临床尿液粪便检验及微生物标本处理课件ppt课件

临床尿液 粪便检验及微生物标本处理 泰州市人民医院 韩俊岭 尿液常规检验 一 标本的采集 尿常规标本可采集晨尿 二次晨尿 随机尿 容器 尿量 病人留尿前的准备 采集后2小时内完成常规检验 二 尿液的干化学检测 二 尿液分析仪试剂带多联试带是将多种检测项目的试剂块 按一定间隔 顺序固定在同一条带上的试带 使用多联试带 进入一次尿液可同时测定多个项目 采用多层膜结构 第一层 尼龙膜保护作用 防止大分子物质对反应的污染 尿液常规检验 4 支持层 吸水层 碘酸盐层 过滤层 透明膜 试剂层 试带的多层膜结构 2 尿液的干化学检测 反应层 尿液常规检验 5 尿试带的多层膜结构 过滤层 尼龙膜 起保护作用 防止大分子物质对反应的影响反应层 绒制品 包括过碘酸盐区 有的无此区 和试剂区 过碘酸盐区可破坏VitC的干扰 试剂区含有试剂成分主要与所测物质发生反应 产生颜色反应 吸水层 可使尿液均匀快速深入 并能抑制尿液流到相邻反应区 支持层 不被尿液浸润的塑料片做支持层 空白块 用于消除尿自身颜色在试剂块上产生颜色的干扰 尿液常规检验 1 检测项目尿液的酸碱度 pH 比密 SG 蛋白质 PRO 葡萄糖 GLU 酮体 KET 胆红素 BIL 尿胆原 URO 亚硝酸盐 NIT 白细胞 LEU 隐血 BLD 维生素C VitC 一个或多个检测内容可组成不同的组合 2 试带反应原理 酸碱度 pH 采用pH指示剂法 用甲基红 pH4 6 6 2 和溴麝香草酚蓝 pH6 0 7 8 两种指示剂适量组合成为复合pH试剂模块 其呈色范围为pH4 5 9 0 颜色发生橙红 黄绿及蓝色变化 尿液常规检验 比密 SG 采用离子交换pH指示剂法 尿液中电解质释放出的阳离子与试带中的离子交换体中的H 交换 释放出的H 与酸碱指示剂反应 根据指示剂显示的颜色 蓝 绿 黄 可换算尿液中的电解质浓度 以电解质浓度来代表密度 从而得出比密值 尿蛋白 PRO 采用pH指示剂蛋白误差法 试剂模块中主要含有酸碱指示剂溴酚蓝 枸橼酸缓冲系统和表面活性剂 在Ph3 2时 溴酚蓝电离 带负电荷并释放H 带负电荷的溴酚蓝与此时带正电荷的蛋白质 白蛋白 生成复合物 导致溴酚蓝进一步电离产生更多的H 当超过缓冲范围时 指示剂发生颜色改变 黄 绿 蓝 变色程度与蛋白质含量成正比 尿液常规检验 尿胆原 URO 采用 醛化反应法 在强酸条件下尿胆原和对 二甲氨基苯甲醛发生醛化反应 生成樱红色缩合物 偶氮法 在强酸条件下尿胆原和对 四氧基苯重氮四氟化硼发生重氮盐偶联反应 生成胭脂红色化合物 尿胆红素 BIL 采用偶氮法 在强酸性介质中 胆红素与试带上的二氯苯胺重氮盐起偶联作用 生成红色偶氮化合物 尿液常规检验 尿隐血 BLD 采用过氧化物酶法 血红蛋白中亚铁血红素具有弱的过氧化物酶样作用 以催化H2O2作为电子受体使色原 常用的有邻联甲苯胺 氨基比林 联苯胺等 氧化呈蓝绿色 其颜色的深浅与血红蛋白成正比 尿维生素C VitC 采用还原法 试剂模块中含有2 6 二氯酚靛酚钠 中性红 亚甲基绿磷酸二氢钠和磷酸氢二钠 维生素C能还原氧化型染料 而使指示剂发生由绿或深蓝至粉红色的颜色变化 颜色的深浅与VitC含量成正比 也有采用VitC和作为色素原的磷钼酸反应 形成钼蓝的原理 尿液常规检验 12 尿试纸法的项目和反应原理 项目代号反应原理试剂主要成分酸碱度pHpH指示剂甲基红 溴麝香草酚蓝蛋白质PRO指示剂的蛋白质误差法溴酚蓝 枸橼酸钠 表面活性剂葡萄糖GLU葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶 过氧化物酶 色原受体隐血BLDHb类过氧化酶法过氧化氢茴香素或过氧化氢枯烯 色原受体胆红素BIL偶氮反应法2 4 二氯苯胺重氮盐尿胆原URO醛反应法对二甲氨基苯甲醛或对甲氧基苯重四氟化硼酮体KET亚硝基铁氰化钠法亚硝基铁氰化钠亚硝酸盐NIT亚硝酸盐还原法氨基苯砷酸 1 2 3 4 四氢并喹啉 3酚白细胞LEU酯酶法吲哚酚酯 重氮盐比密SG多聚电解质离子解离法甲氧乙烯顺丁烯二酸 溴麝香草酚蓝抗坏血酸VitC吲哚酚法2 6 二氯酚靛酚钠 尿液常规检验 操作 1 混匀尿液2 浸湿试带3 沥去多余尿液4 比色与分析5 报告方式 尿液常规检验 注意事项 1 熟悉试带特性必须了解所用试带各膜块反应原理 药物干扰以及参考范围等 掌握试带检测每一成分的敏感度和特异性 很多中间环节和干扰因素都可影响颜色变化而导致假阳性或假阴性 同一检测项目 不同厂家所用的色素原可能不同 因此存在显色差别2 注意试带保存条件尿试带应根据厂家推荐的条件 如温度 暗处等 保存 在有效期内使用 不应将试带放在直射光下照射或暴露在潮湿环境中 应保存在厂商提供的容器中 不可更换保存容器 尿液常规检验 3 规范操作 1 试带从冷藏冰箱中拿出后 待平衡至室温再打开盛装的筒盖 一次只取所需要量的试带 并应立即将瓶盖盖好 多余试带不得放回原容器中 更不应该合并各瓶的试带 2 试带与尿液的反应时间需严格遵循产品说明书的规定 操作中注意切勿触摸试带上的反应检测模块 3 试带浸入尿液标本的时间应在1 2s 所有试剂模块 包括空白和参比模块 要全部渗入尿液中 试带上过多的尿液标本应去除干净 尿液常规检验 4 室内质控试带法检测应至少使用阴性和阳性质控品进行室内质控 每工作日至少检测1次 结果偏差不超过1个等级 且阴性不可为阳性 阳性不可为阴性 应制定程序对失控进行分析并采取相应的措施 应检查失控对之前患者样品检测结果的影响 尿液常规检验 尿液常规检验 尿液常规检验 尿液常规检验 镜检标准 1 泌尿道疾病 肾病 糖尿病 应用免疫抑制剂和妊娠者尿标本必须镜检 2 尿标本外观 浊度不正常必须镜检 3 同时满足以下5项条件 尿标本外观 浊度正常 白细胞酯酶结果为阴性 亚硝酸盐结果为阴性 尿蛋白结果为阴性 隐血 血红蛋白或红细胞 结果为阴性 可不镜检 否则必须进行镜检复核 三 尿沉渣显微镜检查 尿液常规检验 尿沉渣的检测方法 1 直接镜检法 又称混匀一滴尿法2 自然沉降法 尿液置室温下一定时间 15 30min 移去上层尿液 余0 2mL左右 混匀镜检 3 离心镜检法 尿液经一定转速一定时间离心后 移去上层尿液 余0 2ml 混匀镜检 4 染色法 常用结晶紫 沙黄法 Sternheimer Malbin S M 对尿沉渣中的有形成份进行染色后镜检 提高尿沉渣的识别率和检出率 5 尿沉渣计数板法 取10ml尿液于离心管内 在规定时间和转速下离心 移去上层尿液 取尿沉渣混 尿液常规检验 匀后滴入计数板内 显微镜下计数 换算成一定体积内尿有形成份的含量 6 尿沉渣分析仪法 综合应用电阻抗法和流式细胞术 定量检测非离心尿中的有形成份 尿液常规检验 方法学评价 1 尿沉渣显微镜检查 直接镜检法 简便易行费用低 但阳性率低 重复性差 易漏诊 一般用于门诊筛查 健康体检或有明显血尿脓尿患者 离心法 相对于直接镜检法敏感 阳性率高 为我国临床常用的尿沉渣检查方法 并已制定了相关标准化操作规程 缺点是操作繁琐耗时 对门诊量大的医院做为常规项目检查劳动强度大 尿沉渣计数板法 由于使用了标准化的定量计数板 使尿沉渣检查更符合标准化要求 更为定量和有比较性 尿液常规检验 粪便检查theexaminationoffeces stool 粪便组成 是水 是固体 未消化的食物 消化道分泌物和有形成分 食物分解产物 细菌占干重1 3 固体成分 检查的主要目的 1 了解消化道以及消化器官是否有炎症 出血和寄生虫感染等情况 2 OB试验作为消化道肿瘤的过筛试验 3 根据粪便的性状和组成 了解消化状况 借以粗略判断胰腺外分泌功能 4 检查粪便中有无致病菌以防治肠道传染病 第一节标本采集 一 标本的采集 采用自然排出的粪便无粪便排出而又必须检查肛门指诊或采便管采集标本 标本采集注意事项 1 标本容器带盖 干净 干燥 无渗漏 无吸水性细菌学检查 灭菌容器2 标本的采集量常规性检查 约5g粪便集卵检查和血吸虫毛蚴孵化 约30g粪便3 标本的采集部位含粘液 脓血等异常成分从粪便的表面不同部位 深处及粪端多处取材 4 标本的送检时间随送随检 1h内检查完毕阿米巴滋养体 立即检查 标本保温5 检查蛲虫卵透明薄膜拭子 棉拭子 晚12时或清晨排便前自肛门周围皱裂处拭取 立即镜检 6 检查寄生虫虫体及虫卵计数采集24小时粪便 7 粪胆原定量检查连续采集3天粪便 每天约取20g送检8 脂肪定量检查脂肪膳食50 150g 日 连服6天 第3天开始收集72h内的粪便 混合称重 取约60g送检9 隐血试验化学法素食三天 禁服VitC及铁剂等干扰试验的药品10 灌肠或服油类泻剂的粪便不适合作检查标本 第二节粪便理学检验 一 量二 性状三 颜色四 气味五 寄生虫 一 量 粪便量的多少与人体的进食量 食物的种类及消化器官的功能状态有直接的关系 进食粗粮及含纤维素较多的食物 粪便量相对较多 反之 则相对较少 健康成人每日排便一次 粪便量约100 300g 病理情况 粪便的量 排便次数和性状等可不同程度改变 二 性状 正常成人粪便 黄色或棕黄色 质软 成形便婴儿粪便 黄色或金黄色糊状便 粪便异常性状及可能原因1 粪便异常性状及可能原因2 三 颜色 正常人粪便 黄色或褐色婴儿粪便 黄绿色病理情况 粪便可不同的颜色改变 粪便异常颜色及可能的原因 四 气味 健康人粪便有一定臭味 经细菌作用后 蛋白质分解产生吲哚 硫醇 粪臭素 硫化氢 靛基质等很多有臭味的物质肉食者 含大量蛋白质而使臭味强烈素食者 臭味相对较淡 慢性肠炎 胰腺疾病 消化道大出血 结肠或直肠溃烂 多因未消化的蛋白质发生腐败而致粪便有恶臭脂肪及糖类消化或吸收不良 由于脂肪酸分解及糖的发酵 可致粪便有酸臭味阿米巴肠炎 粪便呈鱼腥臭味 五 寄生虫 肉眼分辨的较大虫体 蛔虫 蛲虫 猪肉绦虫 牛肉绦虫 阔头裂节绦虫等将粪便过筛冲洗后 可发现钩虫 鞭虫等细小虫体服驱虫剂后 查有无虫体驱绦虫后 寻找头节 主要肠道寄生虫形态 鞭形虫 鞭虫卵 鞭虫成虫 鞭虫卵呈纺锤形 大小约为50 22 m 黄褐色 卵壳较厚 两端各具一个透明的盖塞 虫卵自人体排出时 卵壳内细胞尚未分裂 主要肠道寄生虫形态 钩虫 钩虫卵 钩虫生活史 虫卵椭圆形 壳薄 无色透明 大小约为60 40 m 卵内细胞多为2 4个 卵壳与细胞间有明显的空隙 主要肠道寄生虫形态 蛲虫 蛲虫卵 蛲虫成虫 雌 雌虫夜间在肛周皮肤上产卵 引起肛门皮肤及会阴部奇痒 患者用手搔抓后 虫卵附着在手上 如果不洗手就吃东西 虫卵即可被吞入肚子里 重新感染 隐血试验 occultbloodtest OBT 隐血消化道出血量少于5ml 肉眼及镜检不能发现大便内的血液隐血试验可以通过化学法或免疫学等方法来证实隐血的试验 第三节粪便化学检验 检测方法 1 化学法2 免疫法 检测原理 1 化学法血红蛋白含有类似过氧化物酶的作用 催化供氢体 将供氢体中的氢转移给过氧化氢生成水 供氢体脱氢 氧化 后形成发色基团而呈色 呈色的深浅可反映血红蛋白量 出血量 的多少 2 免疫法 免疫学法有三类抗体 抗人血红蛋白抗体抗人红细胞基质抗体抗血液中其他成分如 1 AT Tf Hb Hp 抗人血红蛋白法和抗人红细胞基质法隐血试验主要检测下消化道出血约有40 50 的上消化道出血不能检出红细胞或血红蛋白经消化酶降解变性失去免疫原性 大量出血使反应体系抗原过剩出现后带现象 抗 1 AT Tf Hb Hp等抗体的隐血实验对所有消化道出血均呈阳性反应 主要方法 酶联免疫吸附法胶体金法免疫斑点法胶乳凝聚法反向间接血凝法等 粪便隐血试验 胶体金法 失败 方法学评价 1 化学法优点 操作简单易行 成本低廉 应用广泛 缺点 特异性差 灵敏度较低 影响因素多易受试剂类型 粪便中血红蛋白的多少 过氧化氢的浓度及粪便放置时间 观察时间 血液在肠道中滞留时间 粪便取材的多少以及食物 服用药物等 1 假阳性动物性食品 含有血红蛋白和肌红蛋白或其它酶类大量生食蔬菜 含有的过氧化酶或触酶及某些肠道菌属 以及重金属离子的存在 2 假阴性 服用大量维生素C或其他具有还原作用的药物 还原H2O2 不能再氧化色原血液在肠道停留过久 细菌降解Hb 2 免疫学方法 优点 快速方便 灵敏度高 特异性强 HBG0 2mg L或0 03mg g粪便 阳性 检测前不需控制饮食动物HBG500mg L HRP2000mg L 无干扰缺点 仍存在假阳性 高灵敏度引起 与假阴性 带现象 第四节粪便显微镜检查 一 细胞二 食物残渣三 结晶四 病原生物 最常用的方法 生理盐水涂片法镜检方法 低倍镜浏览全片 注意观察有无寄生虫卵 原虫及其包囊等高倍镜 寻找 观察和鉴定病理性成分的形态结构 要观察10个以上的高倍视野 粪便中镜检细胞报告方式 一 细胞 1 白细胞2 红细胞3 吞噬细胞4 上皮细胞 1 白细胞 正常粪便偶见 主要是中性分叶核粒细胞 肠道炎症 增多 15个 HP 分散存在 数量与炎症轻重程度及部位相关 小肠炎症 白细胞均匀混合于粪便中 细胞形态难以辩认 细菌性痢疾 阿米巴痢疾和溃疡性结肠炎 大量成堆出现 伴脓细胞 过敏性肠炎和肠道寄生虫感染 较多的嗜酸性粒细胞 伴有夏科 莱登结晶 WBConstoolsmear 2 红细胞 正常粪便中不含红细胞红细胞增加 下消化道炎症或出血溃疡性结肠炎 急性血吸虫病 结肠癌 直肠癌 直肠息肉 细菌性痢疾 阿米巴痢疾 痔疮出血及其它出血性疾病等细菌性痢疾 以白细胞为主 红细胞形态正常 常散在分布阿米巴痢疾 红细胞多于白细胞 且成堆出现伴形态破碎 炎症 红细胞常伴白细胞出现上消化道出血 红细胞常被胃肠道中的消化液消化破坏 显微镜检查常阴性 可通过隐血试验证实 RBConstoolsmear 3 吞噬细胞 细菌性痢疾 常见较多的吞噬细胞吞噬细胞可辅助诊断急性细菌性痢疾急性出血性肠炎 可见吞噬细胞溃疡性结肠炎 偶见吞噬细胞 phagocyteonstoolsmear 4 上皮细胞 正常粪便 很难发现结肠炎症 上皮细胞数量增多坏死性肠炎 霍乱 副霍乱 伪膜性肠炎等 epitheliaonstoolsmear 二 食物残渣 正常情况 仅见到无定形的细小颗粒残渣 偶见少量脂肪小滴和淀粉颗粒 食物消化不完全时 不同类型的食物残渣1 淀粉颗粒2 脂肪3 肌肉纤维4 结缔组织5 植物纤维及细胞 1 淀粉颗粒正常粪便中较少见碳水化合物消化不良及腹泻 可大量出现 常伴较多的脂肪小滴和肌肉纤维 granuleamylumonstoolsmear 2 脂肪三种形式 中性脂肪 游离脂肪酸 结合脂肪酸正常情况 粪便中很少见到脂肪排泄增多 脂肪小滴 6个 HP 常见腹泻脂肪小滴大量存在 提示胰腺功能障碍 急慢性胰腺炎 胰头癌 乳糜泻和吸收不良综合征等游离脂肪酸增多 提示脂肪吸收障碍 阻塞性黄疸 fattinessonstoolsmear 粪便残渣 脂肪球呈大小不一圆形折光强的小球珠 淀粉颗粒具有同心性纹或不规则放射线纹的大小不等的圆形 椭圆形或棱角状颗粒 无色 具有一定折光性 粪便中脂肪的检验和鉴别 3 肌肉纤维大量食肉后的粪便 少量肌肉纤维 10个 标准盖片肌肉纤维增多 常见于腹泻 肠蠕动亢进或蛋白质消化不良 4 结缔组织正常情况下结缔组织少见结缔组织增多 胃蛋白酶缺乏或腹泻 connectivetissueonstoolsmear 5 植物纤维及细胞正常粪便中可少量出现 planfibreandcellonstoolsmear 三 结晶 正常粪便 可见到少量磷酸盐结晶 草酸钙结晶和碳酸钙结晶 一般没有临床意义 phosphaticcrystalonstoolsmear calciumcarbonatecrystalonstoolsmear calciumoxalatecrystalonstoolsmear 四 病原生物 1 细菌2 寄生虫卵3 肠道原虫4 酵母菌5 霉菌 1 细菌 正常菌群与菌群失调成人粪便 主要菌群 大肠埃希氏菌 肠球菌和厌氧菌 约占80 少量菌群 产气杆菌 变形杆菌 芽胞菌及酵母菌等 少部分 致病细菌 bacteriumonstoolsmear 霍乱弧菌初筛 米泔样粪便 生理盐水悬滴检查 加入霍乱弧菌抗血清 观察是否制动试验阳性粪便粘液部分 涂片染色后 油镜观察 革兰阴性红色鱼群样排列 逗点状或香蕉样形态的弧菌 应及时报告并培养和鉴定 2 寄生虫卵 正常人粪便没有虫卵肠道寄生虫感染 涂片中可出现相应的虫卵粪便中常见的寄生虫卵 蛔虫卵 鞭虫卵 钩虫卵 蛲虫卵 血吸虫卵 肺吸虫卵 华枝睾吸虫卵 姜片虫卵 绦虫卵等最少观察10个低倍视野 以低倍镜所见虫卵的最低和最高数值报告 常用方法 饱和盐水漂浮法 离心沉淀法 静置沉淀集卵法 3 肠道原虫 常见感染阿米巴原虫 蓝氏贾第鞭毛虫 隐孢子虫 人芽胞子虫等 肠道阿米巴 滋养体大滋养体20 40 m大小 依靠伪足作一定方向移动 见于急性期患者的粪便或肠壁组织中 吞噬组织和红细胞 故又称组织型滋养体 小滋养体 肠腔型滋养体 6 20 m大小 伪足少包囊多见于隐性感染者及慢性患者粪便中 呈圆形 5 20 m大小 成熟包囊具有4个核 是溶组织阿米巴的感染型 具有传染性 溶组织阿米巴 新鲜粪便的脓血粘液部分直接涂片检查滋养体碘液染色检查包囊 Fig10 4 23Entamoebahistolyticatrophozoitcystonstoolsmear 蓝氏贾第鞭毛虫 旅游者 男性同性恋者 胃切除者 胃酸缺乏者和免疫功能低下者易感 可引起慢性腹泻 Fig10 4 24Giardialambliaonstoolsmear 隐孢子虫 条件感染性原虫引起严重腹泻儿童和免疫功能缺陷患者 尤其是艾滋病患者列为艾滋病患者的重要检查项目之一粪便常规直接涂片金胺 酚 改良抗酸染色法 人芽胞子虫 寄生在高等灵长类动物和人类消化道的机会致病性寄生原虫人芽胞子虫与白细胞及原虫包囊形态鉴别 破坏试验 用蒸馏水代替生理盐水涂片迅速镜检 人芽胞子虫遇水即破坏消失 而白细胞与原虫因不易破坏仍可看见 4 酵母菌 粪便中常可见到酵母菌 呈卵圆形 其排列因芽生增殖呈出芽或短链状 粪便中酵母菌与红细胞的区别 5 霉菌 正常粪便中少见 应排除容器污染或粪便在室温下显露过久污染所致 常见应用大量抗菌素所致的肠道菌群失调 引起霉菌性二重感染 mildewonstoolsmear 基层检验科微生物标本的处理 采血时机 在出现临床症状后应尽快抽血作培养 最好在发热初期和高峰或寒战时 原则上应选择在抗菌药物应用之前 对已应用药物而病情不允许停药的患者也应在下一次用药前采血 采血部位 通常采血部位为肘静脉 疑似细菌性心内膜炎时 以肘动脉或股动脉采血为宜 多次采血时 应在不同部位进行 不要从血管插管内采血 切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本 采血次数与间隔 急性感染患者 从两臂分别采2份血样 感染性心内膜炎患者 24h内采血3次 每次间隔不少于30分钟 发热原因不明患者 24 48h后可再采血2次 间隔不少于60分钟 采血方法 采血部位的局部皮肤应严格消毒 将采集的血液注入血培养瓶前 应更换针头或过火消毒针头 血培养瓶口也要消毒 并待酒精挥发后 建议用酒精灯烧灼瓶口 再注入血样 采血量 每次采血量成人5 10ml 婴幼儿1 2ml 培养基与血液之比以10 1为宜 以稀释血液中的抗生素 每增加1ml血量平均提高阳性率3 2 抗凝剂 0 025 0 05 聚茴香脑磺酸钠 sodiumpolyanetholsulfonate SPS SPS具有抗凝抗吞噬抗补体及拮抗某些抗生素的作用 培养条件 视患者的感染 用药情况选用不同的培养瓶 真菌培养可和普通培养共用一需氧瓶 不需要每个血培养都作厌氧培养 若同一次抽血既做需氧也做厌氧 应先厌氧再需氧 黄色 小儿瓶蓝色 未用抗生素需氧绿色 已用抗生素需氧 紫色 未用抗生素厌氧橙色 已用抗生素厌氧 尿液标本 标本采集时间 应在用药前或停药5天后留取标本以晨起第一次尿为宜使尿液在膀胱内停留6 8h以上 给细菌足够的繁殖时间 尿液标本采集方法 中段尿 女性采样前应先用肥皂水或0 1 高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口 男性须翻转包皮冲洗 用0 1 新洁尔灭消毒尿道口 灭菌纱布擦干 弃前段尿 无菌杯收集中段尿 导尿管导尿无菌操作进行导尿可减少尿道污染 对留置导尿者 可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁 用联空针筒的细针斜穿管壁抽吸尿液 或拔去闭式引流的集尿袋 弃去导尿管前段尿液 留无污染的膀胱内尿液数毫升送检 不可从集尿袋的下端管口留取标本 长期留置导尿管者 应在更换新导尿管后留取