科研随想基金申报科研思路及相关软件

科研随想 -基金申报 -科研思路及相关软件,陈中山广州军区武汉总医院全军眼科中心,全军眼科中心,广州军区武汉总医院,教育经历2004.9-2008.6 第三军医大学西南医院眼科 博士2001.9-2004.6 第三军医大学西南医院眼科 硕士1994.9-1999.6 第三军医大学临床医学系 学士研究工作经历2010.7-至今 广州军区武汉总医院全军眼科中心，主治医师2009.3-2010.6 第三军医大学新桥医院眼科，讲师，主治医师2005.7-2009.2 第三军医大学西南医院全军眼科中心 ，讲师，主治医师2001.9-2005.6 第三军医大学西南医院全军眼科中心 ，医师,个人简介,学术任职国际视觉和眼科研究协会(ARVO)会员国际临床视觉电生理协会(ISCEV)成员 中华医学会眼科学会成员中华眼科医师协会会员中华医学会激光学会成员，全军激光医学委员会学术秘书湖北省激光医学委员兼秘书前中华眼科学会视觉生理学组学术秘书 期刊编委RetinaIOVSJ Neurosci ResNeurosci LettOphthalmologicaIJO中华眼底病杂志等,参与项目评审国家自然科学基金（包括面上项目、杰出青年基金）重庆市自然科学基金重庆市科技攻关项目湖北省自然科学基金全军“十二五”项目,参与申请和完成的基金,指导过的国家自然科学基金转录因子OCT4/SOX2-TGF通路在Barrett食管向食管腺癌转化中的机制研究， 2012年国家自然科学基金；Muller细胞钾离子通道Kir.4.1在视网膜变性疾病中的作用及其调控机制的研究，2012年国家自然科学基金，编号：81200710，经费23万元；小胶质细胞CX3CR1受体在慢性低灌注脑白质损害中的作用及机制研究，2010年国家自然科学基金，编号：81070930，经费30万元；P2X7受体在少突胶质前体细胞缺氧缺血性损伤中作用的研究， 2009年国家自然科学基金，编号：30900467，经费19万元,参加的临床课题研究康柏西普眼用注射液治疗糖尿病黄斑水肿的有效性和安全性试验三期临床Sailing实验，成都康弘生物科技有限公司；一项随机、双盲、III期研究，在因继发于视网膜中央静脉阻塞（CRVO）的黄斑水肿（ME）导致视力损害的患者中，评估雷珠单抗玻璃体内注射相对于假注射的有效性和安全性三期Camellia 试验；一项随机、双盲、III期研究，在因继发于视网膜分支静脉阻塞（BRVO）的黄斑水肿（ME）导致视力损害的患者中，评估雷珠单抗玻璃体内注射相对于假注射的有效性和安全性三期Blossom试验；一项为期12个月的随机、双盲、多中心、阳性对照III期临床研究，在因继发于病理性近视的脉络膜新生血管导致视力损害的患者中，评估雷珠单抗0.5 mg的两种个体化给药方案对比维替泊芬PDT的有效性和安全性三期Brilliance试验；一项24个月、随机、双盲、对照、多中心研究，在新生血管性年龄相关性黄斑变性的中国患者中，评价雷珠单抗0.5 mg两种给药方案的疗效和安全性四期临床Dragon试验；前瞻性、观察性湿性（新生血管性）年龄相关性黄斑变性患者登记研究；AMD患者健康知识教育光明项目；康柏西普眼用注射液（Conbercept）治疗继发于高度近视的脉络膜新生血管病变的有效性和安全性试验三期临床Shiny试验；Q开关脉冲Nd:YAG激光眼科治疗机JLER-Y21临床试验；全固态多波长眼底激光治疗仪Renolas Multiwave；玻璃体腔注射重组人血管内皮生长因子受体-抗体融合蛋白注射液（KH902）治疗继发于年龄相关性黄斑变性的脉络膜新生血管病变的有效性和安全性试验三期临床Phoenix实验（获得美国威斯康辛州立大学眼科中心眼科影像师认证）；眼底激光治疗仪Renolas 532，上海奥通激光技术有限公司；光学相干断层扫描仪RetiView 3D OCT临床实验,发表的的论文（2012-）Z Chen, Y Song, J Yao, C Weng, ZQ Yin. Alterations of Sodium and Potassium Channels of RGCs in RCS Rat with the Development of Retinal Degeneration. J Mol Neurosci, 2013: Aug 10.刘会娟, 陈中山,丁琴, 宋艳萍. 362例息肉样脉络膜血管病变患者的临床特征分析。中华眼底病杂志. 2013; 29(4):361-364.叶湘湘, 陈中山,丁琴, 宋艳萍. 玻璃体腔注射雷珠单抗与光动力疗法联合玻璃体腔注射雷珠单抗治疗特发性脉络膜新生血管的疗效比较. 中华眼底病杂志. 2013; 29(4): 313-317.叶湘湘, 陈中山,丁琴, 宋艳萍. VEGF基因RNA干扰质粒的构建与鉴定. 华南国防医学杂志. 2013; 27(5): 299-304.叶湘湘, 宋艳萍, 陈中山. 伪狂犬病毒在视觉系统跨突触神经示踪中的应用. 中华实验眼科杂志. 2013;15(10).Song YP, Chen ZS, Mo GY, Ding Q, Yan M. An optic atrophy differentially diagnosed as spinocerebellar ataxias from Lebers hereditary optic neuropathy by gene mutation analysis. J Int Med Res, 2012, 40(5): 2009-2013. （通讯作者）Chen ZS, Ding Q, Song YP, Zhu L, Huang ZJ, Yan M. Different outcomes of serpiginous choroiditis with or without ocular and systemic treatment. Int J Ophthalmol. 2012, 5(4): 535-538.Li Y, Li C, Chen Z, He J, Tao Z, Yin ZQ. A microRNA, mir133b, suppresses melanopsin expression mediated by failure dopaminergic amacrine cells in RCS rats. Cell Signal. 2012; 24: 685-698.闫明，宋艳萍，李付亮，陈中山. 视网膜变性大鼠神经节细胞变化及其触发因素探讨。中华眼底病杂志. 2012; 28(3):272-275.（通讯作者）,基金申报,摘要重要意义和现状创新技术方法研究基础,Chen ZS, et al. Clin Exp Ophthalmol, 2006; Chen ZS, et al. Neuroreport, 2005;Yin ZQ, Chen ZS, et al. Ophthalmic Res, 2005;Chen Zhong S, Yin Zheng Q, et al. Prog Biochem Biophys. 2004,C. RCS 60d,H. Control 60d,D. RCS 90d,I. Control 90d,E. RCS 120d,J. Control 120d,(Scale bar=20m),RCS鼠于P60d起发现视网膜神经纤维层的Mller细胞突起排列紊乱，于P90d开始细胞明显变得肥大，P120d时发现部分Mller细胞突起延伸至视网膜下腔在局部形成纤维层样结构。,绿色为mGluR6，红色为Synaptophysin，蓝色为DAPi复染细胞核；ONL为外核层，INL为内核层。红色箭头所指为来源于多个ON-RBCs的异常突起的缠结,CD为RCS大鼠，GH为局部放大bar=10m,申报基金,RCS大鼠视网膜变性过程中视网膜神经层重构机制的研究，2007年国家自然科学基金，编号：30772371，经费30万元我国重要神经性致盲眼病的发病机制及防治研究，2007年国家“973”项目，编号：2007CB512203，经费275万元,2007年NSFCRCS大鼠视网膜色素变性过程中神经视网膜重构机制研究,视网膜色素变性是严重的致盲性眼病，至今尚无有效治疗方法，原因在于感光细胞变性死亡之后神经视网膜病理变化机制尚不明确。视网膜色素变性发生发展过程中各级神经元功能状态如何、各层神经元之间的突触联系从结构和功能上发生了怎样的改变尚不清楚。本项目以RCS大鼠为对象，采用视网膜膜片钳全细胞记录结合神经药理学、细胞内荧光标记、免疫组织化学染色、激光共聚焦、电镜和基因枪标记等方法，研究RCS大鼠视网膜变性过程中神经节细胞、双极细胞、Muller细胞的电学特性和轴树突形态的改变，以及视网膜三级神经元之间突触结构、传导功能、兴奋性和抑制性神经递质及受体介导的突触后电流的变化。阐明视网膜色素变性过程中感光细胞输入障碍导致的各级神经元突触结构和功能的改变与视网膜神经层发生“重构”反应的相互作用机制。从分子水平和神经元信号传导通路研究视网膜色素变性的病理机制，为探索治疗视网膜色素变性疾病的临床途径奠定实验室基础。,（400字符数）,2007年国家973计划我国重要神经性致盲眼病的发病机制及防治研究,VPS,SCN,OPN,RHT,VLPO,SPZ,NVPS,非图像视觉感光系统NVPS(引自Menaker M, Science, 2003),RCS,Normal,RCS,Normal,申报基金,视网膜色素变性疾病中感光神经节细胞耐受损伤的机制研究，2009年国家自然科学基金，编号：30900446，经费23万元神经致盲性眼病的修复与功能重建研究，2011年湖北省研究与开发计划项目，经费：150万元（自筹），项目编号：2011BHC006视网膜变性中含melanopsin神经节细胞周围神经网络的重构及感光基因导入对视网膜功能重建的研究，2012年湖北省卫生厅青年科技人才项目，编号：QJX2012-23，经费：4万元2013.01-2014.12,2009年NSFC视网膜色素变性疾病中感光神经节细胞耐受损伤的机制研究,视网膜内含黑视素(melanopsin)的神经节细胞能直接感光，谓感光神经节细胞（mRGCs），在生物节律、瞳孔反射等方面具有重要的生理作用。我们前期研究发现视网膜变性疾病中继感光细胞丧失之后内层神经元也发生变性死亡，而mRGCs数量上却得以保存，变性晚期其离子通道、神经递质及受体究竟发生了怎样的改变，在mRGCs对变性损伤耐受机制中发挥了什么样的作用，至今未见报道。本研究采用视交叉上核（SCN）荧光金逆行标记mRGCs、视网膜切片膜片钳全细胞记录结合神经药理学方法、细胞内染色和免疫组织化学染色、激光共聚焦等方法，研究RCS大鼠视网膜变性过程中mRGCs钠钾离子通道、神经递质及受体分布、突触后电流的变化，以及与RGCs变性的关系。探讨视网膜变性疾病中RGCs继发感光细胞变性死亡的机制，探索维持视网膜变性疾病中RGCs结构和功能的方法，为视网膜变性疾病的治疗和视功能重建奠定实验室基础。,2013年NSFC视网膜变性中mRGCs周围神经网络的重构及构建感光神经元修复视觉功能的研究,前一课题研究提示视网膜变性中含感光蛋白melanopsin的神经节细胞(mRGCs)能耐受变性损伤，这些存留的mRGCs与周围神经细胞之间会建立怎样的网络连接，是否有功能突触形成，对视觉功能重建有何意义尚不清楚。本项目拟以RCS大鼠为对象，采用激光共聚焦、计算机三维重建、视网膜膜片钳等方法，研究RCS大鼠视网膜变性过程中mRGCs与周围视网膜细胞之间的神经网络重构，探讨该自主重构对视觉功能重建的意义。鉴于自主重构对视功能修复的不足，以及不同感光蛋白的功能差异，拟构建双表达感光基因melanopsin和Channelrhodopsin-2的纳米颗粒，靶向导至RCS大鼠双极细胞，采用膜片钳、视觉电生理、瞳孔光反射、动物行为测试等分别从视网膜和中枢水平检测视觉功能的重建。由此阐明视网膜变性过程中感光细胞输入障碍致视网膜神经网络发生“重构”反应的相互作用机制，并探索光基因导入治疗视网膜变性的可能。,不予资助,工作条件不足内容繁多,2008年NSFCFibulin-5对脉络膜新生血管的阻抑及其对AMD修复机制的研究,老年黄斑病变（AMD）是50岁以上人群致盲的重要原因，脉络膜新生血管（CNV）是其主要病理基础。最新研究表明fibulin-5与AMD具有密切关联性: fibulin-5表达减低或突变阻碍弹性纤维的组装，并降低对VEGF的拮抗。据此推测以fibulin-5作为靶标，进行AMD的CNV抑制和修复机制研究具有较强的特异性。本项目在成功构建fibulin-5表达载体基础上，拟构建Rpe65启动子驱动的fibulin-5腺病毒表达载体，体外检测对视网膜色素上皮细胞生物学性状影响；体内大鼠模型视网膜下腔注射转染的视网膜色素上皮细胞，检测抑制CNV生成效率和Bruch膜的修复能力，评估其在AMD修复中的作用。并研究其阻抑新生血管形成和修复Bruch膜的机制，探讨转染视网膜色素上皮细胞移植的修复机制。本研究有助于揭示fibulin-5作用的靶位点，进而为深入阐明其作用机制。,2010年NSFC小胶质细胞CX3CR1受体在慢性低灌注脑白质损害中的作用及机制研究,我们既往表明，小胶质细胞的激活和少突胶质细胞的减少在慢性低灌注脑白质损害(WMLs)中起重要作用，但目前尚不清楚小胶质细胞介导WMLs发生的确切分子机制。CX3CL1/CX3CR1受体系统-p38MAP/PKC在小胶质细胞的增殖、激活、炎性因子的释放、细胞迁移和吞噬中起重要作用。为此我们假设：如能调控小胶质细胞CX3CL1/CX3CR1-p38MAPK/PKC信号传导通路、影响少突胶质细胞的活性，则能干预WMLs的发生。为此本项目拟研究缺血缺氧条件下小胶质细胞CX3CL1/C3XCR1受体表达及其功能改变；探讨p38MAPK/PKC介导CX3CL1/CX3CR1调控小胶质细胞激活的作用及机制；靶向沉默和激活CX3CL1/CX3CR1受体基因对WMLs模型鼠小胶质细胞活性、少突胶质细胞凋亡及髓鞘形成、整体认知功能的影响。旨在揭示小胶质细胞介导WMLs的分子机制及其可能的干预方法。,2011年NSFCMller细胞钾离子通道(Kir4.1)在视网膜变性疾病中的作用机制研究,视网膜色素变性是神经元变性的致盲性眼病，胞外谷氨酸聚积是病变进展的重要因素。Kir4.1通道特异分布在视网膜Mller细胞和CNS星形胶质细胞，对CNS胞外谷氨酸转运很重要，但对视网膜胞外谷氨酸的作用不清楚。我们前期工作发现：视网膜色素变性大鼠(RCS)中，Mller细胞活化，Kir4.1先增加后降低。由此本项目假设：视网膜色素变性中Mller细胞Kir4.1通道变化，改变细胞膜电位，使胞外谷氨酸不能及时转运，加重视网膜变性。本课题拟研究RCS大鼠及视网膜下腔注射Kir4.1-shRNA大鼠的Mller细胞活化、Kir4.1和谷氨酸转运体的表达、膜电位和胞外谷氨酸浓度，及视网膜神经元形态和功能；并采用Mller和光感受器细胞共培养，阻断Mller细胞Kir4.1后，观察光感受器细胞活性。从而探讨Mller细胞Kir4.1通道在视网膜变性中作用机制，为寻找治疗靶点提供理论依据,2012年NSFC转录因子OCT4/SOX2-TGF通路在Barrett食管向食管腺癌转化中的机制研究,Barrett食管（BE）是食管腺癌的癌前病变，最新研究显示BE中干细胞转录调控因子OCT4和SOX2表达明显增强，而TGF-通路中关键调控因子表达下降，由此推测：BE异常微环境致食管干细胞niche破坏，OCT4和SOX2激活并形成复合体，抑制TGF-通路，使下游效应分子表达显著改变，从而细胞增殖失去控制，导致BE食管细胞恶变。本研究拟采用基因工程技术、干细胞分离鉴定和培养、免疫细胞化学、RT-PCR、western-blot、激光共聚焦等方法检测OCT4、Sox2，以及TGF-通路调控关键因子2SP、Smads和下游靶基因p21以及RUNX3、c-myc的表达，通过基因工程上调和下调Oct4、Sox2的表达，探讨其对BE细胞化生和增殖的调控效应，从而为最终了解Barrett食管向食管腺癌转化的机制以及未来可能的基因调控干扰或药物治疗提供理论线索。,2013年NSFC微脉冲阈值下光凝对离体和在体视网膜色素上皮细胞的光生物调制效应研究,病理状态下视网膜色素上皮细胞(RPE) 结构和功能的改变引发的黄斑病变是众多眼底病的病理学基础，可严重损害视功能，而常规激光光凝、药物、手术等众多治疗方法可促使眼底瘢痕形成、视力下降、药物副作用以及损害RPE和视网膜屏障功能，因此主动诱导RPE细胞增殖活化并分泌相应细胞因子对于视觉功能修复具有重要意义。鉴于微脉冲低能量激光对生物组织的光调制效应，本项目拟从离体培养RPE、正常大鼠在体RPE层和大鼠诱导CNV模型三个层次，利用免疫组化、RT-PCR、westernblot、高效液相色谱分析、视网膜电图等技术方法，探索微脉冲阈值下光凝如何刺激RPE产生活性氧和转录因子，触发下游生物学效应，抑制VEGF的表达，释放PEDF等血管生长抑制因子，同时分泌神经营养和生长因子，从而改善RPE结构和生物学功能，最终从分子水平揭示微脉冲低能量激光对RPE的生物调制效应，为黄斑部病变的治疗提供新思路、新方法。,二、科研思路及相关软件,确定大的方向自己最感兴趣的广泛阅读文献摘要深入阅读文献全文,如何阅读科研论文阅读过程中始终思考如下问题(Keep these in mind) 文章所要阐述的主要问题(major question)是什么? 这一问题是否重要(important)，为什么?本文所采用的方法(approaches )，以及这些方法对于回答这一问题是否适当和足够(adequate)? 新颖的想法(novel idea)，或者创新性的方法(innovative approaches)是什么? 本文所提出来的新概念(concept) 是什么? 提供的结果是否支持这一新的概念(new concept)? Weekly reading of CNS titles Critical, appreciative,论文分级,What Is a First-Class Paper?Major advance in a classic field干细胞是如何分化成特定组织细胞的，胆固醇在人体的正常功用New techniques and methods that can be widely used人类基因组研究中的自动测序技术 , PCR, Patch clampDiscoveries with obvious practical implicationsAIDS virus receptor 的发现, 老年痴呆症基因的发现 Conceptual breakthrough, novel ideas神经营