显微镜的发展与生命科学2徐润林.ppt

1、现代生命科学进展,显微镜的发展与生命科学,中山大学生命科学学院 徐润林,自然科学的各个门类要解决的两大问题: 结构 功能,考古研究表明：公元前2600年的古埃及人就已经能够用天然的水晶石打磨成透镜,Pliny (2379 A.D.)描述了罗马医生用凸透镜聚太阳光的现象,罗马的哲学家 Seneca (4 A.D. - 65 B.C) 就提到装满水的玻璃球可以使物体放大且看的更清楚些,Ibn Al Hatham (Alhazen, 962-1038)是第一个真正理解到凸透镜产生放大图象原理的人。被后人称为“光学之父,Roger Bacon， 英国 几何学、算术、音乐和天文学家 (1214-1292

2、 C.E.,接受了前人有关透镜的理论并在自己的研究中使用了透镜。“Mathematics is the door and the key to the sciences.”是他的名言,Giambattista Della Porta 意大利 (1535-1615) 1589出版了一套科普丛书:Natural Magick , 其中的一本Of Strange Glasses是关于实际中人们如何用玻璃矫正视力的,复式光学显微镜的诞生,1590 年制出的第一个复式显微镜,荷兰的Janssens父子在显微镜的发展史中起了非常重要的重要。Z. Janssens被认为第一台复式光学显微镜的发明者,Gali

3、lei Galileo (1564-1642,虽然此时的显微镜能够看到的物体只被放大了十倍左右，他在显微镜下看到苍蝇如同羊羔一样大,Galileo设计的显微镜图,复制品,Cornelis Cornelis Drebbel 荷兰 (1572-1633,Drebbel集画家、雕刻家、玻璃艺人和炼丹人于一身。制作了许多的透镜和望远镜。 几乎是同时也制出复式光学显微镜,瑞典诗人 G. Stierhielm 他热衷于用放大镜观察动植物,由于教会的牧师被他用放大镜观察到的跳蚤吓坏了，宣布他是一位男巫。 在当时的女皇Christina的干预下，他才没有被烧死,瑞典女皇Christina 1626-1689,

4、科学的进步总是坎坷的,意大利的Francesco Stelluti (1577 1646)利用当时的放大手段，认真地观察和研究了蜜蜂的形态结构。之后他又研究了线虫的血液、纺织物纤维和蜘蛛卵的结构,1625年,微观生物学的诞生,1602-1680,德国人Athanasius Kircher用显微镜研究了动物腐烂现象和疾病。 他与Stelluti共同成为了微观生物学的开创者,光学显微镜与显微镜学新纪元的出现,在前人的理论和实践成果的基础上，17世纪是光学显微镜制造技术和研究水平得到快速发展的年代,这5位各自利用显微镜进行了深入的生物学研究，并对显微镜技术的发展做出了重要的贡献,von Leeuwe

5、nhoek 1632-1723,Marcello Malpighi 1628-1694,Robert Hooke 1635-1702,Jan Swammerdam 1637-1680,Nehemiah Grew, 1641- 1712,von Leeuwenhoek的显微镜和它的工作原理图,von Leeuwenhoek在使用他的显微镜,von Leeuwenhoek看到的动物精子细胞,Diatom,水中的单细胞生物,Hydra sp,植物的组织,von Leeuwenhoek还观察过晶体、矿物、不同来源的水、牙垢、唾液和火药等。 除此之外，他还研究过蚤、蚜虫、蚂蚁的生活史；观察过轮虫、各种消

6、化物、横纹肌；描述过多种动物的红血球和血液循环系统。 von Leeuwenhoek是个守口如瓶的人，他很少与别人交流有关的研究。他的许多成果在19世纪后期之前并不被人所重视,Malpighi 绘制的Anatome plantarum,Malpighi是动物和植物材料显微组织技术的创始人,揭示了动物肾的基本结构单位,Malpighi也是动物组织学的奠基人之一,跳蚤,Hooke和他的显微镜,植物的组织,Hooke观察到的苍蝇,首次提出cell一词,Hooke的名作：显微图像,Jan Swammerdam的显微镜,Swammerdam 观察到的昆虫和蝎子,Hermann Boerhaave (16

7、68-1738,他将Swammerdam的手稿，买下后于1737年编辑出版,Swammerdam是17世纪第一位真正昆虫学家。他曾收集了3000多种的活昆虫标本。 而且他还在显微解剖技术和实验手段上做出了贡献，他发明了专门的解剖镜用于他的研究中,The Anatomy of Plants1684年,Nehemiah Grew在植物显微结构的研究使得后人发现了植物的性别特征。他的工作领先同行100年,Nehemiah Grew还在动物的显微解剖上做出了巨大的贡献， 他比较了不同动物消化系统的结构，并首次使用“比较解剖” 一词,Nehemiah Grew发表的有关动物解剖的专著,上述的这五位科学家

8、在显微镜技术和显微观察方面的成果使人类认识自然的能力得到大大提高，特别是在生物进化、起源、发育、人类病害、生物性别分化以及生物分类等多个领域都取得了巨大的成果，使整个社会对生物的认识有了新的内涵，对后来的生物学发展有着不可磨灭的功劳,17世纪的各式光学显微镜,18世纪的各式光学显微镜,此时的显微镜上，出现了便于采光的反光镜,18世纪末的光学显微镜,19世纪中叶前，在显微镜技术上有一个重要问题始终困扰着科学家们，那就是透镜产生的色差以及球面的像差。这些问题的出现使得观察者在观察时看到了许多的假象,光学显微镜技术的改进,英国的Dollond 是第一位制造出消色差透镜的人。其技术和原理对于以后显微镜

9、技术的提高提供基本的保证,意大利的G. B. Amici (17861863) 1827年发明了反射显微镜可以消除色差,19世纪的显微镜,19世纪中叶的光学显微镜,虽然Hooke于1679年就提出利用“浸没原理”来提高显微镜的分辨率，但真正引入该原理的是英国人David Brewster (1781-1868,他建议使物镜前面浸没在一种液体里，而所要观察的物体也在此液体中,光学显微镜发大倍数与分辨率的提高,Ernst Abbe 1840-1905,Carl Zeiss 1816-1888,他们改进了显微镜浸没系统，并尝试了300多种液体，最终找到了香柏油作为这种浸没介质,显微镜浸没原理,Abb

10、e 设计的由八个透镜组成的油镜，用以消除色差,油镜下的细胞结构,寄生的Plasmodium,植物的细胞内部结构,油镜下硅藻壳的结构,油镜下的微生物,酵母菌,细菌,19世纪末，德国学者August Khler计算了要获得最佳的观察效果，显微镜的光源与集光器间合适的距离,20世纪初期的光学显微镜,第一台Nikon光学显微镜,袖珍显微镜,用于特殊用途的光学显微镜,倒置显微镜,荧光显微镜,荧光显微镜的工作原理,荧光显微镜的观察结果,脑虹,德国的F. Zernike (1888-1966)于1934建立了相差显微镜的原理。 1953年获诺贝尔物理学奖,John Tyndall 1820-1893,物理学

11、中有一个“丁达尔效应”，也就是光的散射现象或称乳光现象。 这个原理被引入到显微镜的制造中就出现了暗视野显微镜,暗视场显微镜配件,微分干涉差显微镜的工作原理,共聚焦激光显微镜,工作原理,蛋白质,细胞胞器结构,哺乳类视网膜上感光细胞与两极细胞(红色)间的联系,显示动物细胞内生命活动 含有胍丁胺的纤维(红色) 围绕着神经元 (绿色),显示动物成纤维细胞中的具活力线粒体,不同功能显微镜观察到的轮虫神经系统,结合多角度、多层面的观察结果重构的轮虫神经系统结构,光学显微镜的放大倍率不过几千倍，其分辨率在理论上不能小于0.2微米，这是因为受光波波长的局限，即可见光的波长不能小于4000埃。为此，它促使人们去

12、寻找更短波长的照明物质,电子显微镜的问世,根据物理学中波动学说，运动着的电子可以看作是一种电子波。电子运动的速度越高，电子波的波长越短。例如受200千伏高压加速的电子，其波长仅为0.025埃。这表明电子是一种理想的新光源,20世纪2030年代，证实了轴对称分布的电磁场具有能使电子束偏转、聚焦的作用，从而找到了相当于光学显微镜中的透镜电子透镜。这就是具有高分辨率的电子显微镜产生的基础,电子显微镜是20世纪最重要的发明之一。由于电子的速度可以加到很高，电子显微镜的分辨率可以达到纳米级(10-9m)。 电镜的放大倍率可达百万，可分辨样品的最小细节为几个埃,世界上第一台透射电子显微镜 (1938,Er

13、nst Ruska 1906,Max Knoll (1897-1969,德国,Ernst Ruska分享1986年的诺贝尔物理学奖,电子显微镜的工作原理,透射电镜,扫描电镜,Charles Oatley UK，1904,世界上第一台扫描电子显微镜 1952年,第一台商业电子透镜,扫描电镜是介于透射电镜和光学显微镜之间的一种微观性貌观察手段。 扫描电镜的优点是： 有较高的放大倍数，20-20万倍之间连续可调； 有很大的景深，视野大，成像富有立体感，可直接观察各种试样凹凸不平表面的细微结构； 试样制备简单,早期的扫描电镜的观察结果,动物滤食器的结构,复眼结构,植物病毒颗粒,现代的电子显微镜,核酸分

14、子,噬菌体,据称是引起“非典型肺炎”的元凶,冠状病毒颗粒,Gerd Binnig 1947,Heinrich Rohrer 1933,因为发明扫描隧道显微镜而分享1986年的诺贝尔物理学奖,第一台扫描隧道显微镜,在生物学中的应用：研究核纤层蛋白分子的装配、溶菌酶结构、动物金属硫蛋白(并探讨它们在生物学中的作用)、抗原抗体复合物的结构，阐述有关的免疫学问题,特点：分辨率为1埃，观察物质表面的三维图像,扫描隧道显微镜工作原理图,在扫描隧道显微镜的基础上，人们又研发出了原子力显微镜、激光力显微镜、磁力显微镜、静电力显微镜、弹道电子发射显微镜、扫描离子显微镜、扫描近场光学显微镜和光子扫描隧道显微镜等。 分辨率也逐步提高,激光力显微镜,原子力显微镜,磁力显微镜,双光子激光扫描显微技术（two-photon laser-scanning microscopy，TPLSM）对胚胎发育头3h中的决定果蝇基本结构前轴和后轴的基因Bicoid表达梯度进行定量,应用双光子激光扫描显微技术, 可以记录