免疫组化染色机种类介绍.doc

自动化免疫组化染色机种类介绍免疫组化的传统技术正在受到新的快速高敏的新技术的挑战，一方面是新试剂的推出，如SP、EPOS、Envision和CSA，另一方面是自动免疫组化染色机的问世。免疫组化技术正进入一个新的发展阶段。从先进国家免疫组化规范化或标准化的进程来看，自动免疫组化染色机的应用几乎贯穿始终，早在20世纪末已得到极大的普及，然而国内的自动免疫组化染色机应用则在近几年才得以发展。浙江省肿瘤医院作为省内较早应用的少数单位之一，在自动化免疫组化染色的使用和质量控制方面获得些许经验，在此做简单的介绍交流。自动化免疫组化染色技术是由电脑控制整个染色程序的免疫组化染色机，具有自动加抗体、自动冲洗、显色、复染及预处理等功能，有全自动和半自动、封闭型和半开放型之分。根据不同仪器大小，每次染色20240张切片不等，整个染色程序约需6090min左右，它不仅可以应用于免疫组化染色，某些仪器还可应用于组织化学染色、特殊染色及原位分子杂交染色。目前较为理想的仪器为Roche公司、Lecia公司及Thermo公司的产品等。下面对不同机型的自动免疫组化染色机的特点分述如下。Thermo公司的LabVision Autostainer该机型属开放式半自动系统类型，用户可任意编辑所需试剂及模板，内建试剂兼容性检测。切片特殊染色模板可任意调整试剂量、孵育时间。体系开放保证可适就性强，即可同时运行不同检测试剂盒和不同的染色程序及不同厂商生的的一抗。使用单一探头，探头材料为特氟伦包被不锈钢，检测探头交叉污染残留物 99%(总体积)。联合使用配套的抗原修复仪，可实现脱蜡与抗原修复一步完成。DAKO公司的 Autostainer系LabVision Autostainer贴牌产品，配合使用DAKO的Flex检测系统可获得极为敏感的免疫组化结果。早期的Biogenex i6000TM全自动染色仪亦属该类型产品，不同的是其加样头采用标准的Tip头加样，完全避免交叉污染的风险。Lecia公司的Bond-Max 该机型属半开放式全自动系统类型，仅针对一抗完全开放，用户可以根据个人的偏好使用任何品牌的一抗。独有的检测系统内包含专利的Compact Polymer技术（紧凑型聚合物）相比传统方法而言，信号放大作用、穿透力能力更强。该检测系统类似于增强型的Polymer技术，可以使阳性显色密度更高，背景更清晰。独特的Covertile专利技术在玻片表面增加一个塑料罩，为免疫反应提供一个封闭的孵育环境，防止试剂挥发，既确保样品的安全也进一步节省抗体的实用。Covertile会轻轻将液滴铺散到玻片的规定区域，确保试剂均匀分布到组织的表面，既可防止组织的损伤，又使抗体的作用更均匀，染色结果更可靠。尤其是独特的温控技术可实现每张切片独立温控，提供最佳的反应动力学环境。免疫组化的所有步骤从烤片、脱蜡、抗原修复、阻断、标记一炕、标记二抗、显色直到复染都可以由Bond-Max自动完成，真正实现全自动操作。由于Lecia公司收购了Novocastra试剂公司，该平台可能最优化组合两者的优点，有利于最大限度降低假阳性或假阴性以提高诊断质量。 Roche公司的Benchmark Ultra 该机型亦属半开放式全自动系统类型，该免疫组化和原位杂交染色仪由Ventana Medical Systems公司（美国亚利桑那州，Tucson）生产并提交。该成熟的临床检测用仪器及相关试剂，已获美国FDA或欧洲CE相关认证，并于2009年获医疗设计杰出奖。该平台需配备原厂的相关试剂，仪器和试剂同属一套系统，更加保证了结果的准确性和溯源性。较有特色的是具有专利液体封盖膜技术（LCS），可有效防止试剂挥发，防止干片，提供稳定反应环境，保证染色均一。并且专利空气涡流混匀技术，可保证组织全层覆盖，试剂充分混匀，避免“边缘效应”及“阶梯效应”。 类似的专利Thermopad温控技术也可实现每张切片独立温控，提供最佳的反应动力学环境。尤为可贵的是可支持多种实验方案 （IHC, ISH, SISH, IF），是目前可实现较为齐全的多样化及个性化方案的检测平台。 综上，从大多数仪器的特点来看，自动免疫组化染色机规范了免疫组化染色的操作步骤和方法，方法稳定，结果重复性较佳；部分机型由于使用了增敏试剂，提高了敏感性；由于采用独特的抗体覆盖系统，抗原抗体反应较为均匀，反应时间相应缩短；缓冲液的均一稳定洗涤，降低了非特异性背景染色；自动控制各种抗体和试剂加样，减少了人工操作。现代化的病理科实验室对效率、成本、效益、质量和结果重复性等方面的要求愈来愈高，解决方案就是免疫组化试剂的标准化和染色的自动化。 需要指出的是，国内往往仅局限于使用自动化免疫组化染色仪器，而非从整体上构架建立一套完整的自动化免疫组化染色网络系统。因此，建立在自动化免疫组化染色基础上的质量控制尚显稚嫩，从病理诊断医师发出指令直至完成制片并形成反馈，实现信息流的网络化管理将是未来的方向。再者，冰冷机器背后人的因素永远是最根本的要素。仪器的正确使用，离不开使用者的维修与保养。比如仪器放置环境的温度，不间断电源的配备。使用前检查缓冲液、蒸馏水、一抗和检测系统是否足量。严格按照程序要求清洗机器的加样系统及液流系统等等，对确保免疫组化结果的稳定性极为重要。做好IHC并非易事，自动化也好手工操作也好，其基本的要素是一致的。IHC所用抗体是最核心的试剂。抗体的质量直接影响免疫组织化学的结果评估，甚至影响诊断。因此，在选择抗体时，应严格认真选择所用抗体，应选择有良好资质的经销商和厂家的产品；应该有规范的抗体贮存方法和防污染措施。新近购入的抗体和不同批号的抗体必须有探索最佳染色条件的预实验。对于每一种抗体均应有阴性和阳性对照。同时，应根据其特点确定抗原修复的方法，既保证能充分暴露所要检测的抗原，又要避免过度修复而导致假阳性结果。在染色方法的选择上，也应该考到内源性物质(生物素、过氧化物酶、碱性磷酸酶等)的干扰。只有在各个环节、细节都认真研究，然后以常规的形式相对固定下来，才能确保IHC的结果可靠。也就是说，IHC的从业人员和实验室应逐渐建立认证制度。目前的临床病理诊断已离不开免疫组织化学技术，而没有免疫组织化学技术亦很难说有现代的临床诊断病理学。另外，随着法制观念的普及和增强，患者的法律意识和维