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文档简介

1、微生物的革兰氏染色一、 实验目的：1、学习并初步掌握革兰氏染色法；2、了解革兰氏染色的原理；3、巩固显微镜的使用。二、 实验原理：革兰氏染色是细菌学中最重要的鉴别染色法。染色步骤分为四个部分：1、 初染：加入碱性染料结晶紫固定细菌图片；2、 媒染：加入碘液，碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物；3、 脱色：利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色；4、 复染：复红配成碳酸复红作为复染剂。成分占细胞壁干重的%革兰氏阳性细菌革兰氏阴性细菌肽聚糖含量很高（5090）含量很低（10）磷壁酸含量较高（50）无类脂质一般无（2）含量较高（20）蛋白质无含量较高G-和G+细胞壁的比较：1、 阳性（G+）菌细胞壁特点：细

2、胞壁厚，只有一层，主要由肽聚糖构成，肽聚糖含量高，结构紧密，脂类含量低。当乙醇脱色时，细胞壁肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫和碘的复合物被保留在细胞壁内，复染后仍显紫色（如芽孢杆菌）。2、 阴性（G-）菌细胞壁特点：细胞壁薄，由两层构成，内壁层和外壁层，细胞壁中脂类中脂类物质含量较高，肽聚糖含量较低，网状结构交联程度低，乙醇脱色时溶解了脂类物质，通透性增强，结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来，因此，革兰氏阴性菌细胞被脱色，当复染时，脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色（例如大肠杆菌）。三、 实验步骤：1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦拭干净，直至液体不再其上收缩为止；将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常规方法图片，应涂大，不宜过厚。2、将涂片用火焰固定，不宜烤得太狠，否则菌种呈假阳性。3、滴加1滴结晶紫染液，染色1min，水洗。4、滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗5、滴加脱色乙醇，脱色3040s，不宜脱色太狠，否则菌种呈假阴性。6、水洗，滴加番红复染液，复染1min，水洗，晾干7、镜检并拍照。四、 注意事项：1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。2、涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。实验结果与讨论：1、结

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