db13t 1080-2009 乳及乳制品中β-内酰胺酶的测定

DB13T10802009乳及乳制品中内酰胺酶的测定ICS67100X16DB13可北省地方标准DB13FT10802009乳及乳制品中内酷股酶的测定DETECTIONOFJ3LACTAMASESINMILKANDMILKPRODUCTS20090527发布20090611实施河北省质量技术监督局发布食品伙伴网/FOODMATENET食品伙伴网/FOODMATENETDB13FT10802009AL目U昌本标准的附录A和附录C为规范性附录，附录B为资料性附录。本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。本标准第一法由河北省食品质量监督检验研究院起草。本标准第二法由河北省食品质量监督检验研究院起草。本标准第三法由河北省科学院生物所起草。本标准第一法主要起草人周正、周巍、李丛芬、穆燕魁、张岩。本标准第二法主要起草人李挥、张敬轩、庞坤、范斌、张岩。本标准第三法主要起草人闰静辉、陈英珠、吴萌、程华、李春生、张小兵、董超、李亚瑛。食品伙伴网/FOODMATENETAL目U昌本标准的附录A和附录C为规范性附录，附录B为资料性附录。本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。本标准第一法由河北省食品质量监督检验研究院起草。本标准第二法由河北省食品质量监督检验研究院起草。本标准第三法由河北省科学院生物所起草。本标准第一法主要起草人周正、周巍、李丛芬、穆燕魁、张岩。本标准第二法主要起草人李挥、张敬轩、庞坤、范斌、张岩。DB13FT10802009本标准第三法主要起草人闰静辉、陈英珠、吴萌、程华、李春生、张小兵、董超、李亚瑛。食品伙伴网/FOODMATENETDB13/T1080一2009乳及乳制品中卡内酷股酶的测定第一法杯碟法1范围本标准规定了乳及乳制品中。一内酷胶酶的检验方法杯碟法。本标准适用于生鲜乳、巴氏杀菌乳及灭菌乳中具有活性且对舒巴坦敏感的自内酷胶酶的检验。本方法的检出限为4U1RNL。2原理该方法采用对青霉素类药物绝对敏感的标准菌株，利用舒巴坦特异性抑制自内酷胶酶的活性，并以青霉素作为指示物，通过比对加入自内酷胶酶抑制剂与未加入抑制剂的样品所产生的抑菌圈的大小米间接测定样品中的日内航胶酶。3设备和材料31抑菌圈测量仪或测量尺。32恒温培养箱36C1C。33高压灭菌器。34元菌培养皿内径90MM，具陶瓦盖。35元菌牛津杯外径8001MM,内径60士01MM，高度1000LMM。36麦氏比浊仪或标准比浊管。37无菌吸管1ML001ML刻度值，10ML01ML刻度值。38加样器5L20L，20L200L及配套吸头。4培养基和试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，71为CBII6682中规定的三级水。41试验菌种藤黄微球菌MICROCOCCUSLUTEUS,CMCCB28001，使用菌株代数314代。42磷酸盐缓冲榕液按附录A中A1规定。43生理盐水85GIL按附录A中A2规定。44青霉素标准洛液按附录A中A3规定。45内毗胶酶标准榕液按附录A中A4规定。46舒巴坦标准溶液按附录A中AS规定。47营养琼脂培养基按附录A中A6规定。48抗生素检测用培养基IT按附录A中A7规定。49空白牛奶按附录A中A8规定5操作步骤51菌悬液的制备将藤黄微球菌接种于营养琼脂斜面上，经361C培养18H22H，用无菌生理盐水洗下菌苔即为食品伙伴网/FOODMATENETDB13/T1080一2009乳及乳制品中卡内酷股酶的测定第一法杯碟法1范围本标准规定了乳及乳制品中。一内酷胶酶的检验方法杯碟法。本标准适用于生鲜乳、巴氏杀菌乳及灭菌乳中具有活性且对舒巴坦敏感的自内酷胶酶的检验。本方法的检出限为4ULRNL。2原理该方法采用对青霉素类药物绝对敏感的标准菌株，利用舒巴坦特异性抑制自内酷胶酶的活性，并以青霉素作为指示物，通过比对加入自内酷胶酶抑制剂与未加入抑制剂的样品所产生的抑菌圈的大小米间接测定样品中的日内航胶酶。3设备和材料31抑菌圈测量仪或测量尺。32恒温培养箱36CT1C。33高压灭菌器。34元菌培养皿内径90MM，具陶瓦盖。35元菌牛津杯外径80T0LMM,内径60士01MM，高度100T01MM。36麦氏比浊仪或标准比浊管。37无菌吸管1ML001ML刻度值，10ML01ML刻度值。38加样器5L20L，20L200L及配套吸头。4培养基和试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，71为GBI6682中规定的三级水。41试验菌种藤黄微球菌MICROCOCCUSLUTEUS,CMCCB28001，使用菌株代数314代。42磷酸盐缓冲榕液按附录A中AL规定。43生理盐水85G/L按附录A中A2规定。44青霉素标准洛液按附录A中A3规定。45内毗胶酶标准榕液按附录A中A4规定。46舒巴坦标准溶液按附录A中A5规定。47营养琼脂培养基按附录A中A6规定。48抗生素检测用培养基LL按附录A中A7规定。49空白牛奶按附录A中A8规定5操作步骤51菌悬液的制备将藤黄微球菌接种于营养琼脂斜面上，经36TLC培养18H22H，用无菌生理盐水洗下菌苔即为DB13FT10802009菌悬液，测定菌悬液浓度，终浓度应大于1X1010CFU/ML,4C保存，贮存期限2周。52样品的制备将待检样品充分混匀，取1ML待检样品于15ML离心管中共4管，分别标为A、B、C、D，每个样品做三个平行。53对照的制备531阴性对照，每次检验应取空白牛奶1ML加入到15ML离心管中共四管，分别标为A、B、C、D，每次实验均做三个平行作为对照。532阳性对照，取空白牛奶1ML加入到15ML离心管中，加入。内酷胶酶标准榕液25L，共做四管，分别标为A，B,C、D，每次实验均做三个平行作为对照。54检验用平板的制备取90MM灭菌培养皿底层加10ML灭菌的抗生素检测用培养基E凝固后上层加入5ML含有浓度为1XI08CFU/ML藤黄微球菌的抗生素检测用培养基E每个检验用平板上均匀放置4个无菌牛津杯。55样品的测定按照下列顺序分别将青霉素标准榕被、自内酷胶酶标准榕液、舒巴坦标准揭穿液加入到52各离心管中A青霉素5L。B舒巴坦25L、青霉素5L。C内酷胶酶25L终浓度4UML、青霉素5L。D内酷胶酶25L终浓度4U/ML、舒巴坦25L、青霉素5L。将上述AD试样混匀后各取200L加入放置于检验用平板上的4个无菌牛津杯中，36土IC培养1822H，测量抑菌圈直径。取主组平行试验平均值。6结果观察各平行试验结果差异应小于20MM阴性对照与阳性对照结果应符合表1实验现象，则可进行结果报告。表1实验现象对应表阴性对照阳性对照A抑菌圈直径应在20土20ROM范围内B、D均产生抑菌圈B、D均产生抑菌圃C抑菌圈与D抑菌圃差异大于等于30ROMC抑菌圈与D抑菌圈差异大于等于30ROMA抑菌圈与B抑菌圈差异小于30MMA抑菌圈与B抑菌阁差异大于等于30ROM7结果报告71样品结果同阳性对照结果实验现象一致可判定检验结果阳性。72如样品结果同阴性对照结果现象一致可判定检验结果阴性。2食品伙伴网/FOODMATENETDB13FT10802009第二法高效液相色谱一质谱/质谱法1范围本标准规定了乳及乳制品中具有活性的自内酷胶酶的高效液相色谱串联质谱的定性检测方法。本标准适用于生鲜乳、巳氏杀菌乳及灭菌乳中具有活性的。内酷胶酶的定性检验。本方法对自内酷胶酶的检测低限为4ULML。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBFF6682分析实验室用水规格和实验方法GB厅66822008，ISO36961987,MOD。3原理利用自内酷胶酶酶解青霉素族药物的原理，在试样中加入一定量氨节青霉素，酶解后，试样中氨节青霉素经乙腊水榕液提取，提取液浓缩后，用缓冲榕液溶解，固相萃取净化，浓缩，液相色谱质谱/质谱测定，外标法定量，通过试样中氨节青霉素酶解率，间接定性。内酷胶酶。4试剂除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为GBFF6682规定的一级水。41乙睛高效液相色谱级。42甲醇高效液相色谱级。43甲酸高效液相色谱级。44氯化销。45氢氧化锅。46磷酸二氢饵。47磷酸氢二饵。4801MOLNL氢氧化铀称取4G氢氧化锅，并用水稀释至1000ML。49乙睛水152，体积比。410乙睛水3070，体积比。411005MOLNL磷酸盐缓冲榕液PH70称取34G磷酸二氢饵，超纯水溶解，稀释至1000ML,用氢氧化铀调节PH至70OL。412001MOUL乙酸镀榕液PH45称取077G乙酸钱，超纯水榕解，稀释至1000ML，用甲酸调节PH45土01。413氨节青霉素标准品纯度大于等于959忘。414标准储备榕液100G/ML称取适量标准品414，用超纯水溶解并定容至10ML，置于18T冰箱避光保存，保存期5D。415标准工作榕液吸取适量的氨书青霉素标准储备液415，用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质标准工作溶液，用时现配。416OASISHLB固相萃取小柱，或相当者500MG,6ML，使用前用甲醇和水预处理，即先用2ML甲醇淋洗小柱，然后用1ML7L淋洗小柱。3食品伙伴网/FOODMATENETDB13FT10802009第二法高效液相色谱一质谱/质谱法1范围本标准规定了乳及乳制品中具有活性的自内酷胶酶的高效液相色谱串联质谱的定性检测方法。本标准适用于生鲜乳、巳氏杀菌乳及灭菌乳中具有活性的。内酷胶酶的定性检验。本方法对自内酷胶酶的检测低限为4U/ML。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBRR6682分析实验室用水规格和实验方法GB厅66822008MOD。3原理利用自内酷胶酶酶解青霉素族药物的原理，在试样中加入一定量氨节青霉素，酶解后，试样中氨节青霉素经乙腊水榕液提取，提取液浓缩后，用缓冲榕液溶解，固相萃取净化，浓缩，液相色谱质谱/质谱测定，外标法定量，通过试样中氨节青霉素酶解率，间接定性。内酷胶酶。4试剂除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为GBRR6682规定的一级水。41乙睛高效液相色谱级。42甲醇高效液相色谱级。43甲酸高效液相色谱级。44氯化销。45氢氧化锅。46磷酸二氢饵。47磷酸氢二饵。4801MOLNL氢氧化铀称取4G氢氧化锅，并用水稀释至1000ML。49乙睛水152，体积比。410乙睛水3070，体积比。411005MOLNL磷酸盐缓冲榕液PH70称取34G磷酸二氢饵，超纯水溶解，稀释至1000ML,用氢氧化铀调节PH至70101。412001MOUL乙酸镀榕液PH45称取077G乙酸钱，超纯水榕解，稀释至1000ML，用甲酸调节PH45土01。413氨节青霉素标准品纯度大于等于959忘。414标准储备榕液100G/ML称取适量标准品414，用超纯水溶解并定容至10ML，置于18T冰箱避光保存，保存期5D。415标准工作榕液吸取适量的氨书青霉素标准储备液415，用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质标准工作溶液，用时现配。416OASISHLB固相萃取小柱，或相当者500MG,6ML，使用前用甲醇和水预处理，即先用2ML甲醇淋洗小柱，然后用1ML7L淋洗小柱。3DB13/T108020095仪器51液相色谱质谱/质谱仪LCMS/MS配有电喷雾离子掘。52旋转蒸发器。53固相萃取装置。54低温冷冻离心机。55均质器。56涡旋昆合器。57PHI十。58氮吹仪。6试样制备与保存取代表性样品，混匀后，装人洁净容器中，密封，并标明标记，于04C冷藏存放。7分析步骤71氢韦青霉素的加入称取109样品精确到001G于50ML离心管中，加入01ML氨节青霉素标准储备液415，混匀。72酶解将71试样置于37C恒温水浴，酶解1H。73提取在72酶解后的试样中加入20ML乙睛49，均质提取30S,4000RLMIN低温冷冻离心5MIN，上清液转移至50ML离心管中另取一离心管，加入10ML乙腊水溶液49，洗涤均质器刀头，用玻璃棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头榕液，在涡旋I昆合器上振荡1MIN,4000/MIN低温冷冻5MIN，上清液合并至50ML离心管中，重复用10ML乙睛7榕液49洗涤刀头并提取一次，上清液合并至50ML离心管中，用乙脂水溶液49定容至50ML。准确移取25ML于100ML鸡心瓶。将鸡心瓶于旋转蒸发器上37C水浴蒸发除去乙睛，易起沫样品可加入4ML饱和氯化铀榕液。74净化迅速向已除去乙腊的鸡心瓶中加入25ML磷酸盐缓冲榕液411，涡旋混匀1MIN，用01MOL几氢氧化铀调节PH为85，通过经过预处理的固相萃取柱，流速控制在1MUMIN，先用2ML磷酸盐缓冲榕液411淋洗2次，再用1ML超纯水淋洗，然后用3ML乙睛洗脱，流速控制在1MUMIN。将洗脱液于45C下氮气吹干，用0025MOL/L磷酸盐缓冲溶液412定容至1ML，过022M滤膜，供LCMS/MS分析。75测定751参考色谱条件7511色谱柱ODSC18柱，250MMX46MM，粒度5M，或相当者。7512流动相A组为001MALLL乙酸锻榕液甲酸调PH至45B组为乙睛。AB901O。7513流速10MUMIN。7514进样量10L。752参考质I普条件7521离子源电喷雾离子掘。7522扫描方式正离子扫描。7523检测方式多反应监测MRM。7524毛细管电压4000VO4食品伙伴网/FOODMATENETDB13/T108020095仪器51液相色谱质谱/质谱仪LCMS/MS配有电喷雾离子掘。52旋转蒸发器。53固相萃取装置。54低温冷冻离心机。55均质器。56涡旋昆合器。57PHI十。58氮吹仪。6试样制备与保存取代表性样品，混匀后，装人洁净容器中，密封，并标明标记，于04C冷藏存放。7分析步骤71氢韦青霉素的加入称取LOG样品精确到001G于50ML离心管中，加入01ML氨节青霉素标准储备液415，混匀。72酶解将71试样置于37C恒温水浴，酶解1H。73提取在72酶解后的试样中加入20ML乙睛49，均质提取30S,4000RLMIN低温冷冻离心5MIN，上清液转移至50ML离心管中另取一离心管，加入10ML乙腊水溶液49，洗涤均质器刀头，用玻璃棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头榕液，在涡旋I昆合器上振荡1MIN,4000R/MIN低温冷冻5MIN，上清液合并至50ML离心管中，重复用10ML乙睛7榕液49洗涤刀头并提取一次，上清液合并至50ML离心管中，用乙脂水溶液49定容至50ML。准确移取25ML于100ML鸡心瓶。将鸡心瓶于旋转蒸发器上37C水浴蒸发除去乙睛，易起沫样品可加入4ML饱和氯化铀榕液。74净化迅速向已除去乙腊的鸡心瓶中加入25ML磷酸盐缓冲榕液411，涡旋混匀1MIN，用01MOL几氢氧化铀调节PH为85，通过经过预处理的固相萃取柱，流速控制在1MUMIN，先用2ML磷酸盐缓冲榕液411淋洗2次，再用1ML超纯水淋洗，然后用3ML乙睛洗脱，流速控制在1MUMIN。将洗脱液于45C下氮气吹干，用0025MOL/L磷酸盐缓冲溶液412定容至1ML，过022M滤膜，供LCMS/MS分析。75测定751参考色谱条件7511色谱柱ODSC18柱，250MMX46MM，粒度5M，或相当者。7512流动相A组为001MOL/L乙酸锻榕液甲酸调PH至45B组为乙睛。AB901O。7513流速10MUMIN。7514进样量10L。752参考质I普条件7521离子源电喷雾离子掘。7522扫描方式正离子扫描。7523检测方式多反应监测MRM。7524毛细管电压4000VO4DB13/T1080一20097525雾化气压力0055MPA。7526干燥气流速10UMINO7527离子源温度3501。7528定性离子对、定量离子对等参数见表1。表1氨节青毒素定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和碰撞电压定性定量碰撞气碰撞名称离子对离子对能量电压M/ZM/ZVV氨书青在1素350/192350/16010120AMPICILLIN350/160753液相色谱质I普/质I普测定7531定性测定选择氨节青霉素的1个母离子，2个及以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在25之内样品色谱图中各定性离子相对丰度与浓度接近的基质标准洛液的色谱图中离子相对丰度比，若偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度5020501020主主10允许的最大偏差士20士25士30士507532定量测定用氨节青霉素标准储备溶液配成的基质标准溶液416进样分析，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，标准曲线的相关系数要求不小于0995。根据试样中被测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作液进行单点校准，外标法计算。754本底实验除不加氨节青霉素外，均按上述操作步骤进行。8结果计算与表述81试样中氨节青霉素含量的计算试样中氨书青霉素的含量趴CG或问按式1计算AXCSXVXLASXW式中X一一试样中氨节青霉素的含量，单位为微克每千克或微克每升GKG或/LGLA一一试样溶液中氨节青霉素的峰丽积AS标准工作液中氨书青霉素的峰面积CS标准工作液中氨书青霉素的浓度，单位为微克每千克或微克每升/LGKG或/LGLV一一试液最终定容体积，单位为毫升MLW一最终样液代表的试样质量，单位为克G。计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留3位有效数字。汁算结呆需折算回收率。5食品伙伴网/FOODMATENETDB13/T1080200982重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。83回收率本方法在试样中添加05MGLKG2MGLKG浓度时回收率为80110。9定性判定91氢韦青葛素的酶解率酶解后试样中氨节青霉素的酶解率按式2计算CNCCYO,SX1002G式中Y一一酶解后试样中氨书青霉素的酶解率，单位为百分比C。一一酶解前试样中氨苇青霉素的加入浓度，单位为微克每千克或微克每升GLKG或GILC一一酶解后试样中氨书青霉素的含量，单位为微克每千克或徽克每升GLKG或GILCS酶解后试样本底中氨书青霉素的含量，单位为微克每千克或微克每升趴G或GIL。92结果判定酶解率30，则判定为阳性。酶解率30，则判定为阴性。6食品伙伴网/FOODMATENETDB13/T1080200982重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。83回收率本方法在试样中添加05MGLKG2MGLKG浓度时回收率为80110。9定性判定91氢韦青葛素的酶解率酶解后试样中氨节青霉素的酶解率按式2计算CNCCYOSJX1002G式中Y一一酶解后试样中氨书青霉素的酶解率，单位为百分比C。一一酶解前试样中氨苇青霉素的加入浓度，单位为微克每千克或微克每升GLKG或G1LC一一酶解后试样中氨书青霉素的含量，单位为微克每千克或徽克每升GLKG或G1LCS酶解后试样本底中氨书青霉素的含量，单位为微克每千克或微克每升趴G或G1L。92结果判定6酶解率30，则判定为阳性。酶解率30，则判定为阴性。DB13FT10802009第三法确量法1范围本标准规定了鲜乳中卡内酷胶酶的快速腆量法检测方法。本标准适用于鲜乳中自内酷胶酶的测定。本方法对卡内酷胶酶的检测低限为5ULML。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBFF6682分析实验室用水规格和实验方法GB厅66822008，ISO36961987,MOD。3原理自内眈胶酶能裂解青霉素的内酷胶环形成青霉唾瞠酸，它与淀粉竞争游离腆，破坏了础和淀粉的兰色复合物，使兰色变为白色。如果牛奶中的卡内酷腊酶浓度高于检测限，检测结果为白色。4试荆除另有说明外，所有试剂均为分析纯，ZJ为GBFF6682规定的一级水。41可溶性淀粉按附录C中CL规定。42腆按附录C中C2规定。43腆化饵按附录C中C3规定。44盐酸按附录C中C4规定。45青霉素铀按附录C中C5规定。46日内酷胶酶对照品按附录C中C6规定。47不含内酷胶酶的乳品按附录C中C7规定。5仪器51冷冻干燥机。52恒温干燥箱40C。53微量振荡器。54分析天平精度0001G。55微波炉。56移液器10L、40L、150L。57冰箱。58微孔板。6试样制备与保存取代表性样品，混匀后，装人洁净容器中，密封，并标明标记，于04C冷藏短期存放。7对照制备71取阳性对照，用移液器注入500L水，振荡，充分榕解备用72取阴性对照用移液器注入500L水，振荡，充分榕解备用7食品伙伴网/FOODMATENETDB13FT10802009第三法确量法1范围本标准规定了鲜乳中卡内酷胶酶的快速腆量法检测方法。本标准适用于鲜乳中自内酷胶酶的测定。本方法对卡内酷胶酶的检测低限为5ULML。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBFF6682分析实验室用水规格和实验方法GB厅66822008，ISO36961987,MOD。3原理自内眈胶酶能裂解青霉素的内酷胶环形成青霉唾瞠酸，它与淀粉竞争游离腆，破坏了础和淀粉的兰色复合物，使兰色变为白色。如果牛奶中的卡内酷腊酶浓度高于检测限，检测结果为白色。4试荆除另有说明外，所有试剂均为分析纯，ZJ为GBFF6682规定的一级水。41可溶性淀粉按附录C中C1规定。42腆按附录C中C2规定。43腆化饵按附录C中C3规定。44盐酸按附录C中C4规定。45青霉素铀按附录C中C5规定。46日内酷胶酶对照品按附录C中C6规定。47不含内酷胶酶的乳品按附录C中C7规定。5仪器51冷冻干燥机。52恒温干燥箱40C。53微量振荡器。54分析天平精度0001G。55微波炉。56移液器10L、40L、150L。57冰箱。58微孔板。6试样制备与保存取代表性样品，混匀后，装人洁净容器中，密封，并标明标记，于04C冷藏短期存放。7对照制备71取阳性对照，用移液器注入500L水，振荡，充分榕解备用72取阴性对照用移液器注入500L水，振荡，充分榕解备用7DB13FT108020098测定81根据检测样品数量取适量的检测孔，每孔检测一个样82取阳性对照150L加入1个小孔中83取阴性对照150L加入1个小孔中84样品处理取奶样，去除悬浮物，用微量移液器吸取奶样150L分别加入到检测孔中85所有样品加完后，贴封口膜，置微量振荡器上振荡10分钟86放入40C恒温箱中，保温20分钟87取出检测孔，除去封口膜，用微量移液器吸取1的淀粉溶液，每孔加入40L，振荡棍匀88用微量移液器吸取腆液，每孔40L，用移液器吹吸均匀89振荡2分钟，观察结果。9检测注意事项混匀要彻底，但不要产生泡沫，严禁将样品溅出。10结果判定白色为阳性。蓝色为阴性。8食品伙伴网/FOODMATENETDB13/T108020098测定81根据检测样品数量取适量的检测孔，每孔检测一个样82取阳性对照150L加入1个小孔中83取阴性对照150L加入1个小孔中84样品处理取奶样，去除悬浮物，用微量移液器吸取奶样150L分别加入到检测孔中85所有样品加完后，贴封口膜，置微量振荡器上振荡10分钟86放入40C恒温箱中，保温20分钟87取出检测孔，除去封口膜，用微量移液器吸取1的淀粉溶液，每孔加入40L，振荡棍匀88用微量移液器吸取腆液，每孔40L，用移液器吹吸均匀89振荡2分钟，观察结果。9检测注意事项混匀要彻底，但不要产生泡沫，严禁将样品溅出。10结果判定8白色为阳性。蓝色为阴性。DB13FT10802009附录A规范性附录培养基A1磷酸盐缓冲溶液PH60元水磷酸二氢饵80G元水磷酸氢二饵20G蒸饵水加至1000MLA2生理盐水85G几氯化铀85G蒸馆711000ML121C高压灭菌15MIN。A3青霉素标准溶液准确称取适量青霉素标准物质，用磷酸盐缓冲榕液榕解并定容为01MG/ML的标准溶液。当天配制，当天使用。A413内酷肢酶标准溶在准确量取或称取适量自内酷胶酶标准物质，用磷酸盐缓冲洛液榕解并定容为160ULML的标准榕液。当天配制，当天使用。A5舒巴坦标准溶液准确称取适量舒巴坦标准物质，用磷酸盐缓冲溶液榕解并定容为1MG/ML的标准溶液，分装后20C保存备用，不可反复冻融使用。A6营养琼脂蛋白陈109牛肉膏3G氯化纳5G琼脂1520G蒸馆水1000ML将上述成分加入蒸馆水中，搅混均匀，分装试管每管约58ML,120C高压灭菌15MIN，灭菌后摆放斜面。A7抗生素检测培养基H蛋白陈109牛肉浸膏3G氧化铀5G酵母膏3G葡萄糖1G琼脂14G蒸熠7110ML将上述成分加入蒸馆水中，搅昆均匀，120C高压灭菌15MIN，其最终PH值约为66。A8空白牛奶脱脂奶粉标准品2G蒸馆水20ML准确称取脱脂奶粉标准品2G，蒸馆水定容至20ML9食品伙伴网/FOODMATENETA1磷酸盐缓冲溶液PH60元水磷酸二氢饵80G元水磷酸氢二饵20G蒸饵水加至1000MLA2生理盐水85G几氯化铀85G蒸馆711000ML121C高压灭菌15MIN。A3青霉素标准溶液附录A规范性附录培养基DB13FT10802009准确称取适量青霉素标准物质，用磷酸盐缓冲榕液榕解并定容为01MG/ML的标准溶液。当天配制，当天使用。A4内酷肢酶标准溶在准确量取或称取适量自内酷胶酶标准物质，用磷酸盐缓冲洛液榕解并定容为160U1ML的标准榕液。当天配制，当天使用。A5舒巴坦标准溶液准确称取适量舒巴坦标准物质，