无菌验证方案文档

1、SP-YZ-HY-FA-002-0320ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法的方法验证（方案）*药业有限公司文件系统标准技术规程题目：20ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法验证编号：SP-YZ-HY-FA-002-03页数：1/11制定部门：质量保证部版本： 第三版制定人：制定日期：审核人：审核日期：批准人：批准日期：复印数：执行日期：分 发： 生产技术部、 质量保证部标 题正 文一验证申请 公司验证委员会： 由于我公司计划将山东西王药业有限公司生产的无水葡萄糖原料用于本公司的葡萄糖注射液产品生产，那么，原有的葡萄糖注射液检验操作规程(SOP-HY-CP01-002-02)和无菌检查法标准操作规

2、程(SOP-HY-048-02)是否适合使用该公司的无水葡萄糖原料生产的葡萄糖注射液产品的无菌检验，因此，则需按照中国药典2010年版二部无菌检查法进行方法验证实验。为此，化验室制定了20ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法验证方案，今提出验证申请，请求批准，以便组织验证。(验证方案附后) 申请部门： 年 月 日题目：20ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法验证编号：SP-YZ-HY-FA-002-03页数：2/11批准人：批准日期：执行日期：标 题正 文二验证方案【概述】1.方案简介 验证方案包括验证目的、验证范围、验证人员及职责、验证标准、验证内容、总结以及再验证。其中方法验证实验是按照中国药

3、典2010版二部无菌检查法项下的规定及要求进行操作，内容有：培养基的制备、菌悬液的制备、培养基无菌性检查、培养基灵敏度检查、薄膜过滤法方法验证试验、供试品无菌检查。2.规程简介 本公司制定的葡萄糖注射液检验操作规程(SOP-HY-CP01-002-02)和无菌检查法标准操作规程(SOP-HY-048-02)是依据中国药典2010年版二部无菌检查法编写的，无菌检查应采用薄膜过滤法。无菌检查方法简述为：过滤前先用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液约50ml润湿滤膜，再取供试品60支,直接过滤于半封闭式薄膜过滤器中，过滤后，取上述冲洗液冲洗滤膜三次，每次100ml，冲洗后，取出滤膜，将其分成三等份，

4、分别置于两支50ml硫乙醇酸盐流体培养基和一支改良马丁培养基内，其中一支硫乙醇酸盐流体培养基做阳性对照，选择金黄色葡萄球菌为对照菌，含菌量小于100cfu。按规定温度培养十四天，同时每天观察并记录实验结果。【验证】1.验证目的 证实葡萄糖注射液检验操作规程(SOP-HY-CP01-002-02)和无菌检 查法标准操作规程(SOP-HY-048-02)适于使用该公司生产的无水葡萄糖原料生产的葡萄糖注射液产品无菌检验，即确认依据上述规程检验，供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性被充分消除到可以忽略不计。2.验证范围 本公司生产的葡萄糖注射液(20ml:10g)产品的无菌检查法的验证

5、。题目：20ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法验证编号：SP-YZ-HY-FA-002-03页数：3/11批准人：批准日期：执行日期：标 题正 文3.验证人员及职责 组长：* 职务：化验室主任 职责：编写验证方案和报告，组织实施验证成员：* 职务：无菌操作工 职责：操作与记录4.验证标准 按照上述两个规程对用该公司的无水葡萄糖原料生产的葡萄糖注射液产品进行无菌检验，供试品检验结果与对照管比较，含供试品各容器中的试验菌均生长良好，并且与阳性对照容器内的培养结果相似。5.验证内容 5.1验证用培养基的准备 （1）硫乙醇酸盐流体培养基 （2）改良马丁培养基 （3）营养肉汤培养基 （4）营养琼脂培养基

6、 （5）改良马丁琼脂培养基5.2 实验用菌种的准备 （1）金黄色葡萄球菌CMCC(B)26 003（2）枯草芽孢杆菌CMCC(B)63 501（3）铜绿假单胞菌CMCC(B)10 104（4）生孢梭菌CMCC(B)64 941 （5）白色念珠菌CMCC(F)98 002（6）黑曲霉CMCC(F)98 003（7）大肠埃希菌CMCC(B)44 102以上所用菌株传代次数均不得超过5代。5.3 稀释液、冲洗液 （1）pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 （2）0.9%无菌氯化钠溶液题目：20ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法验证编号：SP-YZ-HY-FA-002-03页数：4/11批准人：批准日期：执

7、行日期：标 题正 文 （3）0.05%（ml/ml）聚山梨酯805.4检验仪器1) 电热恒温隔水式培养箱2) 生化培养恒温箱3) 压力蒸汽灭菌柜4) 集菌仪5) 半封闭式过滤器6) 净化工作台5.5供试品 20ml:10g的葡萄糖注射液产品三批 备注：上述产品用的原料为：山东西王药业有限公司生产的无水葡萄糖5.6培养基的适用性检查5.6.1培养基制备 各种培养基及冲洗液，依法制备（中国药典2010年版二部附录 H ）5.6.2培养条件 硫乙醇酸盐流体培养基管 置30-35培养 改良马丁培养基管置23-28培养5.6.3 试验菌液的制备（1）接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃

8、希菌的新鲜培养物到营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基中，在3035培养1824小时，分别取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml中含菌小于100CFU的菌悬液，用平板法计数。2）接种生孢梭菌的新鲜培养物到硫乙醇酸盐流体培养基中，在3035培养1824小时，培养物用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成题目：20ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法验证编号：SP-YZ-HY-FA-002-03页数：511批准人：批准日期：执行日期：标 题正 文（每1ml中含菌小于100CFU的菌悬液，用平板法计数。（3）接种白色念珠菌的新鲜培养物到改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，在23

9、28培养2448小时，培养物用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml中含菌小于100CFU的菌悬液，用平板法计数。（4）接种黑曲霉的新鲜培养物到改良马丁琼脂斜面培养基上，在2328培养7天，培养物加入5ml含有0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，用白金耳轻轻振摇将孢子洗脱，用管口带有无菌纱布的能过滤菌丝的无菌毛细吸管将孢子悬液吸入无菌试管中，再用含有0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml中含菌小于100CFU的菌悬液,用平板法计数。记录见附表一5.6.4培养基无菌性检查5.6.4.1方法 按照无菌检验法标准操作

10、规程操作，取已配制好的无菌检查用的硫 乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基，每批随机取不少于5支，每支培养基的装量是50ml,置规定温度培养14天，应无菌生长。注：本检查可在供试品无菌检查前或与供试品无菌检查同时进行。5.6.4.2记录 培养期间逐日观察并记录是否有菌生长。记录见附表二5.6.5 培养基灵敏度检查 （1）取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，每支接种量为1ml（含菌量小于100cfu），另一支不接种作为空白对照，培养3天。逐日观察结果。（2）取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种白色念珠菌、黑

11、曲霉各2支，每支接种量为1ml（含菌量小于100cfu），另一支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。题目：20ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法验证编号：SP-YZ-HY-FA-002-03页数：6/11批准人：批准日期：执行日期：标 题正 文5.6.5.1结果判定 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。 5.6.5.2试验记录 见附表三5.7方法验证试验5.7.1验证项目 无菌检查5.7.2验证方法（薄膜过滤法） 先用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液约50ml润湿滤膜，再取供试品20支,直接过滤于半封闭式薄膜过滤器中，过滤后，取上述冲洗液

12、冲洗滤膜三次，每次100ml，在最后一次冲洗液中加入试验菌（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉）1ml（含菌量小于100cfu），冲洗后，取出滤膜，置于50ml硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基管内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度培养3-5天。同时每天观察并记录实验结果。5.7.3操作步骤5.7.3.1 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌试验菌供试 品管及对照管的制备及培养实验供试品管制备及培养：取供试品4份（20支/份），润湿滤膜后，分别过滤于薄膜过滤器中（半封闭式），过滤后，取冲洗液冲洗三次，每次10

13、0ml，在最后一次冲洗液中加入试验菌（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌）1ml（含菌量小于100cfu），冲洗后，取出滤膜（共计4张膜），分别置于50ml硫乙醇酸盐流体培养基管中，3035培养5天。同时每天观察并记录实验结果。题目：20ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法验证编号：SP-YZ-HY-FA-002-03页数：7/11批准人：批准日期：执行日期：标 题正 文对照管制备及培养：分别取加入上述等量试验菌的冲洗液100ml，过滤于薄膜过滤器中（半封闭式），过滤后，取出滤膜（共计4张膜），分别置于50ml硫乙醇酸盐流体培养基管中，作为对照。3035培养5天。同时每天观察并记

14、录实验结果。5.7.3.2 白色念珠菌、黑曲霉试验菌供试品管及对照管制备及培养实验供试品管制备及培养：取供试品2份（20支/份），润湿滤膜后，分别过滤于薄膜过滤器中（半封闭式），过滤后，取冲洗液冲洗三次，每次100ml，在最后一次冲洗液中加入试验菌（白色念珠菌、黑曲霉）1ml（含菌量小于100cfu），冲洗后，取出滤膜（共计2张膜），分别置于50ml改良马丁培养基管中， 2328培养5天。同时每天观察并记录实验结果。对照管制备及培养：分别取加入上述等量试验菌的冲洗液100ml，过滤于薄膜过滤器中（半封闭式），过滤后，取出滤膜（共计2张膜），分别置于50ml改良马丁培养基管中，作为对照，2328

15、培养5天。同时每天观察并记录实验结果。5.7.4试验标准 与对照管比较，如含供试品各管中的试验菌均生长良好，并且与对照管的培养结果相似，则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，该供试品可以照此检查法和检查条件进行供试品的无菌检查。5.7.5记录 见附表四5.8供试品无菌检查5.8.1供试品 20ml:10g的葡萄糖注射液产品三批 5.8.2检查方法（薄膜过滤法）先用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液约50ml润湿滤膜后，取供试品题目：20ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法验证编号：SP-YZ-HY-FA-002-03页数：8/11批准人：批准日期：执行日期：标 题正

16、 文 60支,直接过滤于半封闭式薄膜过滤器中，过滤后，取上述冲洗液冲洗滤膜三次，每次100ml，冲洗后，取出滤膜，将其分成三等份,分别置于两支50ml硫乙醇酸盐流体培养基管和一支改良马丁培养基管内，其中一支硫乙醇酸盐流体培养基做阳性对照，选择金黄色葡萄球菌为对照菌，含菌量小于100cfu。置规定温度（硫乙醇酸盐流体培养基置3035培养；改良马丁培养基置2328培养）培养14天。同时每天观察并记录实验结果。5.8.3试验标准 阳性对照管应生长良好，阴性对照管和供试品管应无菌生长。4.8.4记录 见附表五6.总结 在上述试验的基础上，对实验数据及观察到的现象进行分析、研究、得出结论，写出验证报告。

17、7.再验证 下列情况之一应再验证 20ml：10g葡萄糖注射液处方、工艺发生变化。 无菌检验操作规程发生改变。 原辅料厂家及组分发生变化。题目：20ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法验证编号：SP-YZ-HY-FA-002-03页数：9/11批准人：批准日期：执行日期：标 题正 文三.方案审批1.验证方案起草部 门姓 名职 务签 字日期化验室化验室主任2.验证方案审核审核部门审核化验室意见：主任审核签名： 年 月 日质量保证部意见：部长审核签名： 年 月 日3.验证委员会意见 批准人： 批准日期： 年 月 日题目：20ml：10g葡萄糖注射液无菌检查法验证编号：SP-YZ-HY-FA-002-03页数：10/11批准人：批准日期：执行日期：标 题正 文四.验证安排1.部门职责1.1验证办公室1.1.1 组织协调与验证有关部门的工作，保证验证工作有序的进行。1.1.2 负责组织与葡萄糖注射液的无菌检查法方法验证有关参加人员的培训工作。1.1.3 监督整个操作过程按照验证计划进行。1.2质量保证部1.2.1 负责验证过程监督检查工作。1.2.2 组织人员积极配合验证工作的开展。1.3中心化验室1.3.1 做好验证中产品质量控制及检验所用的仪器、试剂的准备工作，确保验证中检验工作的顺利进行。1.3.2 负责做好验证中各种检验并做好检验记录。1.3.3 负责对验证工作的总结，写出验证报