EppendorfMastercyclereprealplex荧光定量仪操作指南e

1、 操作手册证书经授权的热量循环仪该仪器为经授权的热量循环仪，仪器序列号为：购买者需预先支付由Roche Molecular Systems公司持有的美国专利号为，及的专利预付金以及由F. Hoffmann-La Roche 有限公司持有的美国国外的相关专利索赔金。该仪器用于进行聚合酶链反应（PCR）过程全程的本质特性的研究与开发。按产量支付的专利费用可以支付给应用生物系统，或者也可以通过购买授权试剂的方式来抵付。该仪器作为经授权的热量循环仪，可以使用由应用生物系统提供的应用软件。根据配合使用的授权试剂的标签权，该仪器与授权试剂的配合使用可以向购买者提供有限的聚合酶链反应执照。如果仅仅购买仪器，

2、客户不能够持有聚合酶链反应执照，也没有权力执行聚合酶链反应过程。有关购买执行聚合酶链反应的执照的更多信息，请通过联系应用生物系统执照部门经理获得，地址为：美国加利福尼亚州福斯特城林肯驱动中心850号，94404。所有权力均不通过暗示，诉讼等以立即执行的方式转移给专利品，其中不仅仅限于5项核酸酶检测项目以及任何试剂与用具的专利索赔。应用生物系统对该仪器的性能不作保证。该产品说明书版权所有，如无经2005 Eppendorf AG，Hamburg授权不可复制Mastercycler为注册商标，美国注册号为，加拿大注册号为TMAMastercycle注册商标受到美国专利号的保护Eppendorf M

3、astercycler ep realplex目录：1 安全预防法2 安装2.1 交货包装2.2 仪器的安装2.3 功能性单元2.3.1 Mastercycler ep realplex2.4 启动2.4.1 realplex模块与热模块之间的连接2.4.2 Mastercycler ep realplex 与计算机之间的连接2.4.3 与其它部件的连接2.4.4 realplex软件的安装2.4.4.1 安装主程序2.4.4.2 数据恢复2.4.4.3 开始realplex软件的运行3. 操作3.1 管理者登陆3.2 登陆3.3 用户变更3.4 系统配置3.4.1 对使用者的管理3.4.1.

4、1 新用户建立3.4.1.2 编辑用户3.4.1.3删除用户3.4.2 用户层3.4.3 循环仪3.4.4 realplex 模块3.4.5 系统层3.4.5.1 特性3.4.5.2 登陆出错信息3.4.5.3 用户登陆3.4.5.4 软件更新3.5 检测项目管理3.5.1 建立检测项目3.5.2 打开检测项目3.5.3 保存检测项目3.5.4 保存模板文件3.5.5 模板文件的使用3.5.6 复制检测项目3.5.7 检测项目的输出3.5.8 检测项目的输入3.5.9 建立文件夹3.5.10 删除检测项目和文件夹3.6 探针管理3.7 染料管理3.8 校准3.8.1 背景校准3.8.2 颜色校

5、准3.8.2.1 使用商业的校准工具包进行的颜色校准3.8.2.2 客户特有的染料的校准3.9 数据库管理3.9.1 当前数据库的自动保存3.9.2 当前数据库的保存3.9.3 输入数据库3.9.4 数据库的归档4 编程（检测项目的建立）4.1 建立一个新的检测项目4.2 建立板布局4.2.1 染料的确定4.2.2 参考染料的选择4.2.3 样本容积输入4.2.4 探针类型的确定4.2.5 背景的确定4.2.6 样品类型的定义4.2.6.1 标准4.2.6.2 阳性对照4.2.6.3 阴性对照4.2.6.4 未知样品4.2.7 复制和标准系列的自动建立4.2.8 定量的样品类型4.2.9 相对

6、定量的样品类型4.2.9.1 多plex分析例子4.2.9.2 单plex分析的例子4.2.10 熔点分析中的样品类型4.2.11 终点测定中的样品类型4.2.12 +/-检测项目中的样品类型4.2.13 基因辨识中的样品类型4.2.12 样品的复制与剪切4.2.15 删除样品4.2.16 几个样品的归组4.2.17 子检测项目的测定4.2.18 板布局的删除4.2.19 完整检测项目的板布局编辑4.3 pcr程序的建立4.3.1 用模板程序建立一个pcr程序4.3.2 不用模板程序建立pcr程序4.3.3 程序步的插入和编辑4.3.3.1 温度4.3.3.2 循环（15步循环）4.3.3.3

7、 保温4.3.3.4 暂停4.3.3.5 声音4.3.3.6 熔解曲线4.3.3.7 终点4.3.4 程序的复制4.3.5 程序的删除4.3.6 测量点的确定4.3.7 热盖设置5 操作（监测）5.1 样品的加载5.2 模块温度控制5.3 样品体积5.4 启动检测项目5.5 单个样品的选择5.6 单个样品类型的选择5.7 循环仪状态5.8 当前运行检测项目的中断5.9 继续运行检测项目5.10 终止检测项目5.11 mastercycler ep realplex 作为pcr的 使用5.12 mastercycler ep realplex 作为荧光计的 使用5.13 关闭6 分析6.1 概要

8、6.1.1 打开检测项目6.1.1.1 打开在运行的检测项目6.1.1.2 打开子检测项目6.1.2 单一检测项目的选择6.1.3 使样品处于不活动状态6.1.4 样品类型的选择6.1.5 分析模式的选择6.1.6 图标缩放6.1.7 存储默认设置6.1.8 图表的保存和复制6.1.9 样品数据的保存和复制6.1.10 编辑报告6.1.10.1 模板报告的应用6.1.11 分析的保存6.1.12 调用分析6.2 定量6.2.1 阈值确定6.2.2 基准线测定6.2.3 标准曲线6.2.4 分析6.2.5 multiplex 分析6.3 相对定量6.3.1 阈值的测定6.3.2 多plex 分析

9、的估算6.3.3 单plex分析的估算6.4 熔解曲线分析6.4.1 阈值的测定6.4.2 分析6.5 终点测量6.5.1标准曲线6.5.2 分析6.6 +/-检测项目6.6.1 将终点测定作为数据源的+/-检测项目分析模式6.6.1.1 阈值的测定6.6.2 pcr数据作为数据源的+/-assay6.6.2.1 阈值测定6.6.3 分析6.6.4 多plex分析6.7 基因测定6.7.1 阈值测定6.7.2 分析7 维护7.1 清洁仪器的一般方法7.2 热模块的清洁7.3 热模块的验证与校准8 故障查找8.1 一般故障8.2 在sybr绿色分析中发生的错误8.3 qrtpcr过程中发生的错误

10、9.1 登陆9.2 新用户的建立9.3 创建一个检测项目9.4 检测项目的保存9.5 执行检测项目9.5.1 概述9.5.2 板布局9.5.3 pcr程序9.5.4 开始检测项目9.5.5 当前运行检测项目的中断9.5.6 继续运行检测项目9.5.7 退出检测项目9.5.8 分析10 技术数据1 安全预防法在使用Mastercycler ep realplex之前，请仔细阅读该操作手册。Mastercycler ep realplex仅可用于实验室内，并需由有资格的专家执行实时的聚合酶链反应和相关研究工作。注意：如果由于使用者没有遵循厂商提供的操作手册使用该仪器，那么导致的任何仪器坏损的担保索

11、赔和责任都为无效。仪器使用者必须无条件的接受如下使用说明： 该仪器用于实验室内工作，必须保证时刻有人在旁边观察。为避免由冷凝引起的损坏，在安装后，仪器应该仅打开12个小时。当仪器被挪动位置时，同样遵循这个规定。 电源电压必须与仪器标识牌上的电压数值相匹配。仪器必须有接地线接地。在作仪器的维护和清洁时，必须关上仪器开关并且切断电源，等待模块冷却下来才可进行。在启动仪器前，必须检查一下接线的正确性。 Mastercycler ep realplex必须被立放在一个稳固的工作台面上，必须提供足够大的空间以保证仪器前后端通风槽的通畅和保证冷空气在仪器的下方流通。仪器后端通风槽离墙面的距离至少为10厘米

12、。确定通风槽处于易装卸状态，并且其进出口的通风不会发生堵塞。仪器下不应放置纸张等物品堵塞通风。 不应有物体放置在加热盖上。 在清理加热盖时，带有尖棱角的一些元件就被暴露在外面。所以在清理加热盖时，请注意保护那些带有尖棱角的卷筒形电线和导轨。 开关加热盖时或把加热盖放在清洁位置时，不要把手指插入盖子和机柜之间。打开加热盖时，不要碰盖子下面的地方。 样品物质不可以直接装入加热模块。 当使用不经推荐的样品试管时，将有可能导致模块和加热盖的坏损。同时样品试管也会被弄破以至于造成样品物质的外泄。所以在使用具有传染性的样品物质时，这一点一定要引起注意。 确保聚合酶链反应板被正确放置在模块上，否则将会导致模

13、块和加热盖的坏损以及样品物质外泄。 如果试管在模块中加热的时候不使用加热盖，试管可能因为温度太高而产生破裂，最后将导致样品物质的外泄。加热模块，加热盖的内部及微测试管/聚合酶链反应板能迅速达到50摄氏度的高温。小心不要被灼伤。直到加热盖温度降为30摄氏度或者更低时，才可以打开加热盖。不要使用耐温性（120摄氏度）不够的材料（试管、聚合酶链反应板、罩、箔片和垫子等）。加热模块上有如下标记：提出了对加热模块和加热盖中潜在温度的提醒指明操作将导致右边温度高于左边温度。 带有爆炸、易燃、易挥发性质的物质禁止在Mastercycler ep realplex中进行加热。仪器禁止在有潜在爆炸性危险的房间内

14、使用，以防止产生爆炸。 当使用致病物质、放射性物质和其它对人体健康有危害的物质工作时，必须遵守相关的安全手则。 确保仪器内不进水。 仪器的维修必须由经过Eppendorf AG授权的专家来操作。该项授权仅可通过参加一个持证培训课程获得。 转交如果仪器发生转交时，必须附上本操作手册。 处理当仪器要被处理掉时，必须遵循相关的法律规定。电器的清除请遵循欧共体基于EU指令2002/96/EC的对废电子电气装置（WEEE）的国际规定。根据这些规定，在商业对商业领域内，05年8月13号以后供应的设备将不再被归类为城市或家庭废物，并有如下标记：关于处理的规定可能存在国家与国家之间的不同，所以如果有需要请联系

15、你的供应商解决。2 安装2.1 交货包装交货包装中包含以下各个部分：一台Mastercycler ep realplex的主体装置一个主电源电缆一个PC控制器局域网络总线电缆一个控制器局域网络总线电缆一个USB控制器局域网络适配器一个3.0毫米带把手的六角扳手一个内装有安装使用手册和软件的CD一个英文的安装使用手册（印刷本）一对96 tec PCR板，全裙边/半裙边一袋封口条，8根一个热封的薄膜，封装（5）一份产品合格证明2.2 仪器的安装为避免由于冷凝给仪器带来的损害，安装后，仪器仅可运行12个小时。当仪器被挪动位置后，同样要遵守该规定。仪器必须被严格立式放置在稳固的工作台面上。确保仪器放置

16、的位置远离会产生震动的其他仪器（比如离心分离机等）为保证仪器前后通风槽的通畅，以及仪器下端和空气的接触，放置时要留有足够大的空间。仪器的后通风槽与墙壁之间的距离应大于10厘米。空间要求：宽度：26厘米进深度：41厘米高度：39.6厘米电源设备：一个提供给热模块的安全插座。 Realplex模块由热模块的主连线供电。安装时要确保通风槽的拆卸空间，确保入口与出口的通风顺畅。为保证通风顺畅，禁止在仪器下放置纸张或者其他物品。电源电压大小必须与仪器标识牌上的数据相符。仪器必须带有接地线。仪器和供电电源的放置必须可以保证快速的切断电源。包装仪器的纸箱应妥善保存以备日后仪器维修时的安全运输。注意：仪器运输

17、与贮存温度不得超过50摄氏度。仪器放置应避免直接日晒。2.3 功能性单元2.3.1 Mastercycler ep realplex图1：关闭的realplex模块前面观1 realplex模块2 状态显示3 密封压板（锁住状态）4 控制面板的挂钩（Mastercycler ep realplex不需要）5 热模块图2：打开的realplex模块前面观1 密封压板（开启状态）2 realplex模块3 热模块放入试验样本后，向前拉动realplex模块，覆盖住插入的试管。然后用压板密封，程序开始启动。注意在把密封压板归位时小心不要弄伤手指。当realplex模块开启时，不要触碰盖子下端以防被灼

18、伤。图三：后面观1 realplex模块2 realplex模块的接线板(见图4)3 热模块4 通风槽5 供电电源开关，0为关断，1为接通6 供电电源插座7 热模块的接线板图4：realplex接线板1 RS232：串行接口2 Address：旋转开关地址3 控制器局域网络出口4 控制器局域网络人口5 端部阻抗图5热模块接线板1 Printer：并行接口2 RS232：串行接口3 control panel：控制面板的接线口（Mastercycler ep realplex不需要）4 控制器局域网络（CAN）出口5 控制器局域网络人口6终端阻抗7 Address：旋转开关地址。注意：只有遵循E

19、N/IEC60950和UL60950A标准的仪器才能与此串并行接口相连。2.4 开始安装2.4.1 realplex模块与热模块之间的连接将控制器局域网络总线连接电缆接入热模块的CAN_out接口将控制器局域网络总线连接电缆的自由端接入realplex模块的CAN_in接口将位于realplex模块后部的开关项设定为开的位置，将热模块的开关项设定为关的位置将位于realplex模块后部的旋转开关地址设定为11，即两个旋转开关上的箭头都指向1的位置；将热模块后部的旋转开关地址设定为02，即左边旋转开关上的箭头指向0的位置，右边旋转开关上箭头的指向2的位置。注意：启动前准确设定旋转开关地址，可以使

20、得仪器启动后，地址被软件自动检测并显示出来。2.4.2 Mastercycler ep realplex 与计算机之间的连接计算机硬件要求：AMDAthlon/Intel Pentium lll 1.0GHz处理器，最低512MB内存4GB硬板存储空间（其中大约1GB用于软件和数据存储）USB1.0/1.1，或者USB2.0连接器集成或者外带的可写CD-ROM存储器控制器局域网络USB适配器，固件4.2（标准配件）对计算机操作系统的要求：Windows XP家庭版本或者更高版本可选择的网络连接环境：可以实现连接别的工作站计算机的网卡或者安装TCP/IP网络将计算机的控制器局域网络总线接入热模块

21、的CAN_in接口将计算机的控制器局域网络总线的自由端接入USB CAN适配器将USB CAN适配器接入计算机的USB接口。启动仪器前，检查供电电源，检查供电电压值是否与热模块左端标识牌上给出的数值相符。将供电电源插入热模块，打开电源开关（见图3，热模块后部图）。Realplex模块的供电通过与热模块的连接实现。当使用者启动仪器以后，打开realplex软件，已连接的Mastercycler ep realplex会由软件自动检测出来并且显示其当前状态。计算机不得在Mastercycler ep realplex运行过程中切断与其之间的连接。图7：带有连接电缆的Mastercycler ep

22、realplex1 CAN总线电缆2 计算机CAN总线电缆3 USB CAN 适配器2.4.3 与其它零件的连接注意：只有遵循EN/IEC60950和UL60950A标准的仪器可以接入接口2.4.4 realplex软件的安装2.4.4.1 安装主程序首先关闭计算机正在运行的各项程序，将USB CAN适配器插入USB接口。等待几秒钟后，屏幕上将出现硬件安装向导。注意：在安装结束前，不要移去USB CAN适配器！现在请插入realplex光板，打开光板目录下的setup.exe文件（如果计算机的自动运行功能处于激活状态时，安装将被自动运行）。然后软件会提示关于安装的各个选项：点击next，屏幕上

23、会弹出几个窗口，接着点击next接受默认的设置。当安装结束后，重新启动计算机。现在您会发现在计算机启动组里有一组新的程序，从那里您可以打开刚刚安装过的软件。此外，软件会自动在计算机桌面上生成一个图标。2.4.4.2 数据恢复如果realplex软件是安装后的第一次运行，那么软件会识别出数据当前是不存在的，然后自动打开数据工具栏（Database Tool）。您可以接受恢复数据（restore database）表中给出的默认设定，然后按开始恢复（start restore）按钮。恢复过程结束后，可以按右上端的start realplex按钮打开软件。如果realplex软件以前被安装过，那么数

24、据的恢复操作是不需要进行的，原因是前次安装的已存在数据可以继续被使用。2.4.4.3 开始realplex软件的运行打开mastercycler ep realplex的开关，等待位于开关上部的LED灯将变为绿色。现在您可以开始运行realplex软件了。您也可以在mastercycler ep realplex处于关断状态下运行realplex软件，甚至在不接任何硬件的状态下运行该软件。第二种情况下，软件将会提示一条错误信息，可以忽略该信息继续运行软件。注意：当使用realplex软件时，不要运行其它会占用计算机大部分内存的软件（如：CD创建器或者媒体播放器等）！决不可以使计算机工作在电池供

25、电模式！调整计算机供电电源的设定值以保证在程序运行过程中，计算机不会进入待机状态。3. 操作3.1 管理者登陆当realplex软件第一次被打开时，将会显示如图3.2所示的一个登陆对话框，提示软件管理者为Eppendorf命名并输入登陆密码。这项是仪器的出厂设置，如有需要用户可以在User Administrator对话框中对此项进行修改（详细情况请查阅3.4.2节）。此后软件再次被打开时，无论软件管理者还是其他的软件使用者，都必须建立一个用户才能登陆使用realplex软件。3.2 登陆在打开程序时，Mastercycler ep realplex用户都必须先登陆才能进一步使用软件。所有用户

26、名都列在选取框中。我们要做的就是选出自己的用户名并输入相应密码。新用户由软件管理者建立。（请参阅3.4.1.1节）如果登陆密码输入错误，则会显示登陆失败（login failed）。点击OK键确认后，重新进入登陆程序。如果点击Cancel键，则显示主屏幕（情参阅3.3节）。但是此时所有的功能键都会处于无效状态。为进入工作状态，使用者必须再次打开登陆对话框（情参阅3.2节）完成登陆手续。注意：登陆以后，用户可以对自己的文件夹和分析程序进行读或者写的操作，与Mastercycler ep realplex仪器连接后可以执行其他的实验操作。而对软件其他用户的文件夹和分析程序只有读的权限。如果想要执行

27、或编辑其他用户的分析程序的话，可以将其复制到自己的文件夹中。3.3 用户变更当已有其他使用者登陆时，可以按照以下方法登陆系统： 通过点击该图标以退出登陆。 如果选择登陆图标，User login对话框将被弹出，使用者可以按照3.2节中描述的登陆步骤进行登陆。以上两种功能也可以通过File菜单来实现。软件在同一时刻仅允许一名用户登陆，新用户的登陆将自动使原来的使用者退出系统。当前登陆用户将被显示在屏幕下方的状态栏内。登陆后，主屏幕显示为Administror或者User。主屏幕包括向导区，工作区和状态区。如果在左边的向导栏内选定某一程序函数时，该程序函数则会显示在工作区内，而状态栏中将显示热模块

28、的状态信息和当前使用者的用户信息。1 菜单栏2 工具栏3 向导区4 工作区5 状态栏 通过选项show/hide navigator，向导区可以被显示或者隐藏。这一操作也可以通过setup菜单实现。注意：所有的对程序各个功能的操作以及对系统配置的操作，都可以通过工具栏或者菜单栏实现。选择性的操作还可以通过点击鼠标右键来实现。3.4 系统配置在setup菜单中选择system configuration项，则在菜单栏中显示realplex system configuration对话框。其中对话框左边列出了所有的使用者名单以及处于连接状态的模块名单，此外还有系统设置及其功能的结点选项。在向导栏内

29、不同的层次显示为不同的符号。当用光标选中某个结点时，从属文件夹将变为可见的，再选一次则可关闭该结点。如果某层或其从属文件夹被选中，将在对话框的右边显示出相应的窗口内容。3.4.1 对使用者的管理当选中User项，User Administration图表显示在对话框右边，列出所有的用户名单。软件管理者登陆系统以后，可以使用该对话框进行建立新用户，编辑和删除已建立的用户的操作。此功能只对已经登陆的软件管理者开放。对于没有软件管理者权限的普通使用者来说，这些功能键都是无效的。3.4.1.1 新用户建立新用户的建立必须由登陆以后的软件管理者来进行操作。具体建立方法为打开位于setup菜单下的real

30、plex system configuration对话框。当选中User项，User Administration图表显示在对话框右边。点击功能键new，可以打开new user对话框。在对话框的相应栏目中输入新用户的用户名和密码。用户的权限可以在用户组中选择，其中有两个预设好的用户组：administrator：有权操作所有程序和实行管理的各项功能。Standard user：有权操作所有程序另外还可以在comment一栏中输入一些对用户的说明。确定以后，窗口关闭，同时一个新建用户名将在user下的realplex system configuration对话框中显示出来。其颜色则指明该用户

31、所属的用户组：管理者颜色为红色，一般用户的颜色则为绿色。两组用户组各自享有固定的权限，并且不能更改。注意：如果用户忘记了自己的登陆密码，那么管理者可以登陆系统重新分配一个密码给该用户（请参阅3.4.1.2节）。管理者看不到各个用户的密码。3.4.1.2 编辑用户在realplex system configuration对话框中，所有已建立的用户的资料信息都可以由管理者进行编辑。具体方法为首先在user administration窗口内选中某用户，点击edit功能键后，一个edit user对话框就被打开了。编辑完用户信息以后，点击ok键确认即可。3.4.1.3删除用户只有管理者用户才有权删

32、除用户。首先必须如3.1节中描述的那样登陆系统，打开realplex system configuration对话框。在窗口user administration中选中一个用户，点击delete功能键删除该用户。3.4.2 用户层当在realplex system configuration对话框中选中某一用户时，该用户的具体信息就被显示在对话框的右侧窗口内。除了显示其用户名以及所属用户组以外，图表中还包括由此用户建立的文件夹和程序的数量。该用户最后操作的时间也有显示。用户登陆后可以在此窗口内修改用户说明和密码。改变密码首先需要在password栏中输入新密码，然后在confirmation栏

33、中再次输入密码以确认。接下来点击ok功能键确认修改操作，最后通过点击close键关闭对话框。软件管理者看不到各用户的密码。3.4.3 循环仪在cycler结点处，可以得到已连接的循环仪的信息。设备特性被列在properties图表下。此外相应硬件的资料以及最后登陆的用户名，还有最后运行的程序都会在此栏下显示出来。在incubate和lid图表下，可以调整热模块和加热盖的温度值。具体做法为首先在new temperature一栏中填入所需的温度值，然后选择incubate复选框以确认。如停止调温，则释放incubate复选框。PCR程序文档信息在protocol图表下显示。首先给出了启动PCR程

34、序的登陆用户的信息以及该PCR程序的程序名和启动时间。接下来是相关的程序特性信息和热盖设置。除此之外，程序的运行各步骤也会在此显示出来。如果选中这个功能键，则原始记录将被作为txt文件保存。如果选中这个功能键，则原始记录将被与计算机相连的打印机打印出来。在Cycler结点处双击鼠标，System结点就会显示出来，其中包含有模块的特性信息。特性：properties栏中显示出模块的型号以及热模块的序列号，同时热模块被最后验定和校定的信息也会显示出来。Sensors：显示当前传感器的温度值。温度验定：通过温度传感器对仪器的温度值进行测量，属于仪器温度验定系统的一部分（请详见命令信息）。该过程在温度

35、验定系统的操作手册中有具体描述。温度校定：借助于温度传感器，对仪器的温度值进行的调整操作。其性能在温度验定系统的操作手册中有具体描述。3.4.4 realplex 模块在realplex module结点下将显示realplex模块的特定的系统信息。除了显示mastercycler ep realplex仪器的版本信息和软件的版本信息以外，其他装配件的序列号也会在此显示出来。同时还有滤波器设备资料和光电倍增器所选电压值。Realplex module还会指明设置realplex模块的CAN总线地址以及热模块和realplex模块之间是否是通过CAN总线电缆相连的。Cover state一栏中显

36、示出加热盖的当前位置。在realplex module结点处双击鼠标左键打开下层各结点。Module log文件目录下记录了程序运行中出现的所有出错信息。这一图表中的出错信息可以通过选中save功能键以txt格式保存下来，或者选中print功能键通过已连接的打印机打印出来。3.4.5 系统层system结点给出当前软件版本的信息，其中还包括了用户登陆以及登陆出错等信息，以监视用户的操作和任何操作失误。 通过show system info图标，可以打开可选的realplex system info对话框。3.4.5.1 特性在此处可以看到热模块和realplex模块的状态。3.4.5.2 登陆

37、出错信息登陆出错信息中列出所有的出错信息。该信息可以选中save功能键保存或者选中print功能键打印。3.4.5.3 用户登陆userlog中记录了对mastercycler ep realplex进行的所有操作。系统记录了所有的登陆和退出登陆的操作，记录了所有有关用户的资料，所有程序的开启，暂停和退出的操作。Userlog可以选中save功能键保存或者选中print功能键打印。3.4.5.4 软件更新双击系统（system）结点后，显示出其包含的两个结点。点击其中一个结点后，软件将在右边的工作区内运行更新程序。 当选中browse图标后，将显示出load firmware file对话框。

38、选中软件的版本后，将在设定的源路径（source path）中下载更新。选中start功能键后，软件开始运行更新程序。3.5 检测项目管理在工具栏中可以实现以下的检测项目的管理功能：1 新检测项目2 打开检测项目3 保存检测项目4 打印报告5 将文件输入当前的选中部分6 将当前的选中部分输出注意：以上提及的各个功能还可以通过file菜单，或者把鼠标放在向导栏中点击右键来实现。3.5.1 建立检测项目 当选中new assay图标时，将出现一个空白的板块，标准的pcr程序将在工作区内被装载。3.5.2 打开检测项目 当选中open assay图标以后，将弹出检测项目对话框：如果一个用户或者文件夹

39、处于选中状态时。除了文本名、建立时间和更新时间会在assays面板上显示出来以外，所有保存其中的检测项目也都会在右边显示出来。而且还会提示出各文本的状态。 标有setup的文本代表从没被打开过。打开文本时，文本将被装载在assay setup和analysis中，而且在analysis中没有数据资料。 标有template的文本可以作为建立新文本的模板文本使用。更多相关信息请详见3.5.4和3.5.5节的关于模板文本的建立日期和使用的介绍。标有complete的文本代表数据获得已经发生过的文本。如果这样的文本被打开，数据将会显示在analysis下。并且除非有其它文本当前正在被运行的情况下，该

40、文本才会显示在assay setup中。详见6.1.1.1节中的介绍。当某个文本被选中，该文本中保存的所有分析数据都将被显示在下方的analysis窗口中。数据建立和执行这些分析的用户名都会被在这里列出来。因为断电或者系统发生错误等原因造成失败的文本都带有这个aborted的标志。如果在发生失败前获得了足够多的数据，那么该文本还是可以被拿来分析的。3.5.3 保存检测项目检测项目可以由登陆用户在他的结点下或者文件夹中执行保存操作。只有登陆用户才能执行对这些程序文件的编辑操作。而其他使用者只能对这些文件执行读或者复制的操作。当save assay的图标被选中后，当前的检测项目被执行保存操作。当要

41、把一个检测项目保存在某目标文件夹下时，可以选中file菜单下的save as功能键，打开相关对话框来实现。输入检测项目名后，文本通过复选框assay type被选中，点击ok以确认。3.5.4 保存模板文件当一个检测项目要在被创建以后多次重复使用时，该文件将被保存为模板文件。具体方法为在保存文件的过程时，复选框中选择template栏。3.5.5 模板文件的使用当创建简单的新检测项目时可以用到模板文件。具体方法：模板文件在assay setup通过功能键open assay中被装载，以检测项目的形式，命名后保存在用户结点下。3.5.6 复制检测项目用户可以复制其它用户的文本到自己的文件夹,对这

42、些文本与模板进行启动和编辑。具体方法为：在assay对话框中使用open assay选中和打开其他用户文件夹下相关的检测项目，然后通过save as将文本复制到自己的结点下（请查阅3.5.3节）。这时用户就可以在连接mastercycler ep realplex以后，直接启动和执行复制的检测项目了。3.5.7 检测项目的输出检测项目的输入输出功能用于几个工作站之间的文本交换。在此检测项目与板布局、PCR程序和被测数据一同被输入输出。 图标export assay to file用来以ASY格式保存当前的检测项目到另一个工作站上的计算机上以便对文本做更多的处理。在窗口的靠上一栏中选出检测项目的

43、保存位置，然后输入文本的名字，并在file type一栏中选择realplexexchange（*.asp）。3.5.8 检测项目的输入 当选中图标import assay from file时，一个格式为ASY的检测项目就会被装载到一个空白的文本中。当输入一个检测项目时，必须在窗口的靠上一栏内选中一个相关的保存位置，文件类型为realplexexchange（*.asp）。3.5.9 建立文件夹登陆用户可以在本人用户结点下建立文件夹，相关的文件和文本都在这个文件夹中保存，以方便日后的调用。根据如下的步骤建立文件夹：通过图标open assay打开检测项目的对话框。 选中本人用户结点后，通过功

44、能键new来添加一个新的文件夹。 可以首先通过选中文件夹，然后再点击功能键rename来重新命名。然后检测项目就可以在建立的文件夹中进行复制和创建等操作了。（请查阅3.5.4和3.5.2节）3.5.10 删除检测项目和文件夹通过图标open assay，用户可以在检测项目对话框中，点击功能键delete来删除选中的检测项目，最后点ok确认删除操作。同样的删除操作可以用来删除文件夹。 选中一个检测项目或者文件夹后，可以通过点击功能键delete，和确认yes来删除该检测项目或者文件夹。3.6 染料管理 选中dyes图标后，将会弹出相应对话框。这个对话框用于实现对染料的管理。在荧光测量中，染料是必

45、须被适当设定的。相应染料的最大发射波长对于用户选择适当滤光片(如FAM520nm与一号滤光片520+/-5 nm ）滤光片是非常重要的。请向各自的生产商咨询所需染料的最大放射量。注意：在执行颜色校准（请查阅3.8.2节）前，必须先定义相应的染料。 染料名称 染料最大的发射波长，单位为纳米（nm） 染料检测通道。基于特定的染料波长有程序预先自动设定。 具体染料校准时的光电倍增器的敏感度。包含有四位数码，用来为四个滤光片中的每一个设定相应数值（1代表低敏感度，9代表高敏感度）。该数码由软件预先设置。 最后一次执行染料校准的用户 最后一次校准时间。 在点击此键以后所显示的对话框中，新染料的所有数据都

46、可以在这里输入进来。这个对话框用来输入新染料的名称和检测新染料的滤光片。滤光片必须与新染料的发射波长相匹配。 当前染料的所有数据都可以在点击此键以后显示的对话框中修改。按ok以确认。 点击此键后，选择yes确认删除的染料。注意：如果染料的滤光片发生改变的话，将会失去染料的校准资料。3.7 探针管理探针管理允许系统在检测项目板布局完成后在选择探针类型。这个功能仅仅用于文档编制，对pcr程序则没有什么影响。为获得数据而需要的测量点是在建立pcr程序时确定下来的。（请查阅4.3.6节） 当图标probes被选中后，会弹出相应的对话框。在这个对话框下，任何用户都可以在磁板布局时，实现对探针的管理。探针

47、型在显示的对话框中被命名，点击ok以确认命名。 当前探针的名字可以在显示的对话框中修改，点击ok以确认。 点击yes以确认探针型的删除操作。3.8 校准在使用mastercycler ep realplex做荧光试验时，需要事先进行背景和颜色校准。校准应和随后的试验处于相同的温度下。注意：为保证密封盖上没有液体，溶液内没有空气泡，校准前应首先对校准板进行离心操作。一定要确保没有液体蒸发，否则使用新的校准板。在校准前，要保证仪器已经启动了至少15分钟。注意：软件会自动确定每个染料和滤光片所需的光电倍增器敏感度。所以用户无需有任何输入。背景校准必须要在颜色校准之前执行。3.8.1 背景校准选中菜单

48、栏setup后，就会弹出background calibration对话框，列出所有保存的背景校准。该列表还列出了校准时间和执行校准的用户名。除此之外还显示了背景校准的状态。 使用的板名称 作为默认设置的背景校准，带有十字标记。 光电倍增器的敏感度在染料校准过程中以四位数码的形式被确定下来。四个滤光片中，每个滤光片都对应确定一个数码（1代表低敏感度，9代表高敏感度）。这四个数码由软件预先设定。 执行背景校准的日期 执行背景校准的用户 一个新的背景校准过程会在点击该栏后出现的对话框中进行。 对话框new被打开后，输入背景板的名称。 在右边的对话框的incubation栏中，输入模块和盖子的温度值

49、。模块温度的缺省值为60摄氏度，盖子温度的缺省值为105摄氏度。 插入背景板以后，单击功能键calibrate开始执行校准，单击ok键确认操作。 在加热和第一次读值完成后，软件会提示翻转背景板，请按照软件的提示操作，翻转背景板，单击ok确认操作。 如果背景校准成功完成的话，背景板会显示出96个绿色位置的板布局。单击ok确认以关闭“校准成功完成”提示框。如果背景板在校准过程中的某些位置校准失败时，单击cancel来放弃校准数据。在这种情况下，前次的校准数据将被用来使用。选中proceed键时，背景校准数据在任何情况下都会被排除。 在显示的对话框内，可以改变当前背景校准的所有的数据，然后校准过程被

50、重复进行。前次的背景校准的数据将被覆盖。 当选中功能键default时，对于所有的检测项目来说，校准都为默认设置。此时在背景校准列表中，将显示一个十字标志。 点击yes来确认对背景校准的删除。背景校准失败的另一个原因可能是热模块内一些容器内的荧光污染造成的。热模块的清洁请详见7.2节。3.8.2 颜色校准在颜色校准过程中，要调整96个光路的不同的敏感度等级。除此之外，颜色校准是基于多种染料检测，进行多个检测项目运行的前提条件。通常来讲，这些荧光染料的发射波波长很宽，以至于其发射的光波可以被多个滤光片检测到。当进行多检测项目运行时，软件可以使用颜色校准得出的校准数据来计算在别的滤光片中染料之间的

51、干扰情况。注意：在进行颜色校准时，可以使用实时PCR中适用的所有试管和密封盖，应该记住一点，在颜色校准时使用的背景校准必须用相同的物品来进行。3.8.2.1 使用商业化的校准工具包进行的颜色校准注意：只有96孔型的校准工具包适用于mastercycler ep realplex的颜色校准。这些工具包必须包含一个板/染料（例如：ABI棱镜7000SDS 96孔光谱校准工具包）。当使用用于商业的校准工具包来进行颜色校准时，背景校准必须使用这个工具包提供的背景板来进行。校准所需染料的选择取决于装在mastercycler ep realplex中的滤光片。 在setup菜单中打开color cali

52、bration对话框。 打开color calibration对话框以后，用组合框来选择工具包内的背景板。染料的名称同时在此被输入进来。 在右边的对话框的incubation一栏中，输入模块与盖子的温度值。模块的默认温度设置为60摄氏度，盖子的默认温度设置为105摄氏度。 当插入颜色校准板后，点击功能键calibrate来执行校准操作。点击ok来确认操作。 在加热和首次读值后，软件提示用户翻转校准板，请翻转校准板，然后点击ok以确认。 如果颜色校准被成功运行，板布局显示出96个颜色校准板的绿色位置。点击ok以关闭calibration successfully finished提示框。如果颜色

53、校准在某位置发生了失败，可以选择cancel键来放弃校准数据。在此情况下，该染料的前次校准数据将被使用。选择proceed时，颜色校准数据在任何情况下都会被排除。对每种染料，该过程都被反复执行。当校准完成后，在calibration面板中将会显示出一个敏感度码。这个敏感度码是一个数值组合，每一位数都确定着光电倍增器的敏感度级别，用来在校准过程中，测量相应滤光片里的染料。校准工具包中的染料的敏感度级别是由软件预先设定的。3.8.2.2 客户特有的染料的校准根据下列表格中显示的推荐浓度值，每个染料都应事先准备出一个相应的浓度。对于每种浓度，50微升的溶液逐一被移液到96孔板的每个孔内。密封好校准板

54、后，对于每种染料浓度开始执行颜色校准操作。（请查阅3.8.2.1章内容）注意：在背景校准和颜色校准时，使用相同的工具。应该首先进行背景校准。用于校准客户特有染料的主滤光片（nm）(上表中第一行左边内容翻译)颜色校准推荐使用的染料浓度值(上表中第一行右边内容翻译)注意：染料的最大辐射量应在主滤光片允许范围内。在每个数码位置中，敏感度代码都不能是1。主滤光片的代码必须为在2到7之间的数字。如果在主滤光片中，敏感度代码中包含有8或者9时，用一个较高的染料浓度重复颜色校准操作。而当敏感度代码包含1这种情况下，必须用较低的染料浓度重复颜色校准操作。3.9 数据库管理所有的数据、设置值、用户结构都自动保存在数据库中，推荐用户定期为数据库建立备份。注意：不要混淆不同器皿的数据库。Database tool软件可以用来管理数据库。 双击图标database tool后，显示出realplex database administration对话框。上面的selected database面板显示出当前数据库和其当前状态。Datebases and Archives图表显示了所有可用数据库的列表。共有两种形式的数据库： 实际使用的数据库，其中的数据都是当前存储的。数据库的名字由数据和数据库开始使用的日期组成。在selected