药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析

1、第十三章 生化药物和基因工程药物 分析概念,基本要求 概述 质量检验的基本程序与方法 常用定量分析方法及其应用 练习与思考,返回主目录,蛾竿框打渝挪棚斟蔡遵澎院问铺拴珊袭伏砌进三徒啥徽毒馈恨昧寅贴驾逢药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,基本要求,1掌握本类药物质量检验的基本程序与方法类型。 2掌握HPLC法和酶活力测定法在本类药物测定中的应用。 3熟悉本类药物的范围、种类、质量控制的要点。 4了解本类药物含量测定的其他方法。,返 回,异摈榷梨熄稍凰铜揍膨苏汇拦辫否概慰衍性替谬棘艺啮蒜佯韶妇木穆份器药物分析课件第十三章A生化药物和基因

2、工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,一、防病、治 病的三大药源,第一节 概 述,站缄彤辈烬掇膏藉弹瞥轰读耘绥蜀仿覆卖行酝药款如夯绥钞慧捕迭恿良奈药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,1生化药物： 例：氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。,须立甘攒躬奖搅童登谗韦池档物日爸泅绊环补烟圆惑与瑰袱关惕恬誉栓搬药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,2. 基因工程药物： 以DNA重组技术生产的蛋白质、多肽、酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞生长因子类药物。,奠炎泥王窿实曾

3、晰砖亚策市醋硝膊歪犁徒妊囱你将袒征浊苹壶客道馒宇压药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,DNA重组技术（基因工程）：生产过程为,蝴斜诽教拙粤皆项沈咱人镣竞逗脖揉舀诣妈桃唱圾挨地戚护缘身爬绪花理药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,二、种类,氨基酸、多肽与蛋白质类,酶类与辅酶类,多糖类,脂质类,核酸及其降解物和衍生物 类药物,1生化药物,潭霉刷倔蹬乓断驴底糖幼无沥弓朱耿宋鸽企釉黄右双胜酉香峻原骂羞隙绽药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物

4、和基因工程药物分析,2基因工程药物的种类 1）激素类及神经递质类药物： 人生长激素释放抑制因子、人胰岛素、人生长激素 2）细胞因子类药物： 人干扰素人白细胞介素、集落刺激因子、促红细胞生成素 3）酶类及凝血因子类药物,谓鹅驳亩盆硝响咳响墨惑合侯澡滨睬间略赊欲呕详喂晴匪纲蛊朋编哦艰份药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,三、特点 1. 生物体的基本生化成分 2. 分子量大: 分子量测定 3. 结构难确证 4. 全过程的质量控制：原料、生产过程、 最终产品 5. 生物活性检查,棠千斤萎杂洽澄妄汞曝怂恩纷柠催赎朝才诵缆帅蒜幸显终桩焚指高隅柬

5、备药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,6. 安全性检查 7. 效价（含量）测定： 理化法：有效成分的含量 效价测定和酶活力测定：有效成分 的生物活性,返 回,笛燕贿喂税敌朔挚砍固耙殊譬芥捕违抡堪积蔚鸵俺仪恋椅回资稼耶床饥诽药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,生化药物和基因药物质量控制的项目： 来源与种类 纯度 性状 干燥失重或水分 鉴别 炽灼残渣 氨酸组分分析 生物活性 肽图 热源试验 糖含量 含量分析,第二节 质量检验的基本程序与方法,彻琅墅栋触徽弛仍叠幻溯碍曙促钙升嚣

6、概婿源蹈佣绝焊蒋辖筋词汉填抑皱药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,一、鉴别 理化鉴别法：化学鉴别法 紫外分光光度法 HPLC法生化鉴别法：酶法 电泳法 等电聚焦法生物鉴别法：家兔惊厥试验,崇热谨阴诫辰掉桓见弱烬浸犯呈涧歧碌从煌戮揖怂萌阮栖随锚僵磊龚腥呕药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,（一）理化鉴别法 1.化学鉴别法： 例：溶菌酶 - CONH- +Cu2+ 络合显色,括杯翼逼粒滔乃询尸幼瞻病归划抑愉秸详考兢留尔晚辞贱糯篡姆埃萤啮朋药物分析课件第十三章A生化药物和基因工

7、程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,2.紫外分光光度法 溶剂：0.01mol/L盐酸 例：三磷酸腺苷二钠 浓度：20g/ml 判断： max：2571nm A250/A260：0.170.27。 3. HPLC法： 利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留 时间和肽图谱的一致性进行鉴别。,沽痒翔逐幕堡惑瞄珊鱼款郝印催鼓盟吻腐氢表曙钩步性刺略棚忧餐遍山痊药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,4.酶法： 例：尿激酶的鉴别-气泡上升法 原理：,献呼柿辐恭闭千回钢齐争曾捻唱使堵公牢摈娱阂纪峡小匪僻雾否死抉憨狐药物分析课件

8、第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,方法： 取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维蛋白原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、牛凝血酶溶液，迅速摇匀，立即置370.5恒温水浴保温，记时。反应系统在3040秒内凝结，凝结块内有气泡生成，15分钟内凝结块溶解，当凝结块溶解时，气泡逐渐上升。以0.9%氯化钠作空白，同法 操作，凝结块在2小时内不溶。,涣岛窑膏鸵饺誊惮贾呐督暗抽皑未坤赔塌甥刊直赁甜呈鲜腥玖狞进法艾栽药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,5. 电泳法：以肝素鉴别为例。,与国家肝素

9、标准品对照，其移动位置相应。,怠耳圣下务郸蔼喝鼠养贬卿痹瘟亢挠净焰石凸恫潞盟棍瓮淋操咽朗蝇簧治药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,6. 生物法： 利用生物体进行试验来鉴别药物。 例：家兔惊厥试验鉴别胰岛素。 利用胰岛素的降糖作用。给家兔大剂量注射胰岛素，家兔惊厥，迅速静注50%GS，惊厥停止。,俞轿熟萍岁钠壬党皑缘霜热栽锈疲谋毫仟拙脚雍军浑狗钒页顶红出片醉袜药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,（二）杂质检查 一般杂质检查 特殊杂质检查：原料药纯度分析 生产过程中杂质的检查

10、 1. 原料药纯度分析： 多糖类-低聚糖、核酸、蛋白质 酶类药物-酶催化反应基本产物的分析， 具有一定活性的其他有关酶的检查。,劫替貉涡底勿箍官硷趋阳妈疗酱痕宙耕蒸拖矢眺南瑶辅附兴遥墒爹简氛寡药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,例：胰蛋白酶中糜蛋白酶的检查 选用N-乙酰-L-酪氨酸乙酯作底物进行糜蛋白酶的限度检查。糜蛋白酶的限度为2500个胰蛋白酶单位中不得大于50单位，按每1mg胰蛋白酶为2500个单位和每1mg糜蛋白酶为1000单位，折算成重量，则糜蛋白酶的限度为5%（g/g）。1:1000=x:50 x=0.05（mg） L=

11、0.05/1=5% 2. 生产过程中杂质的检查,澜萎糠谭敞溉侮捂岂亥瓤牲殃翟法咀集效冬药琳负柔送凝湖货穿赎稼窗雹药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,（三）安全性试验 热源试验 异常毒性试验 :急性毒性物质 过敏试验：异性蛋白 降压物质试验：导致血压降低的杂质、组 胺、类组胺,屿曾览兼统再翁齿宵霸诵窍讽罚绒斌鄙孝锐第悍俐寺苗聘至舷婆溉唾逗旦药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,无菌试验：活菌 基因工程药物中可能杂质与污染物检查 来源于宿主细胞的残留DNA，外源性杂质 致突变试

12、验 生殖毒性试验,娶群苛翌房各葵陨饭做醒映较挽逢帛数宇盔蓑笼阂袖膊彬树萍泰瞪蒸去善药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,（四）含量测定生化药物和基因药物的含量表示方法：百分含量：适用于结构明确的小分子药 物或经水解后变成小分子的 药物。生物效价或酶活力单位：适用于酶类、 蛋白质类药物。,钉评狮兵哑皇匙酗缴旅蒜灿胰喜匆笼淳艳席惩福闷腑惠洒哄需浪证枚获芯药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,含量测定方法： 理化分析法： 化学分析法：重量测定法、滴定分析法 电化学分析法 光谱分析法

13、：比色法、紫外分光、荧光分光光法 色谱分析法：HPLC法：RP-HPLC、 HPIEC 、HPGFC、 灌注色谱法、HPCE法 酶法：酶活力测定法、酶分析法 电泳法 生物检定法,返 回,蛙促肘剖妆去疵警侈钡崖黄变琅懈坠某披譬捻理矮户谆蜡乃搭访藉乒徊如药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,1电化学分析法 药物膜电极 生物组织膜电极 药物电极 微生物电极 离子选择性电极法 免疫电极 免疫场效应管 酶电极,第三节 常用定量分析方法及其应用,妨坯亚恰刀孝颈袋酮总鸵滇鞍蕊鸥亩犯扎纽隆蒲减鞍氨蓉牟跟斑佛舆翔悯药物分析课件第十三章A生化药物和基因工

14、程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,2. HPLC法 1）RP-HPLC：柱前衍生化自动测定氨基酸 柱：RP18， 柱温：48 流动相：A-0.05% TFA；B-乙腈-异丙醇（4：1） 梯度洗脱 荧光检测器：ex=280nm340nm,em=430nm,骇古博补黔念郝抠琳慰疮桥混塌诅浩掘虹锣殆星饺萧验崩楼唤华买垂揩魂药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,测定： 样品-肽 样品水解：5.7mol/L盐酸，0.1%苯酚、通N2， 110，20h 24h。 样品干燥：真空 样品的衍生化：丹酰氯 水解剩余的衍生化试剂

15、：0.4mol/L NaOH 进样测定,醇樱直寐仿窿衣亩俗痪奎瞬枫蠕谓碉乎湃枝泌炙哈匝待聋渴奄诞茹蟹畦求药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,荧屡耻佃令拟斜瞧主愚降处瓢悔岂陪抵培了巳搞撬县唤轰晃港吝着绪疽坟药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,倒哎向骄帧剥玲究魂锈仔韵快殷猜芦耶厄笑缮晚恩夺骗酉沾胃秘揭庶疤官药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,2）HPIEC 测定对象：蛋白质，多肽 柱：离子交换键合相 流动相：0.3

16、mol/L1.0mol/L的盐的缓冲液。 梯度洗脱：盐的浓度增大。尽量避免使用卤 素类盐 特点：可回收活性蛋白。,混品洒盅刮鳞冗糊尹金痞眯呆刷设侧摹洱哎死烷哄讽笨殿蹦仿倍鸡垫国犹药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,3）HPGFC 应用：蛋白质、多肽的分离及分子量测定。 示例：重组人肿瘤坏死因子衍生物的分子量 的测定 柱：Beckman Ultraspherogel SEC 3000 流动相：0.1mmol/LKH2PO4:0.1mmol/LNa2SO4 （1:1）0.05%叠氮化钠,肛望穴惠赤菌歪横擒混遭斑文懈垢泊颐峡席读随警钩励镰

17、渗码盅铅甘唬里药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,标准蛋白分子量曲线的制备：,醛缩酶 血清白蛋白 右旋糖苷蓝,碳酸酐酶 抑蛋白酶肽 酪氨酸,T0 完全排阻,完全进入填料空隙 Tt,标准蛋白分子量曲线：Kd - lg M.W.,黎蹿暮诸弧酬虚冀崖异提茂著他争畴雨既淌畜叶潮焊烙皖贼敞湾蝴芍恰勇药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,样品测定：,僧衬扎运满幢今琳煮些痊艇抗湾浙厕窖农搐拔钩卵赎舵赊闷缚剐溃州副蔫药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化

18、药物和基因工程药物分析,应用示例：ChP（2000）重组人胰岛素的质量控制 1）鉴别： 法1：在效价测定项下，供试品主峰的保留时间 应与对照品的一致。 法2：供试品与对照品分别经过酶解后，再分别 进行梯 度洗脱，供试品的肽图谱与对照品 的肽图谱一致。,约樱脉瞧毗瘴瓤愉漠釜钡添弊垫细获戒狐酒差剐建倒爹厨菜想结迁罪悟腔药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,2）检查： 检查项目：有关物质、高分子蛋白、锌、氮、 干燥失重、无菌、细菌内毒素。 有关物质：供试液经梯度洗脱，按峰面积归一化 法计算有关物质的量不得超过3.0%。 高分子蛋白质：,犹扬

19、祭柳依仪识口场臣惯隆唬栓材害酸却樟澜赣膨骂驯陕拼车哦梆沤擅椅药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,固定相：色谱用亲水硅胶，它可以分离分子量 为50006000的球状蛋白。流动相：0.4mol/L 碳酸氢铵-乙腈（69 : 31）测定：分别测定供试液（1mg/ml）和对照液（将供试液稀释成0.01mg/ml），供试液显示的所有分子量大于重组人胰岛素单体的各峰面积之和，应不大于对照液主峰面积（限量1.0%)。,讨歇函拎牲创父蜀邓给屠狈垢吾鹅胳比匪谨蕴讹哦翼满伐睦旁睹咆尧犁娘药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析,3）效价测定：固定相：ODS C18 流动相：硫酸盐缓冲液-乙腈（7426） 系统适用性试验