预防医学分子生物11习题.docx

RNAi发卡式载体构建及转化1利用反向遗传学研究基因功能的策略有哪些？2RNAi的分子机制。3RNAi 的生物学意义如何？PCR法克隆目的基因全长1 若克隆某基因全长，在进行引物设计时，有哪些需要特别注意的事项？2 一个PCR循环的步骤？3 PCR反应体系的重要组成？序列测定6.简述Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列分析的基本原理，并将下列DNA测序胶片的结果（正向引物测序），从53写出合成链的DNA序列。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质1SDS - PAGE测定蛋白质的分子量的原理是什么？2SDSPAGE是变性条件下的蛋白质电泳，如果进行保持蛋白质天然特性的非变性电泳其与SDS-PAGE有什么主要区别？双向电泳分离蛋白质6.常用的双向电泳，第一向采用技术，根据来分离蛋白质；第二向采用技术，根据来分离蛋白质。免疫印迹检测目的蛋白质的表达1 Western Blotting 检测目的蛋白质表达的原理？Southern杂交2. 探针为什么要进行100 变性处理？4.探针：能够与靶分子特异结合的核酸分子，带有供杂交后检测的合适标记物。5.核酸分子在高于等电点的pH溶液中带电荷，在电场中向极移动。6.核酸电泳时用TAE缓冲液，用MOPS缓冲液（选填：DNA、RNA）。RNA的提取与Northern杂交1RT-PCR反应过程中经常使用哪几种引物？2阐述Northern杂交过程中的主要实验步骤和相关注意事项。3.Northern杂交可以测定总RNA或poly(A)+RNA中特定mRNA分子的（选填：表达丰度、基因拷贝数）。4.名词解释：Northern杂交，探针原位杂交分析1原位杂交、Northern Blot 杂交和RT-PCR均可以检测组织中特定基因的表达，三者有何异同？第十九章 分子生物学常用技术一、 单选题 1. “Sourthern Blotting”指的是 (A) 将DNA转移到膜上，用DNA做探针杂交 (B) 将RNA转移到膜上，用DNA做探针杂交 (C) 将DNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交 (D) 将RNA转移到膜上，用RNA做探针杂交 (E) 将DNA转移到膜上，用RNA做探针杂交 2. 分子杂交试验不能用于 (A) 单链DNA分子之间的杂交 (B) 单链DNA与RNA分子之间的杂交 (C) 抗原与抗体分子之间的结合 (D) 双链DNA与RNA分子之间的杂交 (E) RNA与RNA之间的杂交 3. 探针是经过什么标记的核酸分子 (A) 用放射性同位素标记 (B) 用生物素标记 (C) 用地高辛标记 (D) A、B、C都对 (E) 用抗体标记 4. 下列哪一条在分子印渍技术中不适用 (A) DNA向NC膜转移 (B) 蛋白质向PVDF膜转移 (C) DNA向尼龙膜转移 (D) RNA向NC膜转移 (E) 蛋白质向一号滤纸转移 5. 用于核酸杂交的探针至少应符合下列哪条 (A) 必须是双链DNA (B) 必须是双链RNA (C) 必须是单链DNA (D) 必须是 100bp以上的大分子DNA (E) 必须是蛋白质 6. 核酸斑点杂交试验中可省略的步骤是 (A) 电泳 (B) 核酸样品固定于NC膜 (C) 杂交信号检测 (D) 标记探针 E) 制备样本核酸 7. 免疫印渍技术中不适合应用的步骤是 (A) 聚丙烯酸胺凝胶电泳 (B) 用NC膜或PVDF膜 (C) 靠毛细管作用进行转移 (D) 用同位素标记抗体(E) 用非同位素标记抗体 8. 原位杂交是指 (A) 在NC膜上进行杂交操作 (B) 在组织切片或细胞涂片上进行杂交操作 (C) 直接将核酸点在NC膜上的杂交 (D) 在PVDF膜上进行杂交操作 (E) 在凝胶电泳中进行的杂交 9. 有关DNA链末端终止法的不正确说法是 A) 需要ddNMP (B) 需要ddNTP (C) dNTP：ddNTP的比例要合适 (D) 需要放射性同位素或荧光染料 (E) 需要dNTP 10. 有关DNA序列自动化测定的不正确叙述是 (A) 用荧光代替了同位素标记 (B) 激光扫描分析代替人工读序 (C) 基本原理与手工测序相同 (D) 不再需要引物 (E) 需要与手工序列分析相同的模板 11. 某种遗传性疾病是由一个点突变（无限制性内切酶位点变化）引起，可以 (A) 用DNA单链构象多态性分析突变 (B) 用限制性片段长度多态性分析突变 C) 用 Western Blotting分析突变 (D) 用电泳分析基因组DNA (E) 用电泳分析细胞中的所有蛋白质 12. 免疫印渍技术指的是 (A) 结合在膜上的蛋白质分子与抗体分子结合 B) 结合在膜上的DNA分子与抗体结合 (C) 结合在膜上的RNA分子与抗体结合 (D) 结合在膜上的DNA分子与RNA分子结合 (E) 结合在膜上的免疫分子与DNA的结合 13. 同位素标记探针检测NC膜上的RNA分子(A) 叫做Northern Blotting (B) 叫做Southern Blotting (C) 叫做Western Blotting (D) 蛋白分子杂交 (E) 免疫印渍杂交 14. 用做探针的DNA分子必须 (A) 在杂交前变性 (B) 在杂交前复性 (C) 长于30个核着酸 (D) 短于30个核着酸 (E) 是双链分子 二、填空题 1 只要 DNA 或 RNA 的单链分子之间存在着一定程度的_同源性_ ，就可以在不同的分子间形成_杂合分子_ 。 2 利用_印迹_ 使胶中的生物大分子或大分子的片段_转到膜上_ ，可使之成为固相化分子。 3 存在于 NC 膜上的生物分子可以放到杂交液中，与_探针_ 进行_杂交_ 。 5 Northern blotting 主要用于检测_基因_ 的表达水平以及分析 基因选择性剪接 6 蛋白质的印渍分析，也称为_免疫印迹_ 。7 目前 DNA 序列的手工测定或自动化测定所基于的技术原理为 _ 8 限制性片段长度多态性分析（ RFLP ）是利用_限制性内切酶酶解_ DNA 分子再经_电泳_ 即可检测出突变 DNA 。 9 基因转移技术包括_细胞_ 水平的基因转移，而且可以进行_动物整体_ 水平的转移。 10 在转基因技术中，被导人的目的基因称为_转基因_ ，目的基因的受体动物称为_转基因动物_ 。 11 单链构象多态性分析（ SSCP ）的原理基于 DNA 单链具有_特定构象_ 特点，这种特点的形成取决于_DNA序列_ 。17.RNA干扰过程中三个重要组成元件是 ， ， 和 。18.PCR扩增反应中一个循环的三个步骤依次是 ， ， 和 。19.用于荧光定量PCR标记的Taqman水解探针是在PCR循环中的 延伸 阶段中发光。20 DNA芯片的原理为 ，蛋白质芯片的原理为 。21.常规PCR技术是 对PCR扩增反应的 终产物 进行定性及定量分析；荧光定量PCR技术对PCR扩增反应中 每一循环 的产物进行定量分析。22.PCR反应体系中除了含有Mg2+的缓冲体系外，还要具备 、 和 等四大要素。26.蛋白质双向电泳中的第一向和第二向分别是 和 27. 鉴定生物大分子间的相互作用方法，常用针对蛋白间相互作用的方法 和 ；蛋白，DNA间相互作用的方法为 和 。28常用融合蛋白标签有 和 。三、名词解释题 1 DNA 印迹技术 2 RNA印迹技术 3 蛋白质印迹技术 4 探针（ probe ） 5 基因敲除6 限制性片段长度多态性分析（ RFLP ） 7. DNA 芯片 8.RT-PCR 9.CT值 11.双向电泳12单链多态构象分析（ SSCP ）13.定点诱变技术14.实时定量PCR 15.SiRNA 16.TaqMan探针17.DNA指纹图谱五、问答题 1 核酸分子杂交的主要实验方法有哪些？主要用途是什么？ 2 基因转移和基因剔除技术在医学上可能有哪些用途？ 3 简述 RFLP 和 SSCP 检测基因突变的原理。 4 简述 DNA 末端合成终止法测定 DNA 序列的原理？ 5. PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?7.简述用RNAi技术减低目的基因表达水平的机理？8.酵母双杂交的原理是什么？9.引物是 PCR 反应体系的四大要素之一， PCR 的许多应用都是通过引物设计来实现的，请问引物设计的一般原则是什么？10.标签融合蛋白沉淀法鉴定蛋白相互作用的方法体系？11.EMSA或gel shift原理是什么？方法体系？12.ChIP的原理及方法体系？基因的表达与调控一 选择题1.在真核基因表达的调控中, _调控元件能促进转录的速率。A 衰减子B 增强子 C 阻遏蛋白D TATA 盒2. I在一个可诱导的操纵元中，基因 A 一直表达 B 一般不表达，直到一个信号分子诱导其表达C一直表达，直到一个信号分子关闭其表达D 从不表达.3.在一个可诱导的操纵元中，能够引起基因表达的调节物质称为A 阻遏蛋白B 辅阻遏蛋白 C 诱导分子D 辅诱导分子4.在大肠杆菌中，能够诱导乳糖操纵元表达的效应分子是 A 异构乳糖B 代谢激活蛋白C cyclic AMPD -半乳糖苷酶.5.在乳糖操纵元中，编码-半乳糖苷酶的基因是A lacA B lacZC lacYD lacO6.当lacY基因发生无义突变时，在大肠杆菌细胞中仍能产生的酶是 A-半乳糖苷酶B透酶C转乙酰酶D上面三个全产生7. 当生长在含有乳糖培养基上的大肠杆菌细胞中出现lacI 的产物时，A 阻遏蛋白将结合lac 操纵基因区B-半乳糖苷酶不会产生 C lac 操纵子基因将开始转录D细胞将不能消化乳糖. 8. 在一个大肠杆菌细胞中，当 lacO 基因发生组成型突变时，操纵元基因A 只在乳糖存在时表达B 在乳糖存在时不表达C 在乳糖不存在时不表达 D无论乳糖存在与否均表达. 9. 在lacI大肠杆菌菌株中，在什么条件下乳糖操纵元是表达的A 只在乳糖存在时B 只在乳糖不存在时 C无论乳糖存在与否均表达.D都不是 10. 乳糖操纵元是A 负调控下的可诱导操纵元B 负调控和正调控共同控制的可阻遏操纵元 C负调控和正调控共同控制的可诱导操纵元D负调控下的可阻遏操纵元11.代谢激活蛋白(CAP)与_结合可调节乳糖操纵元的表达A启动子B 阻遏蛋白 C cyclic AMPD 诱导物 12.当大肠杆菌生长在既有葡萄糖又有乳糖的培养基上时，乳糖操纵元处于_控制A 正B 负 C 正和负D 既不正也不负 13.哪一项是细菌操纵元的组成部分？A 启动子B 操纵基因C 结构基因 D上三项均是 14.色氨酸操纵子是 调控A 正 B 负C正和负D既不正也不负15. 色氨酸操纵子的效应物是A异构乳糖B环腺苷酸 cyclic AMP C色氨酸 tryptophanD 辅阻遏物corepressor16. 5-甲基胞嘧啶通常被发现和下面哪种DNA序列相结合?A ATTA B CG C ACTD AC17. 当异构乳糖和阻遏蛋白结合, 一个 _ 发生从而使阻遏蛋白失活.A 突变 B异构效应C阻遏效应D 去阻遏效应18. 当大肠杆菌 Plac 细胞株在含有乳糖的培养基中生长时,细菌A 具有代谢乳糖的能力B 合成等量但没活性的酶 C 不能合成代谢乳糖的酶D 不能存活.19.大肠杆菌特殊细胞株 lacOC, lacZ+ and lacY-. 在不含乳糖培养基中，在细菌细胞中会产生哪种酶？? A 仅-半乳糖苷酶B-半乳糖苷酶和 乳糖透过酶C-半乳糖苷酶，乳糖透过酶和转乙酰基酶D 三种酶均不能产生20. 原核细胞中, 基因调控通常发生在 _ 水平. A转录B 转录后C 翻译D 翻译后 21. 真核细胞中, 当激活调节蛋白结合到启动子区域时 A转录被激活B转录被抑制C翻译被抑制D复制被激活 22. 增强子原件是A 一段特异的DNA调控序列B 一个调节蛋白C 一种mRNA降解酶D 一个mRNA转录本.23. 在真核生物中, 基因的转录调控需要下面A 启动子B增强子C转录因子 D以上全部 24. 转录因子是A 酶B DNA 原件 C DNA 结合蛋白D 诱导物.25. 当和非转录活性基因比较时，转录激活基因具有 _ 水平的DNA甲基化， A 高 B低C 相同D 没有26. IPTG能够诱导-半乳糖苷酶的表达是因为A 刺激乳糖操纵子阻遏蛋白的活性B IPTG与乳糖操纵子结合诱导转录C IPTG与 lacI 基因的产物结合，抑制它的活性D 抑制-半乳糖苷酶的降解 E IPTG作为-半乳糖苷酶的别构效应物，直接刺激它的活性27. 真核细胞参与基因表达调节的调控区比原核细胞复杂是因为A 真核细胞的细胞核具有双层膜B 原核细胞的基因总是以操纵子的形式存在C 原核细胞调节基因表达主要是在翻译水平D 真核细胞需要控制细胞特异性的基因表达E 真核细胞基因组含有太多的重复序列28. 同一个基因在肝细胞中表达的终产物是ApoB-100，而在小肠上皮细胞中表达的终产物是相对分子质量较小的ApoB-48，这是因为同一个基因在不同的细胞中A 使用不同的启动子进行转录B 使用相同的启动子转录，但初级转录物经历了选择性剪接C 使用相同的启动子转录，但初级转录物经历了选择性加尾D 使用相同的启动子转录，但其中一种初级转录物经历了编辑E 表达的终产物（多肽链）经历了不同形式的后加工29. 一种大肠杆菌的突变株在含有乳糖没有葡萄糖的培养基中不能合成-半乳糖糖苷酶，最可能是因为编码哪一种蛋白质的基因无义（Nonsense）造成的？A RNA聚合酶的亚基B RNA聚合酶的因子C 降解物激活蛋白（CAP）D lac 阻遏蛋白E lac转乙酰酶二 填空题1正调控和负调控是基因表达的两种最基本的调节形式，其中原核细胞常用（负）调控，而真核细胞常用（正）调控模式。2操纵子由（调节基因 ）、（结构基因）和（控制元件包括启动子和操作子）三种成分组成。3与阻遏蛋白结合的DNA序列通常被称为（操作子）。4-半乳糖甘酶基因的表达受到（正调控）和（负调控）两种机制的调节。5葡萄糖效应是指（葡萄糖的存在对其他糖类利用的限制）。6操纵子的天然诱导物是（异乳糖），实验室里常用（IPTG）作为乳糖操纵子的安慰诱导物诱导-半乳糖苷酶的产生。7原核细胞DNA的甲基化位点主要是在（GATC）序列上。8、基因敲除即是（ ），它是研究（ ）的一种反向遗传学方法。9 请把左侧的术语与右侧的描述匹配起来，每个术语的描述只有一个是正确的。A锌指结构域（1）由螺旋转交螺旋和一个识别螺旋组成BLeu 拉链结构域C HTH结构域（3）两个螺旋结构域通过亮氨酸连接D碱性结构域（4）形成需要两个半胱氨酸和两个组氨酸EHLH 结构域（5）由许多碱性氨基酸组成F激活结构域（6）在两个螺旋间形成二聚体，中间由一个环隔开（7）由许多酸性氨基酸组成答案：A （4）；B （3）；C（1）；D（5）；E（6）；F（7）； 三 简答题1 乳糖如何诱导-半乳糖苷酶、透过酶、转乙酰基酶合成的？为什么在葡萄糖存在的情况下，这一生物学事件不能发生？答案：当向大肠杆菌细胞添加乳糖时，通过对这三种酶的结构基因上游的单一启动子的诱导而致使这三种酶能够快速合成。这三个基因都是乳糖操纵元的组成部分，作为一个转录单元而被转录。当加入乳糖后，乳糖被代谢（异构化）形成异乳糖，结合在阻遏蛋白上。未结合异乳糖的阻遏蛋白能够结合在操纵子上而阻止转录。因此，因此，乳糖操纵元通常处于负调控机制。当异乳糖与阻遏蛋白结合后，阻遏蛋白失活而不能再与操纵子结合，也就不能阻止转录，结果，RNA聚合酶与启动子结合，起始能够编码这三种酶的一条mRNA的转录。-半乳糖苷酶将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖（半乳糖在随后的酶促反应步骤中被转化为葡萄糖）。因此，如果培养基中存在葡萄糖，诱导乳糖操纵元的打开就是多余的。葡萄糖通过正调控机制阻止乳糖操纵元的诱导。在这种代谢产物阻遏的过程中，葡萄糖会使细胞中cAMP的含量大幅度降低，对于处于诱导状态的乳糖操纵元而言，还必须要求cAMP与CAP（代谢基因激活子蛋白）形成复合体，结合在乳糖启动子上游的CAP结合位点，激活转录。在缺少cAMP的情况下，就不可能存在cAMP-CAP复合体，转录也就不能被激活。2当操作元被激活后，会表达产生多顺反子mRNA，什么是多顺反子mRNA？从细胞功能方面考虑，多顺反子mRNA具有什么优点？答案：多顺反子mRNA含有编码多个蛋白质的信息。多顺反子mRNA是由包含多个可编码的结构基因的操纵元转录形成的，编码的产物在同一生化途径中起作用。通过利用这样的多顺反子mRNA，细胞可以对同一代谢途径进行协同调节。但由于使用多顺反子mRNA，单个调节信号就可诱导同一代谢途径中一组酶的同时合成。3有一大肠杆菌突变株，不管诱导物是否存在均能合成-半乳糖苷酶，怎样的遗传缺陷会导致这种表性效应的出现？答案：一种可能是阻遏蛋白与诱导物结合，使阻遏蛋白不能再与操作子结合（例如，调节基因发生突变，产生无功能的阻遏蛋白）；另一种可能是在操纵子区域发生碱基对的改变，致使阻遏蛋白不能识别操纵子（例如操纵子发生组成型突变Oc）。6 大肠杆菌的代谢激活蛋白（CAP）基因突变会对野生型的乳糖操纵元的表达产生怎样的影响结果？答案： CAP与cAMP形成的复合物可以促进RNA聚合酶与启动子的结合。只有在没有葡萄糖、且操纵子没有被阻遏蛋白占据的情况下，RNA聚合酶才能与启动子的结合（例如也缺少乳糖）。假如CAP基因突变，则无CAP-cAMP复合体结合在CAP位点，在这种情况下，NA聚合酶就不能识别启动子并与之结合，操纵元就不能被表达。7 乳糖操纵元是可诱导的操纵元；色氨酸操纵元是可阻遏的操纵元。请讨论这两种类型操纵元的区别。 8I 当细胞内具有较高浓度的色氨酸时，色氨酸操纵元只能转录合成一段较短的前导转录本，而结构基因不被转录，这是转录的弱化作用，是由前导序列中两个连续的色氨酸密码子介导的。如果色氨酸密码子UGG突变为终止密码子UAG，在色氨酸操存在或不存在两种情况下，将对色氨酸操纵元的调控机制产生怎样的影响，并加以解释。答案：9试写出一个基因可产生不同的表达产物的所有可能机制。答案：使用不同的启动子进行转录；前体mRNA的选择性加工；前体mRNA的选择性加尾；mRNA编辑；翻译后水平的选择性加工。10假定有一种大肠杆菌，其甲硫氨酸操纵元只由衰减子机制调控而没有阻遏蛋白。在这种操纵元模型中，甲硫氨酸衰减子同大肠杆菌的色氨酸衰减子机制十分类似，在mRNA链上衰减子的部分序列如下：5- AAAAUGAUGAUGAUGAUGAUGAUGAUGGACUAA -3翻译的起点位于这一序列的上游，且给出的序列是一正确的阅读框。当mRNA发生下列情况的突变时，大肠杆菌的甲硫氨酸操纵元的表达情况如何（组成型、野生型、或Met）？并请说明原因。（1）斜体的A缺失；（2）斜体A及带下划线的A都缺失；（3）序列中的前三个A都缺失。答案：（1）组成型表达UGA：因为斜体A缺失后会引起移框突变，由原来的AUG、AUG-等等变为UGA、UGA-等等。UGA是终止密码子，所以衰减子不能继续翻译，结构基因可继续转录。 （2）Met：当斜体A及带下划线的A都缺失后，同样会引起移框突变，由原来的AUG、AUG-等等变为GAU、GAU-等等，GAU是天冬氨酸密码子，这样，即使在培养基中甲硫氨酸的含量很低，衰减子序列的翻译也会继续下去，操纵元的结构基因的转录就会终止。（3）野生型：当前三个A都缺失时，阅读框不会发生改变。11原核生物的基因与真核生物的基因在组织形式和表达方式方面有哪些主要的区别？答案： 原核生物的基因与真核生物的基因在结构、RNA加工过程、以及转录与翻译是否偶联等方面存在着差异。结构：原核生物的基因包括上游的启动子、下游的终止子以及中间的RNA编码序列。真核生物的基因也具有这些特征，但其启动子要复杂的多，与启动子相邻或相距较远的增强子和沉默子元件会对真核基因的转录产生较大的影响。真核生物的基因是具有内含子的割裂基因。原核生物的mRNA多