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文档简介
1、微生物的革兰氏染色一、 实验目的:1、学习并初步掌握革兰氏染色法;2、了解革兰氏染色的原理;3、巩固显微镜的使用。二、 实验原理:革兰氏染色是细菌学中最重要的鉴别染色法。染色步骤分为四个部分:1、 初染:加入碱性染料结晶紫固定细菌图片;2、 媒染:加入碘液,碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物;3、 脱色:利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色;4、 复染:复红配成碳酸复红作为复染剂。成分占细胞壁干重的%革兰氏阳性细菌革兰氏阴性细菌肽聚糖含量很高(5090)含量很低(10)磷壁酸含量较高(50)无类脂质一般无(2)含量较高(20)蛋白质无含量较高G-和G+细胞壁的比较:1、 阳性(G+)菌细胞壁特点:细
2、胞壁厚,只有一层,主要由肽聚糖构成,肽聚糖含量高,结构紧密,脂类含量低。当乙醇脱色时,细胞壁肽聚糖层孔径变小,通透性降低,结晶紫和碘的复合物被保留在细胞壁内,复染后仍显紫色(如芽孢杆菌)。2、 阴性(G-)菌细胞壁特点:细胞壁薄,由两层构成,内壁层和外壁层,细胞壁中脂类中脂类物质含量较高,肽聚糖含量较低,网状结构交联程度低,乙醇脱色时溶解了脂类物质,通透性增强,结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来,因此,革兰氏阴性菌细胞被脱色,当复染时,脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色(例如大肠杆菌)。三、 实验步骤:1、取一个载玻片,将其洗净并沿一个方向擦拭干净,直至液体不再其上收缩为止;将接种环整平,用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌,按常规方法图片,应涂大,不宜过厚。2、将涂片用火焰固定,不宜烤得太狠,否则菌种呈假阳性。3、滴加1滴结晶紫染液,染色1min,水洗。4、滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗5、滴加脱色乙醇,脱色3040s,不宜脱色太狠,否则菌种呈假阴性。6、水洗,滴加番红复染液,复染1min,水洗,晾干7、镜检并拍照。四、 注意事项:1、选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。2、涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键,脱色不够造成假阳性,脱色过度造成假阴性。实验结果与讨论:1、结
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