地中海贫血筛查方案与遗传咨询.ppt

1、地中海贫血筛查方案与遗传咨询,梅州市新生儿疾病筛查中心 黄烁丹,两种常见遗传病发生状况,梅州市客家人是地中海贫血高发人群，发生率为13.6%，明显高于广东省平均发生率（10.9%）；另外，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症的发生率约4.2%，是这两种遗传病的高发区。,地中海贫血,地中海贫血（thalassemia）是由于珠蛋白基因缺失或突变导致某种珠蛋白肽链合成障碍，造成链和链合成失去平衡而导致的溶血性贫血。,正常血象,地贫血象,珠蛋白基因簇的分子结构,2 inter-HVR 1 2 1 2 1 3HVR,Fig.1.Schematic diagram of a portion of g

2、lobin gene cluster,5,3,珠蛋白基因簇的分子结构,（3）珠蛋白基因的结构,各种血红蛋白在人体发育不同阶段的变化，是由于各种珠蛋白链的合成随着个体发育的进程有规律的演变，呈现严格的消长过程。,（成人）,（胎儿）,（胚胎）,（胚胎）,- 6 -3 出生月份 3 6,50 40 30 20 10 存在的多肽链（%）,正常人体不同发育阶段的主要血红蛋白分子类型,地中海贫血分类,根据合成障碍的肽链不同可把地中海贫血分为和地中海贫血两类； 根据临床表征，地贫分为重型、血红蛋白H病、轻型和静止型，地贫分为重型、中间型、轻型和遗传性胎儿血红蛋白持存症（HPFH）四种。,地贫缺失型,地贫的临

3、床类型及基因型,(1) HbBarts胎儿水肿综合征(HbBarts hydrops fetalis syndrome) （2）血红蛋白H病（HbH病） （3）轻型（标准型）地贫 （4）静止型地贫,HbBarts胎儿水肿综合征 由于基因全部缺失链缺乏链相对过多形成四聚体(HbBarts) 氧亲和力升高胎儿28-30周全身水肿,严重缺氧,多在宫内死亡或产下即死. 脐血电泳: HbBarts 60-80%和少量HbPortland.,重型地贫儿,遗传咨询,HbBarts水肿胎儿的基因型:-/- HbBarts水肿胎儿的父母的基因型： （即0地贫的杂合子） 再发风险：为HbBarts水肿胎儿 为正常

4、人 为0地贫的杂合子 注:下一胎须产前诊断,配子类型 / / / / ,（2）血红蛋白H病（HbH病） 缺失3个基因链链相对形成四聚体（HbH），4不稳定，易氧化变性形成H包涵体RBC变形性溶血。 临床表现：中度或较严重贫血，脐血Hb电泳BartsHbH，6个月后HbBarts消失，HbH。,血红蛋白H病儿童,遗传咨询,血红蛋白H病患者的基因型为： / 或者/ T 血红蛋白H病患者父母的基因型为： （）与（） 或 （）与 （ T ),配子类型 T / T T / / / ,假如父母的基因型为（）与 （ T),遗传咨询,再发风险: 血红蛋白H病: 轻型: 静止型: 正常: 下胎须产前诊断,（3）

5、轻型（标准型）地贫 基因型为： 0地贫杂合子（）或地贫纯合子（） 新生儿期或有轻度贫血，脐血HbBarts 5-10%。 轻型患者之间婚配的再发风险,遗传咨询,轻型与正常人婚配,其下一代风险估计: 轻型: 正常: 无须产前诊断,（4）静止型地贫 仅缺失一个基因，为地贫杂合子（ -） 或非缺失型地贫杂合子（T） 无症状，脐血HbBarts 5%以下 静止型与轻型患者之间婚配： 可有机会生育子女 HbH病患儿,地中海贫血的临床分型,（1）重型地中海贫血 （2）轻型地中海贫血 （3）中间型地中海贫血 （4）遗传性胎儿血红蛋白持续增多症,完全不能合成链者,称为0地贫 能部分合成链者(约为正常的5%-3

6、0%),称+ 地贫 （1） 重型地中海贫血 基因型：（0/0） （+/+） （0/0） （0/+）,临床表现：进行性溶血性贫血，肝脾肿大， 特殊面容。由于链缺乏 或过多的链变性沉积RBC变形性，通透性改变溶血性贫血组织缺氧促红细胞生成素造血增强、骨髓增生骨畸形、骨髓外造血肝脾肿大。,重型地贫儿,（2）轻型地中海贫血 （0/A）（+/A）（0/A） （3）中间型地中海贫血 患者通常是某些地贫的纯合子或两种不同变异型的双重杂合子,（4） 遗传性胎儿血红蛋白持续增多症 （ HPFH） 由于基因簇中某些DNA片段的缺失或者点突变，使和链的合成受到抑制，而链的合成明显增加，使成人HbF含量持续增多。特点

7、是：HbF在成人仍持续较高水平，无明显的临床症状。,遗传咨询,遗传咨询,要点: 产前诊断，防止重型儿出生 再发风险的估计 预防新生儿溶血性黄疸 儿童贫血的监控,梅州地中海贫血研究背景,.梅州市妇幼保健院1998年建立遗传实验室（梅州首家） 开展项目:地贫筛查一套、G-6PD缺乏症 筛查及确诊实验 .2000年开展地贫基因诊断（目前梅州唯一开展地贫基因诊断的实验室）,技术方法,地贫筛查一套：脆性一管法、抗碱血红蛋白、血红蛋白A2定量、血红蛋白电泳 方法比较：MCV结合HB电泳 三联法 推荐方法：脆性一管法结合MCV,梅州地区地中海贫血检查结果 例（%）,地贫基因诊断： 地贫：东南亚缺失型，含地贫

8、1、 地贫2（杂合子、纯合子） 地贫：中国人已发现的十九种点 突变，包括广东省常见五 个突变位点和其它十四个点突变类型,分子流行病学,SEA/SEA）占0.4%，地贫1杂合子（基因型：SEA/）占89.9%，血红蛋白H病（基因型：SEA/3.7占2.1%，SEA/4.2占1.3%）共3.4%，地贫2纯合子（基因型：4.2/4.2）占2.1%，地贫2杂合子（基因型：/4.2占0.8%，/3.7占3.4%）共4.2%，以上基因缺失类型构成了地贫的临床上各种表型的地中海贫血症状。,地贫以珠蛋白基因点突变为主，在当地已检测的264例中发现六种点突变类型，各基因频率如下：插入序列（IVS）-654（CT

9、）突变（34.14%）、(CD)41-42（-TTCT）移码突变（29.26%）、TATA box nt -28（AG）转录突变（12.2%）、CD17（AT）无义突变（17.1%）、CD26（GA, E）加工突变（4.9%）、CD71-72(2.4%),可见前四位的IVS-654、CD41-42、 -28、 CD17已占92.7%，有明显的特异性；其中发现了5例重型地贫，分别是41/42纯合子2例，654纯合子2例，654/-28双重杂合子1例。,以上资料显示了当地人群珠蛋白基因缺失和突变的特异性，这对于指导当地开展遗传咨询、产前基因诊断及推行优生优育政策有着重要的参考价值。,地贫筛查方案：

10、实验技术,满足标本要求：新生儿脐带血 满足实验要求：简便、快速、准确 满足质量要求：有商业试剂、质控方法,地贫筛查方案：实验技术,推荐方法：红细胞脆性一管法 特点：可基本满足以上三点要求 运用：适合新生儿筛查，也是适合成年 人产前筛查 比较：MCV法适合于成人，但对于新生儿筛脐带血的运用研究仍未成熟,筛查实验技术,筛查中心实验室筛查流程: (成年人)红细胞脆性3.5%或HbF1.2% 成年人HbA255% 新生儿有Hb Barts, HbF55% 疑为地贫，进行地贫反向点杂交 疑为地贫，进行地贫 基因分型诊断 基因分型诊断 确诊地贫突变类型 确诊地贫缺失类型,筛查实验技术,筛查标本采集 采血用

11、具 1、肝素抗凝瓶（自制） 2、EDTA-K2瓶（15g/L 0.5ml+5ml血.自制） 3、枸橼酸钠抗凝管（商业成品） 采集方法 留取脐带血2ml，立即混匀，置4保存,地贫筛查方案：程序,各县级以上筛查单位开展地贫筛查，乡镇筛查点按照“就近送检”的原则，递送标本到所在区域内县级单位进行地贫筛查 筛查阳性者全部送市筛查中心确诊(纸片) 筛查中心和县级以上筛查单位共同完成遗传咨询，乡镇级应做好地贫防治知识宣教工作,G-6-PD缺乏症筛查方案与遗传咨询,概念,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（Glucose-phosphate dehydrogenase,G6PD） 一种红细胞酶的缺陷病 是华南及西南各省

12、最常见的遗传病之一 食蚕豆可发病，故又称为蚕豆病,临床表现,急性溶血性贫血； 高胆红素血症 核黄疸而后遗智力低下。,临床表现,新生儿G6PD缺乏溶血症 蚕豆病 药物 感染性溶血性贫血 先天性非球形细胞溶血性贫血,G6PD缺乏症筛查方案,1、市筛查中心筛查（干血斑） 2、各县级以上筛查单位确诊 （尚未开展的单位可送市筛查中心确诊） 3、市筛查中心、各县级以上筛查单位提供预 防咨询 4、市筛查中心负责治疗,G6PD缺乏症咨询要点,筛查阳性的意义 确诊的意义 预防溶血的有效措施 贫血的监控 遗传风险的估计,遗传方式,不完全显性伴性遗传， 致病基因位于X染色体长臂2区8带（xq28）。 男女均可得病， 父亲遗传给女儿，不传给儿子 母亲遗传给半数的女儿和儿子。,影响G6PD活性测定结果的因素,并存贫血 感染 溶血时白细胞明显增高 对高度怀疑G6PD缺乏者，待血液学参数恢复正常，溶血停止后2-3个月左右再复查G6PD