《药物分析》第12章：维生素类药物的分析.ppt

第12章维生素类药物的分析 维生素 是维持人体正常代谢所必需的一类微量元素分类 脂溶性 维生素A 维生素D2 D3 维生素E 维生素K1 水溶性 B族 维生素B1 B2 B6 B12 维生素C 叶酸 烟酸和烟酰胺 第1节维生素A的分析一 结构与性质 维生素A的醋酸酯 具有共轭多烯侧链的环己烯 二 鉴别试验 1 三氯化锑反应 维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中 显蓝色 渐变成紫红色 溶剂采用饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液 2 光谱法 维生素A分子中含5个共轭双键 其无水乙醇液在326nm波长处有最大吸收 3 色谱法 英国药典 BP 和美国药典 USP 中维生素A采用薄层色谱法鉴别 维生素A的紫外光谱图 图12 1 三 含量测定 中国药典 2005版 采用紫外 可见分光光度法测定维生素A及其制剂的含量 以单位表示 制剂 由于制剂中含有稀释用油和维生素A原料药中混有其他杂质 采用紫外 可见分光光度法测得的吸光度不是维生素A独有的吸收 在规定的条件下 非维生素A物质的无关吸收所引入的误差可以用校正公式校正 以便得到正确结果 测定方法 中国药典 2005版附录对维生素A的测定收载了 第一法 和 第二法 两种方法 合成维生素A和天然鱼肝油中的维生素A均为酯式维生素A 如供试品中干扰的杂质较少 采用第一法 直接测定法 适用于高纯度的维生素A醋酸酯 测定 否则按第二法 皂化法 适用于维生素A醇 测定 第2节维生素B的分析一 结构与性质 氨基嘧啶环 CH2 噻唑环 季铵碱 维生素B1 B族维生素主要有B1 盐酸硫胺 B2 核黄素 B6 吡多辛 B12 氰钴胺 烟酸及烟酰胺等 本节主要介绍维生素B1 性质 1 共轭双键 UV max 246nm 2 噻唑环含S原子 硫色素荧光法分解产物与Pb AC 2反应3 碱性N原子 嘧啶环 伯氨噻唑环 季铵可与酸成盐 可与生物碱沉淀剂反应 鉴别和硅钨酸重量法 二 鉴别试验 1 硫色素反应 维生素B1溶于氢氧化钠溶液中 噻唑环被氧化开环 生成硫醇化合物 经铁氰化钾氧化成硫色素 产物溶于正丁醇中 显蓝色荧光 加酸酸化后荧光即消失 再加碱 荧光又复显 2 沉淀反应 可与多种生物碱沉淀试剂反应 生成不同颜色的沉淀3 氯化物反应 水溶液显氯化物的鉴别反应 三 杂质检查 1 硝酸盐 维生素B1在合成时需要使用硝酸盐 因此可能会引入硝酸盐杂质 采用靛胭脂法检查 限量为0 25 2 总氯量 本品为盐酸盐 需检查总氯量 药典采用银量法检查 按干燥品计算 含总氯量应为20 6 21 2 四 含量测定 中国药典 2005版规定维生素B1原料药 非水滴定法 加入醋酸汞消除盐酸盐的干扰 喹哪啶红 亚甲蓝混合指示液 片剂 注射液 紫外分光光度法 具共轭双键 在紫外区246nm处有最大吸收 维生素B1片的含量测定 取本品20片 精密称定 研细 精密称取适量 约相当于维生素 125mg 置100ml量瓶中 加盐酸溶液 9 1000 约70ml 振摇15分钟使维生素 1溶解 加盐酸溶液 9 1000 稀释至刻度 摇匀 用干燥滤纸滤过 精密量取续滤液5ml 置另一100ml量瓶中 再加盐酸溶液 9 1000 稀释至刻度 摇匀 照分光光度法在246nm的波长处测定吸收度 按C12H17ClN4OS HCl的吸收系数为421计算 即得 计算 第3节维生素C的分析一 结构与性质 L 抗坏血酸 1 多羟基化合物 具糖类似的性质2 具连二烯醇结构 强还原性 贮存过程中易变色 氧化还原滴定法 O 3 酸性 连二烯醇 可与Na2CO3成盐 4 旋光性 具手性C原子 C4 C5 L 抗坏血酸活性最强 二 鉴别试验 2005版 中国药典 1 氧化反应与硝酸银反应 AgNO3Ag 黑色 与2 6 二氯靛酚的反应 2 6 二氯靛酚钠蓝色消失与碱性酒石酸铜的反应 维生素C钠 碱性酒石酸铜红色沉淀2 光谱法 红外光谱法 HCI 三 杂质检查 1 铁盐和铜盐的检查 原子吸收分光光度法2 溶液颜色与澄清度的检查 紫外 可见分光光度法 在420nm的波长处测定吸光度 不得过0 03 3 炽灼残渣 不得过0 1 4 重金属 不得过百万分之十5 细菌内毒素 注射剂 四 含量测定 直接碘量法 原料药及其制剂均采用此法 1 原理维生素C具有较强的还原性 在稀醋酸酸性溶液中 可被碘定量氧化 以淀粉为指示剂 终点显蓝色 2 注意事项 1 溶剂 加新沸冷H2O 减少水中溶解氧对测定的影响 2 酸性环境 HAC 减慢VitC被O2氧化速度 3 立即滴定 减少O2的干扰 4 附加剂干扰的排除片剂 滑石粉 过滤注射剂 抗氧剂 丙酮 3 测定方法 取本品约0 2g 精密称定 加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解 加淀粉指示液1ml 立即用碘滴定液 0 05mol L 滴定 至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪 每1ml碘滴定液 0 05mol L 相当于8 806mg的C6H8O6 计算 第4节维生素D的分析一 结构与性质 维生素D2 维生素D3 甾醇的衍生物 主是维生素D2和维生素D3 性质 1 旋光性 具手性碳原子 有旋光性 D2的比旋度为 102 5 107 5 D3比旋度为 105 112 2 稳定性 含有多个双键 极不稳定 在空气 日光下 遇酸或氧化剂 均能发生氧化反应而变质 3 醋酐 浓硫酸显色反应 本品的氯仿溶液 加入醋酐 浓硫酸溶液 摇振后 显色 4 紫外吸收特性 D2和D3均含共轭体系 有紫外吸收 二 鉴别试验 2005版药典 1 醋酐 浓硫酸显色反应 维生素D2或D3 氯仿 醋酐 浓硫酸初显黄色 渐变红色 迅即变为紫色D2最后成绿色2 光谱法 维生素D2和维生素D3的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致 D3再变为蓝绿色 最后变为绿色 三 杂质检查 维生素D2原料药中应检查麦角甾醇 检查方法 取本品10mg 加90 乙醇2ml溶解后 加洋地黄皂苷溶液 取洋地黄皂苷20mg 加90 乙醇2ml 加热溶解制成 2ml 混合 放置18小时 不得发生浑浊或沉淀 四 含量测定 中国药典 2005版附录中收载了维生素D的含量测定方法采用高效液相色谱法分三法 第一法 无维生素A醇及其他杂质干扰的供试品 第二法 有干扰的 第三法 按第二法处理后前维生素D峰仍受杂质干扰 仅维生素D峰可以分离时 维生素D对光敏感 测定应在暗室中进行 第5节维生素E的分析一 结构与性质 维生素E 苯并二氢吡喃类带有脂肪侧链R1 R2和乙酰化酚羟基 又称生育酚醋酸酯 性质 1 水解性 乙酰化的酚羟基 酯键 易水解成游离生育酚2 还原性 游离生育酚易被氧化 遇光易变质3 旋光性 天然 具旋光性合成品 无旋光性4 紫外吸收 具有苯环 图12 2 维生素E的紫外吸收图谱 0 01 无水乙醇中 max 284nm min 254nm 二 鉴别试验 1 硝酸反应 维生素E在酸性条件下加热 先水解生成游离生育酚 再进一步被硝酸氧化成生育红而显橙红色 方法 取本品约30mg 加无水乙醇10ml溶解后 加硝酸2ml 摇匀 在75 加热约15分钟 溶液显橙红色 2 光谱法 本品的红外光吸收图谱应与对照图谱一致 三 杂质检查 游离生育酚的检查 1 来源 制备中未酯化的或贮存中分解的生育酚2 方法 硫酸铈滴定法 铈量法 3 原理 利用游离生育酚的还原性 将硫酸铈还原成硫酸亚铈 终点时过量硫酸铈与二苯胺 指示剂 反应 显蓝色 取本品0 10g 加无水乙醇5ml溶解后 加二苯胺试液1滴 用硫酸铈滴定液 0 01mol L 滴定 消耗硫酸铈滴定液 0 01mol L 不得过