循环肿瘤细胞临床应用及技术讲解

循环肿瘤细胞(CTCs)的临床应用,益善医学检验所益善生物技术股份公司程振,肿瘤治疗的问题与挑战,原发肿瘤,局部寡转移,广泛转移,我们需要找到一种更能准确代表肿瘤的标志，实时监测，全面有效的获取肿瘤信息！,临床需要更实时、更特异的肿瘤监测手段,ASCO Annual Report ：2015 临床肿瘤学进展 液体活检引领未来十年肿瘤治疗,Nat Rev Clin Oncol. 2013;10(8):472-84.,实时监测液体活检样本之ctDNA &CTCs,Cancer Res. 2003;63: 3805-11. Breast Cancer Res. 2009;11:R46. Am J Pathol. 2011;178:989-96.,循环肿瘤细胞（CTCs）,1869年 Aust Med J，Ashworth最早 在转移性癌症患者血液中观察到；存在于外周循环的各类肿瘤细胞统称；来自原发灶、转移灶或不明部位。大多数CTCs在外周血循环中会发生凋亡，只有少数CTCs才能够形成转移,Cancer Letters. 2007, 253: 180204.,CTCs 与肿瘤转移,CTCs的特点,稀少 约1个CTC/109 （10亿）个血细胞，1个CTC/106-7个白细胞。型别差异 CTCs可以是间质型、上皮型、上皮间质混合型、成团的CTC(CTM),CTCs-新型“液体活检”,Breast Cancer：N Engl J Med 351:781-791,2004Prostate Cancer : Lancet Oncol 10:233-239, 2009Colorectal Cancer: J Clin Oncol 26:3213-3221, 2008,CTCs检测的临床应用,CTCs临床应用一：评估预后,10,治疗前,一个周期后,N Engl J Med 2004;351:781-91.,CTC结合影像学更准确评估乳腺癌患者预后,CTC结合影像学对乳腺癌患者的总生存期预测更准确,Group1：CTC5，影像学显示SD/PRGroup2：CTC5，影像学显示PDGroup3：CTC5，影像学显示SD/PRGroup4：CTC5，影像学显示PD,Clin Cancer Res 2006;12(21),对于原发性肺癌患者，CTCs计数在有远处转移的肺癌患者中有显著升高，相关性优于CEA。,CTCs临床应用二：评估复发转移,Clin Cancer Res 2009;15(22),Hepatology.2013, 57(4): 1458-1468.,CTCs临床应用二：评估复发转移,对于肝癌患者，CTCs数量与复发病灶以及复发风险正相关，且相关性优于AFP。,45-male-ESCC（食管鳞状细胞癌）12w，CT-骨和皮下转移104w，PET-CT显示复发,CTC可动态监测肿瘤复发转移风险，及早发出肿瘤转移复发预警，结合血清标志物，能更准确预测疾病进展。,World J Gastroenterol.2015,21(25):7921-8.,CTCs临床应用二：动态监测复发转移,CTCs临床应用三：CTCs计数与疗效监测,化疗后CTC数量减少患者的临床疗效好于CTCs数量增加的患者,化疗前后CTC的数量变化反映临床疗效,化疗前,化疗后,J Clin Oncol. 2011Apr 20;29(12):1556-63.,J Clin Oncol 2008;26:3213-3221.,前列腺癌中CTCs检测的疗效评估价值优于PSA,CTCs检测的临床应用,循环肿瘤微栓子(CTM),Hui L et al., PLos one, 2013.,循环肿瘤微栓子又称循环肿瘤细胞团，一般由3个及以上肿瘤细胞组成。,CTM成瘤能力强于单个CTC,Cell. 2014, 158: 11101122.,CTM的成瘤、转移能力是单个CTC的23-50倍,CTM与预后评估,J Clin Oncol. 2012;30: 525-32.,CTCs检测的临床应用,3.3%,2.7%,Yu M et al., Science , 2013, 339: 580-584.,12.7%,CTCs分型与预后评估,CTCs分型更精确地评估疗效,Yu M et al., Science , 2013, 339: 580-584.,CTCs表型转换与病情进展相关,Yu M et al., Science , 2013, 339: 580-584.,CTCs检测的临床应用,CTC指导实时个体化治疗,CTCs用于检测EGFR突变,N Engl J Med 2008;359:366-77.,sensitivity:96%, specificity:100%,CTCs用于检测肺癌ALK重排,J Clin Oncol 2013;31:2273-81.,CTCs用于检测乳腺癌HER2扩增,吻合率: 97%特异性:100%,PNAS. 2004;101:9393-8.,9位患者，原发灶为HER2扩增阴性，疾病进展之后检测CTC发现HER2扩增阳性，对其中4位采取含赫赛汀治疗方案，3位患者疾病缓解。,CTCs检测追踪乳腺癌患者HER2扩增状态,PNAS. 2004;101:9393-8.,小 结,个体化治疗时代肿瘤实时监测的实现 需要突破性技术对CTCs进行分离、分型和分析，将肿瘤状态实时监测和肿瘤个体化治疗有机结合。对肿瘤复发、转移、疗效评估的预测影响 CTCs的作为肿瘤转移的种子，有望综合反映肿瘤的实时动态，通过跟踪血液中CTCs数量和型别的变化，监测肿瘤动态、评估治疗效果。对实时个体化治疗的影响 CTCs的分子分析，有望综合反映肿瘤分子病理学背景，实时提供肿瘤分子信息，推进肿瘤实时的个体化治疗。,怎样的CTCs检测技术能够满足需求？,免疫捕获法借助上皮细胞标志物EPCAM的表达进行CTC直接捕获；EpCAM的表达存在差异，常导致检测假阴性；会漏检更容易在外周血中存活的EMT CTC和CTM；捕获CTC时，已损坏细胞，不适于蛋白、基因等后续分析。,经典的一代 CTC 检测技术原理,先分离后鉴定，采用上皮+间质标志物进行鉴定，不同表型的CTC均能检出。,技术原理,分离,鉴定,二代检测技术参数,CTCs截留率 80%；特异性 90%；灵敏度 = 1个/5 ml,：高度自动化的识别扫描系统,6层扫描，15分钟完成一次读片以8片为一个单位，自动进片自动识别，人工判读，8个样本自动处理10个荧光通道，可同步满足内部质控和科研目标,CanPatrolTMCTCs精准分型,：CTC 捕获数据,CanPatrolTMCTCs系统深入分析,CanPatrolTM_CTCs