甲氧西林葡萄球菌研究论文_优秀论文

1、 甲氧西林葡萄球菌研究论文摘要目的：比较分析耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)仪器检测与纸片扩散检测的检出率。方法：采用KB纸片扩散法, 全自动微生物分析仪法, 并以琼脂稀释法为标准对临床分离的63株葡萄球菌进行检测, 比较3种方法的检出率。结果：对63株葡萄球菌(凝固酶阳性50株, 凝固酶阴性13株)3种方法检出率分别为60.3%、57.1%、50.8%。含4%氯化钠(NaCl)MH平板药敏纸片扩散法和VITEK32型自动微生物鉴定系统法差异无显著性(P0.05), 与琼脂稀释法差异无显著性(P0.05), 而仪器法与琼脂稀释法差异无显著性(P0.05)。结论：KB纸片扩散法,仪器法和作为MRS检

2、测推荐方法的含盐琼脂平板稀释法对MRS的检出率,三者差异均无显著性, 仪器法与KB纸片扩散法均可用于临床常规实验室MRS的检测。关键词耐甲氧西林葡萄球菌；纸片扩散法；仪器法；琼脂稀释法耐甲氧西林葡萄球菌(MethicillinresistantStaphylococcus, MRS)所致院内感染已成为全球范围内一个越来越严重的问题1, 有效预防和控制其感染的关键是及时准确地检出MRS, 为临床合理选择抗生素提供依据2, 因而快捷、准确的检测方法对快速采取有效的感染控制措施和MRS感染流行病学调查十分重要。MRS的检测方法有苯唑西林纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂扩散法、Etest法、仪器法及PCR

3、技术检测mecA基因等3, 我们将临床分离的63株葡萄球菌用含4%氯化钠(NaCl)MH平板苯唑西林纸片扩散法和VITEK32型自动微生物鉴定仪法进行检测比较, 并以含6g/ml苯唑西林的琼脂稀释法为标准, 评价其准确性。1材料与方法1.1材料1.1.1菌株及其来源自2006年1月至2006年5月从江医二附院临床患者的痰、血、尿、脓液、前列腺液及阴道分泌物等标本, 经常规分离得到63株葡萄球菌, 包括凝固酶阳性葡萄球菌50株, 凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)13株。另MRS阳性参考菌株ATCC(R)43300, MRS阴性金黄色葡萄球菌ATCC25923, 购自卫生部临检中心。1.1.2苯唑西林

4、纸片购自北京天坛生物制品有限公司, 苯唑西林标准品购自重庆药友制药有限公司, SDS琼脂糖、溴化乙锭、溶菌酶、蛋白酶K为美国Sigma产品, 丙烯酰胺、双丙烯酰胺TEMED和TBE为美国Gibcobrl公司产品。1.1.3仪器法国生物梅里埃公司生产的VITEK32型鉴定系统及配套的GPSSV葡萄球菌药敏检测卡。1.2方法1.2.1含4%NaClMH平板纸片扩散法由于苯唑西林较甲氧西林稳定、不易失活, 通常用苯唑西林代替甲氧西林测定葡萄球菌。配制0.5麦氏单位菌液接种于含4%NaCl的MH平板, 贴1g/片苯唑西林药敏纸片, 35、24h观察结果(CNS孵育48h)金黄色葡萄球菌(SA)抑菌圈1

5、3mm为敏感, 11mm12mm为中介, 10mm为耐药, 凝固酶阴性葡萄球菌18mm为敏感, 17mm为耐药。1.2.2琼脂稀释法NCCLS推荐为测定耐甲氧西林葡萄球菌的参考方法, 在含4%NaCl、6g/ml苯唑西林MH平板中点种0.5麦氏单位菌液, 经35、24h孵育检查琼脂表面有无细菌生长, 只要有一个菌落生长即判为MRS。1.2.3仪器检测挑取待检菌落, 严格参照GPSSV卡说明书配制一定浓度菌悬液, 置备GPSSV药敏卡上机, 用VITEK32型全自动微生物鉴定仪检测结果。1.2.4质量控制以金黄色葡萄球菌ATCC(R)43300为MRS阳性参考菌株, 金黄色葡萄球菌ATCC259

6、23为MRS阴性参考菌株及药敏质控菌株与实验菌株同时进行检测。2结果3种方法对MRS的检出率见表1。表13种方法对MRS的检出率（略）对3种方法MRS检出率进行2检验, 含4%NaClMH平板药敏纸片扩散法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异无显著性(2=1.16, P0.05),VITEK32型仪器检测法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异也无显著性(2=0.51, P0.05),同时纸片扩散法MRS检出率与VITEK32型仪器检测法MRS检出率差异也无显著性(2=0.13, P0.05)。3讨论目前国内外虽然用以检测MRS的方法很多, 由于MRS本身对甲氧西林耐药存在有不均一性,

7、且甲氧西林不稳定, 故常用苯唑西林代替甲氧西林来检测MRS。由于纸片扩散法操作简便、价格低廉, 不需要特殊仪器设备, 可以和普通药敏实验同时进行, 在多种MRS检测方法中, 目前很多医院临床常规微生物实验室仍在采用这种方法, 从我们的实验结果看, 纸片扩散法与被NCCLS推荐为参考方法的琼脂稀释法对MRS检出率差异无显著性, 因此可以用于临床常规微生物实验室,对MRS进行常规检测。VITEK32型GPSSV药敏卡方法简单、快捷, 从结果看其MRS检出率与琼脂稀释法差异无显著性, 虽然其与纸片扩散法MRS检出率也无明显差异, 但其检测速度比纸片扩散法更快捷, 可以及时给出准确的报告,节约了时间,

8、因此评估GPSSV药敏卡的准确性, 为临床找出一种准确而简单、快捷的筛选MRS的方法是极有意义的, 且VITEK32型微生物鉴定药敏分析系统配套使用的GPSSV卡葡萄球菌药敏检测, 其苯唑西林检测孔含有4%NaCl, 符合NCCLS推荐的检测MRS的方法标准4, 因此, 仪器法GPSSV卡可用于葡萄球菌耐甲氧西林的检测, 且简便准确、快速。所以纸片扩散法和仪器法均可用于医院常规实验室MRS检测,但对有条件的实验室建议采用仪器法, 目前也出现了一些更准确可靠的方法, 即对耐甲氧西林葡萄球菌进行基因层次的分型检测, 并也出现了商品化的几种mecA基因乳胶检测法5, 也是目前可采用的较好的方法。参考

9、文献：1MulliganME.MurrayleisureKA.RibnerBS.etal.MethicillinresistantStaphylococcusaureus:aconsensusreviewofthemicrobiologyPathogenesisandepidemiologywithimplicationsforpreventionandmanagementAMJJ.Med1993;94:313.2马纪平, 苏建荣.耐甲氧苯青霉素葡萄球菌J.中华检验医学杂志, 1996, 19：187189.3赵玉坤, 娄金丽, 白华, 等.耐甲氧西林葡萄球菌的临床检测J.中华检验医学杂志,