以保证操作

7、人员更换工作服和鞋帽。 无菌室内工作台的高度约80cm，工作台应保持水平。工作台面应无渗漏，耐腐蚀，易于清洁、消毒。 无菌室内光照应分布均匀，工作台面的光照度应不低于540lx,24,无菌室内应具备适当的通风和温度调节条件。无菌室的推荐温度为20，相对湿度为40%60%。 缓冲间及操作室内均应设置达到空气消毒效果的紫外灯或其它适宜的消毒装置,25,无菌室的管理 无菌室在使用前和使用后应进行有效的消毒，消毒方法参见附录D。 无菌室的消毒效果应至少每两周验证一次。 应制定清洁、消毒、灭菌、使用和应急处理程序。 应建立环境监测结果，并归档保存。 不符合规定时应立即停止使用,26,微生物实验室消毒处理

8、方法,无菌室紫外线消毒 在室温2025时，220V30W紫外灯垂直1.0m处的253.7nm紫外线辐射强度应70W/cm2，低于此值时应更换。适当数量的紫外灯，确保平均每立方米应不少于1.5W。 紫外线消毒时，无菌室内应保持清洁干燥,27,在无人条件下，可采取紫外线消毒，作用时间应30min，室内湿度20或40、相对湿度60%时，应适当延长照射时间。 用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面受到紫外线的直接照射，且应达到足够的照射剂量。 人员在关闭紫外灯后至少30min方可入内操作。 按照ISO18953的规定，评价紫外线的消毒与杀菌效果,28,无菌室臭氧消毒 封闭无菌室内，无人条件下，采用20m

9、g/m3浓度的臭氧，作用时间应30min。消毒后臭氧浓度0.2mg/m3时方可入内操作。 按照GB/T18202的规定，检测室内臭氧浓度,29,无菌室空气灭菌效果验证方法(沉降法) 在消毒处理后与开展检验活动之前期间采样。 取样位点的选择应基于人员流量情况和做试验的频率。一般情况下，无菌室面积30m2时，从所设定的一条对角线上选取3点，即中心1点，两端各距墙1m处各取1点；无菌室面积 30m2时，选取东、西、南、北、中5点，其中东点、西点、南点、北点均距墙1m,30,31,采样点设置图,32,在所选位点，将平板计数琼脂平板(90mm)或置于距地面80cm，开盖暴露15min，然后，置36 1的

10、恒温培养箱培养48h 1h。如果检测某目标霉菌或细菌，则可用选择性琼脂平板(如PDA、PALCAM等) 。 确定平板上的菌落数，如大于所设定的风险值，应分析原因，并采取适当措施,33,培养基与试剂的消毒与灭菌 培养基通常应采用高压温热灭菌法，121灭菌15min，特殊培养基按使用者的特殊要求进行灭菌(如含糖培养基，115 灭菌20min)。 部分培养基(如嗜盐琼脂培养基、胆硫乳培养基等)，只能煮沸灭菌。 对热敏感的培养基或添加物质，应采用膜过滤的方法过滤除菌。 即用型培养基不需灭菌，应参见相关国际标准或供应商使用说明书，直接使用,34,器具与设备的消毒灭菌 温热灭菌：采用高压灭菌器， 121灭

11、菌20min，适用于玻璃器皿、移液器吸头、塑料瓶等。按照GB15981的规定，评价高压灭菌器的杀菌效果。 干燥灭菌：采用干燥箱灭菌，160，灭菌2h，适用于玻璃器皿和不锈钢器具等,35,液体消毒剂消毒：使用适当浓度自配或商业液体消毒剂对工作台面、器具或设备表面进行消毒。 可按照GB15981的规定，评价自配或商业液体消毒剂的消毒效果。 可按照ISO18953的规定，监测工作台面、器具或设备表面的消毒效果,36,实验室废弃物的处理 对于培养物及其污染的物品(如培养基、测试条、生物鉴定管、血清学鉴定用玻片、用过的移液器吸头、细菌培养皿、注射器等)，应使用适当浓度的自配或商业液体消毒剂对其处理一定时间，或121高压灭菌至少30min，或其他有效处理措施。将处理物倒入特殊标志的垃圾袋内，直接送到指定地点,37,对于实验动物尸体及相关废弃物，按照GB149