肾阳虚机理研究进展.doc

精品文档肾阳虚机理研究进展叶东东 康永1.山西省中医药研究院硕士研究生2013级（太原030012 ）；2.山西省中医药研究院（太原030012）摘要：目前对肾阳虚机理没有统一的认识，神经-内分泌-免疫调节网络组学，代谢组学，转录组学，基因组学，蛋白质组学等学说众说不一。本文从不同角度对肾阳虚的机理进行全面系统的阐释。Abstract: Currently, the scientific community have no unified understand on declination of kidney yang, the theory of neuro-endocrine-immunoregulatory network, Metabonomics, Transcriptomics, Genomics, Proteome, ect have different points, In this paper, we are from different angles to conduct declination of kidney yang.关键词：肾阳虚；神经内分泌免疫调节网络；系统生物学Keywords：declinationofkidneyyang；neuro-endocrine-immunoregulatory network；systems biology肾阳虚，即肾脏阳气虚衰，是肾脏阳气衰竭表现的征候。临床表现症状多见腰膝酸软，四肢不温，面色朓白，腹中冷痛，小便清长，舌淡苔薄白，脉沉迟。中医认为阳虚多因年老肾亏，久病伤肾，以及房劳过度等因素引起的。现在对肾阳虚的本质还没有统一的认识，通过神经-内分泌-免疫调节网络组学，代谢组学，转录组学，基因组学，蛋白质组学等学说多年的研究，从人体系统到基因分子水平，取得了不同层次研究成果。1.肾阳虚与神经内分泌免疫调节组学1.1肾阳虚与神经内分泌系统下丘脑垂体靶腺轴(肾上腺轴、甲状腺轴、性腺轴)的功能障碍和功能低下是肾阳虚证的物质基础。甲状腺激素与肾上腺素在体温调节方面起协同作用。甲状腺激素与性腺激素在生长发育方面起到协同作用，阳虚患者常多伴有性腺功能低下。从1959年,邝安堃等用糖皮质激素造成了肾阳虚小鼠模型开始，到沈自尹等发现不同病种的肾阳虚证病人有靶器官损伤，钟历勇等研究了补肾中药能对下丘脑垂体靶腺轴起到保护作用。还有很多的药理实验，临床实验都可以证明肾阳虚证与神经内分泌功能紊乱有关。1.1.1下丘脑-垂体-肾上腺轴肾阳虚患者整体表现出代谢低下的趋势。肾上腺素可促进糖原和脂肪分解，增加组织耗氧量及产热量，如果肾上腺素水平低下就不能很好的促进糖原和脂肪分解，影响机体产热。马娜，罗来成，朱东海把90只SD雄性大鼠分为正常组，模型组，右归丸组，每组30只。用氢化可的松注射液对模型组和右归丸组SD雄性大鼠肌注29天，进行肾阳虚造模。造模成功后，模型组和右归丸组分别用生理盐水和右归丸水煎液灌胃22天。在灌胃的第一周，第二周，第三周，每次从每组中取10只大鼠，抽取血清，用放射免疫法测定垂体-肾上腺轴激素的含量并取垂体和肾上腺称取重量。结果发现模型组大鼠垂体-肾上腺轴激素水平不断下降，且垂体和靶腺下降程度一致。右归丸组大鼠垂体-肾上腺轴的激素水平、肾上腺重量较模型组有明显提高（1）。徐文聃，王欣等将60只SD大鼠随机分为正常组，模型组，肾气丸组，附桂混悬液组，六味地黄丸组5组，每组12只。用氢化可的松造模20天，药物干预组在造模的同时给予药物干预。每5天记录一次大鼠体征，最后通过腹腔静脉采血，分离血清和摘取下丘脑制备浆液，用ELISA法分别测定大鼠促肾上腺皮质激素、皮质醇和促肾上腺皮质激素释放激素受体1、促肾上腺皮质激素释放激素。结果发现模型组血清中ACTH、CORT和下丘脑中CRH、CRHR1的含量明显降低，肾气丸组有明显升高，附桂混悬液组次之，六味地黄丸组无效（2）。1.1.2下丘脑-垂体-甲状腺轴 甲状腺激素在寒冷，紧张时分泌，有促进新陈代谢和发育，提高神经系统的兴奋性，使心律加快，增加产热。 王秀凤，张磊等将60只SPF级雄性SD大鼠随机分成正常组和阳虚模型组，模型组用氢化可的松造模29天。分别在第15，23，30天，每组每次取10只大鼠取血，用放射免疫分析法检测TSH、T3、T4 和ACTH、CORT的含量。结果发现下丘脑-垂体-肾上腺轴与甲状腺轴之间的失衡是肾阳虚的一个病因（3）。 林清志用温补脾肾、益气活血方药配合优甲乐治疗甲减有效率高达100%。郭海玲将86例甲减患者分成2组，发现多用真武汤加味组有效率为95.5%，比单纯用优甲乐组的有效率高。徐文华等用温肾方配合优甲乐治疗甲减有效率达95%。张敏等用参桂甲减饮配合优甲乐治疗老年甲减总有效率达93.75%。徐珏用还少胶囊配合优甲乐治疗甲减有效率为93.3%（4）。1.1.3下丘脑-垂体-性腺轴性激素具有促进细胞的增殖与分化，生殖器官的发育成熟的功能，影响中枢神经系统，调节机体对环境的适应以及通过三大营养物质代谢为生命活动供给能量。张宗保摘除60只Wister大鼠双侧睾丸，制造去势模型。第3天将60只大鼠随机分成正常对照组，去势模型组，阳性对照组，鹿茸益肾胶囊高、中、低对照组，共6组。观察去势大鼠阴茎勃起时间，对大鼠附性器官、垂体、肾上腺进行称重和测定血清中性激素的含量。结果发现鹿茸益肾胶囊能缩短去势组大鼠阴茎勃起潜伏时间，提高附性器官、垂体、肾上腺重量，限制升高血清中的睾丸酮和皮质醇（5）。 毛愿舒，王加维收集62例肾阳虚排卵障碍型不孕患者作为观察病例，把62名患者随机分成中药人工周期联合克罗米芬治疗组和克罗米芬对照组。结果发现治疗组的中医症状、卵泡生长情况、性激素激素水平、妊娠率都得到了很好的改善，且比对照组疗效更加好（6）。1.2肾阳虚与免疫系统胸腺超微结构的损伤是导致肾阳虚小鼠下丘脑一垂体一胸腺功能低下的重要原因。肾阳虚证患者表现为从细胞免疫到体液免疫及补体整体水平的下降。在免疫组织方面,主要表现为胸腺，脾脏缩小、重量减轻、脾细胞悬液内溶菌酶含量减少。颜亭祥，李震对房事不节阳虚型小鼠胸腺和脾脏称重,发两个免疫器官重量都减小。对模型小鼠胸腺的形态学进行光学显微镜和电子显微镜观察，发现胸腺体积缩小，胸腺皮质变薄,且细胞数量明显减少。右归丸治疗组胸腺重量和细胞数量得到明显提高（7）。2. 肾阳虚与蛋白质组学 蛋白组学是从整体角度分析机体全部蛋白质的组成成分、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，揭示蛋白质的功能与细胞生命活动的规律的一门学科。可以研究肾阳虚患者与正常人的蛋白质的差异，发现肾阳虚的本质机理。谭从娥，黄祥云等对4名肾阳虚患者用右归丸进行治疗，分别采取4名患者治疗前后外周血液，从血清中分离提取蛋白质，采用核素标记蛋白组学技术筛选出治疗前后4组均存在差异且表达一致的蛋白质有6个。最后得出补体C3 ，原肌球蛋白治疗含量下调，脯氨酸尿蛋白，半胱氨酸抑制酶，载脂蛋白C，载脂蛋白E治疗后含量上调与肾阳虚有直接密切关系（8）。3. 肾阳虚与基因组学 基因组学研究的方法学内容与中医学的基本思想比较接近，通过基因组学研究，建立肾阳虚证的基因变异及基因表达差异谱和功能基因调控网络，并从基因组学的角度探讨肾阳虚的机理。 黄禹峰，李炜宏利用基因芯片技术研究少年，中年，老年不同人群的肾阳虚基因表达图谱，发现肾阳虚组与正常组确实存在基因差异，影响能量合成与代谢。且肾阳虚基因差异影响儿童造血功能，中年人细胞增殖功能，老年人生殖功能（9）。魏敏，赵晓山等对亚健康肾阳虚患者和正常人的基因做比较，通过基因芯片技术获得基因图谱，发现75条存在差异，其中22条上调，53条下调（10）。 姚实林，张祖志等通过测定30例肾阳虚患者外周血白细胞 DNA的全基因组，发现阳虚质者基因组存在一些特异的拷贝数变异，这些 CNVs 可能导致阳虚质表型（11）。 曾跃琴，李炜弘等利用结合重亚硫酸盐测序法发现受试血浆中有5种基因启动子区甲基化状态与是否患有肾阳虚证相关（12）。4. 肾阳虚与转录组学 转录组学是在mRNA水平研究基因表达谱，表达谱可以提供肾阳虚患者的基因表达信息，并据此推断相应未知基因的功能，揭示肾阳虚调节基因的作用机制。 于宏波，严石林分别抽取3例典型阳痪肾阳虚证患者和健康志愿者10ml静脉血，分离出白细胞，用,Trizol法提取总RNA。采用基因芯片技术筛选出1396个差异基因。其中最为突出的发现是10条蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶复合物相关基因与肾阳虚有密切关系（13）。5. 肾阳虚与代谢组学 代谢组学是系统研究代谢产物的变化规律并揭示机体生命活动代谢本质的科学，通过对肾阳虚患者与正常人的代谢产物的差异研究，可以发现肾阳虚的本质机理。 吴思，柴逸峰用PTU药物成功制造脾肾阳虚型甲减大鼠模型，把24只洁净级 Wistar 雄性大鼠随机分成正常组，模型组，四逆汤组。正常组给予生理盐水，模型组和四逆汤组给予PTU各15天。最好四逆汤组造模成功后用四逆汤治疗4周。通过大鼠眼眶取血，获得血清。用超高效液相-四级杆飞行时间质谱法筛选出 13个潜在的血清生物标志物。最后用代谢通路智能分析发现鞘脂代谢、脂肪酸转运、磷脂代谢和苯丙氨酸代谢与甲减脾肾阳虚证关系密切(14)。 中医的症候是指疾病过程中一定阶段的病位、病因、病性、病势及机体抗病能力的强弱等本质有机联系的反应状态，表现为临床可被观察到的症状。所以一个学说从一个层次角度研究肾阳虚机理是很全面把握的。近年来兴起的系统生物学要实现从基因到细胞、到组织、到个体的各个层次的整合，认为肾阳虚证的物质基础不是单一的系统或组织，而是人体多个系统和组织共同作用的结果，很符合中医的整体观。中医通过望、闻、问、切，四诊合参观察人体变化和代谢产物，收集人体体征。代谢组学作为系统生物学的重要部分，完全符合中医诊断的思路，和中药多成分，多靶点的特性，为我们研究中医证型指明了前进的道路。参考文献：1.马娜，罗来成等.右归丸对肾阳虚大鼠垂体-肾上腺轴动态影响的实验研究J.中华中医药学刊，2014，32（6）：1324-1325.2.徐文聃，王欣等.从下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴探讨附子肉桂在肾气丸中补肾阳的作用J.浙江中医药大学学报，2014，38（7）：831-841.3. 王秀凤，张磊等.基于支持向量机的肾阳虚大鼠甲状腺与肾上腺功能的动态分析J.时珍国医国药，2014，25（8）：2023-2025.4.高洁，王旭.中医补阳法在治疗甲减中应用J.辽宁中医大学学报，2014，16（3）：111-112.5.张宗保.鹿茸益肾胶囊治疗肾阳虚证阳痿的药效学研究J.中国执业药师，2014，11（6）：20-23.6. 毛愿舒，王加维等.中药人工周期联合克罗米芬治疗肾阳虚型排卵障碍性不孕症的临床观察D.湖北：湖北中医药大学，2014.7.颜亭祥.“劳倦过度，房事不节”肾阳虚模型下丘脑-垂体-肾上腺皮质-胸腺轴的改变及分子免疫机制研究D.山东：山东中医药大学，2010.8.谭从娥，黄祥云等.应用 iTRAQ技术筛选右归丸对肾阳虚证干预效应的血清差异表达蛋白J.时珍国医国药，2014，25（9）：2277-2279.9.黄禹峰，李炜宏.少、壮、老不同年龄段肾阳虚体质基因表达谱的异同研究D.四川：成都中医药大学，2011.10.魏敏，赵晓山等.亚健康状态肾阳虚证基因差异表达研究J.南方医科大学学，2011，31（2）：248-251.11. 姚实林，张祖志等.阳虚质者基因组拷贝数变异小样本研究J.中国中医药信息杂志,2013,20(11)：4-7.12.曾跃琴，李炜弘等.肾阳虚证免疫相关基因CGP岛调控机制研究J.时珍国医国药，2013，24（6）：1515-1516.13.于宏波，严石林.阳痿肾阳虚证症状规律及其转录组特征研究D.四川：成都中医药