抗原抗体反应的特点2.ppt

第二节抗原抗体反应 抗原抗体反应的化学本质抗原抗体反应的特点影响抗原抗体反应的因素 抗原抗体反应的化学本质 结构基础抗原抗体的结合力反应过程 抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合不形成牢固的共价键 通过非共价键结合这种弱的结合力涉及几种分子间的作用力 一 抗原抗体结合力 一 抗原抗体结合力 1 静电引力 2 范德华引力 3 氢键结合力 4 疏水作用力 静电引力 库伦引力 electrostaticforces coulombicforces 概念 抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互的引力 引力的大小与两个相互作用基团间的距离的平方成反比 平均键能约为20 9kJ mo1 范德华引力 VanderWaalsforces 概念 抗原和抗体相互接近时 由于分子的极化作用而出现的引力 结合力的大小与两个相互作用基团的极化程度的乘积成正比 与它们之间距离的7次方成反比 键能约为4 2 12 5kJ mol 这种引力的能量小于静电引力 具有特异性 概念 供氢体上的氢原子与受氢体原子间的引力 氢键结合力 hydregenbondforces 供氢体 羧基 氨基和羟基 受氢体 羧基氧 羧基碳和肽键氧等 能的大小取决于氢键的方向 氢键具有高度的方向性 氢键结合力与供氢体和受氢体之间距离的6次方成反比 键能约20 9kJ mol 疏水作用力 疏水键 概念 两个疏水基团在水溶液中相互接触时 由于对水分子排斥而趋向聚集的力 抗原决定簇与抗体上的结合点靠近 互相间正 负极性消失 亲水层立即失去 此力在抗原抗体反应中的结合是很重要的 提供的作用力最大 约占总结合力的50 抗原抗体结合力示意图 抗原 抗体 氢键结合力 ON ON HH 静电引力 范得华力 疏水作用力 排斥的水 二 抗原抗体亲和性 affinity 亲和性是抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间的相适应性而存在着的引力 这是抗原与抗体之间固有的结合力 亲和力 avidity 是指反应系统中复杂抗原与相应抗体之间的结合能力 亲和力与亲和性 抗体的结合价和抗原的有效决定簇数目相关 亲和力越大 抗原抗体结合越牢固 亲和常数 亲和常数K K值大的抗体与抗原牢固结合 不易解离 说明该抗体有高亲和力 抗体与抗原结合是可逆的反应 在平衡时其 血清学反应条件下 抗原抗体均带负电荷 使极化的水分子在其周围形成水化层 成为亲水胶体 三 亲水胶体转化为疏水胶体 当抗原与抗体结合后 表面电荷减少 水化层变薄 而且由于抗原抗体复合物形成后 与水接触的表面积减少 由亲水胶体转化为疏水胶体 在电解质作用下 各疏水胶体之间靠拢 形成可见的抗原抗体复合物 亲水胶体转化为疏水胶体示意图 亲水胶体 疏水胶体 转化 NaCl 可见反应 抗原抗体反应的特点 1 特异性 2 比例性 3 可逆性 一 特异性 specificity 概念 抗原分子 只能与由它刺激所产生的抗体结合而起反应的专一性能 一 特异性 决定因素 由抗原决定簇和抗体分子超变区之间空间结构的互补性决定的 抗体分子N端可变区形成3nm 1 5nm 0 7nm的槽沟 只有与其空间结构互补的抗原决定簇才能如楔状嵌入 交叉反应 crossreaction 两种不同的抗原物质具有部分相同或类似结构的抗原决定簇 则可与彼此相应的抗体反应 特异性示意图 最适比 optimalratio 或等价点 equivzlencepoint 最迅速出现沉淀时的抗原抗体的浓度比或量比 二 比例性 proportionality 等价带 equivalencezone 抗原与抗体分子比例合适的范围 带现象 Ag与Ab比例不适而不出现可见反应 前带 prozone 抗体过量时 后带 postzone 抗原过量时 比例性示意图 抗体过量 比例合适 抗原的量 抗原过量 抗体沉淀的量 前带 等价带 后带 三 可逆性 reversibility 概念 是指抗原与抗体结合成复合物后 在一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性 解离后抗原抗体仍保持原有特性 一定条件 低pH 高浓度盐等 常用于解离抗原抗体复合物的物质有 3mol L硫氰化钾 pH2 40 1mol L甘氨酸 7mol L尿素等 抗体 混有SPAg 抗体 SPAg 抗体 SPAg 分离剂 一 抗原抗体结合 二 分离抗体 可逆性示意图 抗体 抗原抗体反应影响因素 一 反应物自身因素 抗原 1 理化特性2 Ag决定簇数量3 Ag决定簇种类 抗体 1 来源2 特异性与亲和力3 浓度 二 环境条件 电解质 0 85 NaCl 酸碱度 pH6 9 温度 15 40 第三节抗原抗体反应类型 1 沉淀反应2 凝集反应3 补体参与的反应4 中和反应5 免疫标记 表 抗原抗体反应的基本类型表反应类型实验技术检测方法敏感度 沉淀反应液相沉淀试验观察沉淀 检测浊度 琼脂凝胶扩散观察扫描沉淀线或环 凝胶电泳技术或峰或弧 补体参与反应补体溶血试验以裸眼或光电比色仪 补体结合试验观察测定溶血现象 免疫标记技术荧光免疫技术检测荧光现象 放射免疫技术检测放射性 酶标免疫技术检测酶底物显色 发光免疫技术测定发光强度 生物素 亲合素技术结合其它标记技术