真菌(1-3)-β-D葡聚糖[知识分析]

1、 附1 真菌(1-3)-D葡聚糖检测标准操作规程1. 目的规范真菌(1-3)-D葡聚糖检测的操作规程，保证结果准确性。2. 原理实验条件下，来源于某些真菌细胞壁的(1-3)-D葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂的酶促凝集系统，使反应溶液的透光度发生变化。利用(1-3)- -D葡聚糖标准品建立-D-葡聚糖生物效应与透光度变化关系的标准曲线，便可定量地测定人血液的(1-3)- -D葡聚糖含量。3. 试剂真菌（1-3）-D葡聚糖检测试剂盒，湛江安度斯生物有限公司。试剂盒包装规格：20人份/盒。试剂盒组成：-G试剂冻干粉状，0.25 ml / 支，10支-G试剂复溶液无色液体，0.3 ml / 支

2、，10支样品稀释瓶无色液体，0.9 ml / 支，20支复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。若当次试验有剩余，可将剩余的试剂溶液置-20以下冷冻保存，一周内使用。不能反复冻融试剂溶液。4. 检测设备： LKM动态试管检测仪。5. 实验用具： 250 l无热原吸头、20-200 l移液器、75试管恒温仪、旋涡混合器、塑料试管架、无热原真空采血管（肝素抗凝剂）。6. 标本采集及送检要求 6.1 标本采集要求6.1.1 采集过程要求无菌操作，用指定的肝素类抗凝、无菌、无葡聚糖采血管；6.1.2 常规住院病人早上用药前空腹采血，血透患者透析前采血。6.2 标本的送检和保存要求标本采集后应在半小时内离心

3、，4小时内检测完。若当日不能及时检测的标本应将离心后的血浆转移至无葡聚糖的容器内-20以下冷冻保存，一周内使用。7. 实验操作7.1 在试验开始前，先开启LKM动态试管检测仪，预热，一段时间后发出哔的一声，试管仪温度达到37，待用；7.2 取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血12 ml，以400 g离心10分钟；7.3 取富含血小板的血浆100 l，加到样品稀释瓶中，在旋涡混合器上轻轻混匀，然后插入75试管恒温仪中加热10分钟；7.4 加热10分钟后，将样品稀释瓶从75试管恒温仪中取出，使其降至室温即可，即为1:10稀谷风书苑#释的样品供试溶液；7.5 取-G试剂1支，开启；7.6

4、取-G试剂复溶液1支，开启后用移液器取0.25 ml加入-G试剂中，轻轻摇匀，澄清后得试剂溶液备用；7.7 打开检测软件连接LKM动态试管检测仪，进入临床检查采集数据界面，点击“开始”按钮，使检测软件进入待采集状态；7.8 取本试剂盒所配的专用反应试管，先取已制备好的样品供试溶液100 l加入反应试管中，然后加入50 l试剂溶液，每个样品供试品溶液平行两管；7.9 加样完毕，依次拿起试管在旋涡混合器上轻点一下，使试管中的溶液均匀混合，然后把各试管逐一插到LKM动态试管仪中，反应开始，37反应75分钟，在反应结束前填写试验相关的信息；7.10 反应完毕，检测软件将自动处理数据，计算出样品供试溶液

5、中的（1-3）-G葡聚糖测量值，进入“临床检查数据报告”可查看检验结果，进入“临床检查数据分析”可查看反应曲线。8. 假阳性因素8.1 (1-3)-D葡聚糖污染。使用非试剂厂家提供的采血管、反应试管、吸头等容易受 (1-3)-D葡聚糖污染；8.2 某些纤维素透析膜污染，如血液透析、腹膜透析等；8.3 G试验前注射过香菇多糖、脂肪乳等药物；8.4 手术后使用纱布。9. 假阴性因素9.1 不敏感菌：某些真菌如接合菌（毛霉菌、根霉菌）细胞壁没有（1-3）-D 葡聚糖成分；隐球菌细胞壁外有荚膜致使（1-3）-D 葡聚糖释放不出，这些真菌G试验不能检测。有临床症状，但G试验阴性时，临床医生可考虑这两种真

6、菌感染的可能。9.2 定植菌：研究显示，定植真菌不引起患者血液的（1-3）-D 葡聚糖升高，即使是严重定植。因此G试验阴性可以区分真菌定植或侵袭性感染。10. 结果分析表1 结果分析表检测结果结果分析d100.5pg/ml阴性结果；如患者出现宿主因素72小时再次检测。100.5d151.5pg/ml阳性结果；624小时内复查确认。存在宿主因素建议用药治疗。11. 反应曲线分析表2 反应分析曲线正常的真菌阳性曲线异常的真菌阳性曲线正常的真菌阳性曲线走势呈反“S”形，曲线终点的RT值较低。异常的真菌阳性曲线走势呈“S”形，曲线前段突然下降，曲线后段趋平，曲线终点的RT值较高。1、 异常的真菌阳性曲

7、线一般是临床用药产生的干扰，建议排除干扰后重新检测；2、 对达限时间短（6000pg/ml）的阳性结果，应做反应曲线分析；3、 为对患者负责，建议对检测阳性结果都做反应曲线分析。12. 注意事项12.1 预热采集 在进行试验之前，LKM动态试管检测仪一定要提前预热30分钟左右，使其达到工作温度37后，打开检测软件连接试管仪，在加样反应前点击“开始”按钮，使软件进入待采集状态。 12.2 取样与保存 可检测的样本：血液、尿液、腹水等；采集要求：采样过程要求无菌操作，无热原真空采血管采血；保存：样品采集后应在半小时内离心，若4小时内不用，可分离出血浆置-20以下冰箱中进行冷冻保存30天。12.3 样本预处理及加样反应 采有血液的无热原真空采血管应以400g离心10分钟；取已分离的血浆上清液的中部；75C加热应为时间10分钟，加热完毕后冷却至室温；插管要一次性插到底，插入后不能再触碰；每个样本的平行两管必须插入仪器的连续两孔；可在插入管反应后再填写相关的试验信息，但一定要在试验结束前填写，否则数据将不保存。13. 临床意义13.1 G试验可以早期、快速诊断侵袭性真菌病（IFD），可用于真菌感染早期筛查；13.2 适用于念珠菌，曲霉，肺孢子菌，镰刀菌，